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软骨发育不全一家系成纤维细胞生长因子受体3基因G1138A突变研究1

文章来源:中华实用儿科临床杂志发布日期:2017-01-11浏览次数:290

【摘要】 目的检测和分析一先天性软骨发育不全(ACH)家系4人成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)基因突变位点,并观察重组人生长激素(rbGH)对ACH患儿身高的改善作用。方法采集该家系成员4人外周血样本,应用PCR-DNA测序方法,对该家系各成员FCFR3基因第10号外显子的核苷酸序列进行测定,并对先证者给予rhGHH[0.15 U/( kg·d)]治疗。

结果  DNA测序显示该家系中患儿一患儿母亲及患儿姐姐FGFR3基因第10号外显子上均发生c.1138G>A杂合突变,使得其所编码蛋白FGFR3的第380位氨基酸由甘氨酸变为精氨酸,其父亲第10号外显子未发生突变;给予rhGH治疗6个月,先证者身高增加了3.8cm。

结论  FGFR3基因跨膜区1138位核苷酸G>A转换突变是该ACH家系的主要发病原因,说明了该突变为热点突变。 在该家系中,先证者母亲表现为新发突变,然后遗传给其2个女儿。rhGH对ACH患者的身高增长近期疗效较好。

【关键词】先天性软骨发育不全;成纤维细胞生长因子受体3;突变;重组人生长激素

软骨发育不全(ACH)是临床上较常见的一种遗传性矮小症。活产婴儿的患病率为0.5/10 000~1.5/10 000,其中80%~90%的患者为散发[1-2]。典型的临床表现为短肢型身材矮小、头大、前额和顶骨圆凸、马鞍形鼻梁、三叉手、臀部后翘、走路呈摇摆步态,智力及性发育正常。ACH是由于软骨内成骨缺陷所致,研究表明几乎所有ACH患者成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)跨膜结构成都存在突变,95%以上的患者在FGFR3跨膜区380位点上甘氨酸突变成精氨酸(G380A).个边为G375C突变[3-4]。本研究对就诊深圳市儿童医院内分泌科一家系中3例临床确诊为ACH患者及其家系成员进行FGFR3基因测序;并对其中l例患儿予重组人生长激素(rhGH)治疗,观察rhGH对ACH患儿身高的改善作用。

1资料与方法

1.1临床资料先证者,女,9岁,身高97.5cm;头火、前额圆凸、鼻梁下陷、四肢短粗、臀部后翘、0型腿,走路呈摇摆步态,智 力发育正常。X线检查表现:颅底较小,而颅骨相对较大,前额突出;腰段脊柱后凸,尾椎明显后翘,腰椎椎间弓间距逐渐变窄;骨盆较小,髂翼呈方形,髋臼呈三叉戟状改变,坐骨大切迹变小呈鱼口状;肋骨短而宽;掌指骨短粗,干骺端变宽,呈喇叭口状等。骨龄8岁3个月,肝肾功能、甲状腺功能、血脂6项、电解质(钾、钠、氯、钙、镁、磷)均正常,空腹血糖4.67mmol/L,8:00 AM皮质醇0. 624μg/L,甲状状旁腺素5.2pmol/L,25-羟基维生素素D15 pg/L(正常值20~100 pg/L),类胰岛素生长因子-1295pg/L,生长激素激发试验:生长激素峰值25pg/L(30min);垂体MRI平扫加增强:形态及大小未见异常,垂体高度3.1mm,垂体柄位置居中,垂体强化均匀,未见异常强化灶。先证者母亲,40岁,身高115 cm;其姐姐,12岁,身高114 cm(先证者母亲及其姐姐外形与先证者 极其相似);其父,46岁,身高170Cm,智力正常。经深圳市儿童 医院医学伦理委员会及患儿家长同意,对其全家4人进行相关基因检测


1.3 方法 应用过柱法( QIAamp Blood DNA Mini Kit,QIAGEN, 美国)提取外周血DNA,应用Primer Premier 5.0软件针对FGFR3基因的第10号外显子编码区设计引物,应用2×PCR MasterMix聚合酶(北京天根生化科技有限公司)进行PCR扩增(ABI9700型PCR仪,Life technology,美国),然后对PCR产物进行直接测序(ABI3500测序仪,life technology,美国),并与参考序列 (NM-000142.4与NG_012632.1)进行比较,从而发现可能存在的基因突变(DNA测序由广州金域医学检验中心有限公司测定)。

1.4 thGH治疗先证者给予thGH(粉剂,长春金赛药业有限责任公司生产,生产批号:201301003)0.15 U/( kg.d),每晚睡前 皮下注射,治疗6个月。

2结果
2.1 FGFR3基因测序分析应用PCR-DNA测序方法,对患儿、 患儿父母及患儿姐姐的FGFR3基因的第10号外显子进行测序, 发现患儿、患儿母亲及其姐姐的第10号外显子上均发生c.1138G>A杂合突变,使得其所编码蛋白FGFR3的第380位氨基酸由甘氨酸变为精氨酸,其父亲的第10号外显子未发生突变,见图2。

2.2 thGH治疗结果 先证者治疗6个月后,身高增长至 101.3 cm(增长了3.8 cm),复查空腹血糖4.6 mmol/L、空腹胰岛素7.6 IU/L、糖化血红蛋白4.8%,肝肾功能及甲状腺功能均正常。