苯丙酮尿症患者32例家系基因突变研究 2

轻度PKU AV =4，轻度HPA AV =8。再通过2个基因突变的AV总和值，对生化表型进行 PKU预测：AV为2时为经典型，AV为3和4时为中间型，AV为5、6和8时为轻型，AV为9、10、12和16时为轻度高苯丙氨酸血症( MHP)。

2结果
2.1患儿PAH基因突变位点检测结果   32例PKU患儿共检测出61个突变位点，33种突变基因，突变检出率为95.31010（61/64个），其中30个缺失突变(49.2%)． 16个剪接突变( 26.2%)，14个无义突变(23.0%)，个缺失突变(1.60/0)。本研究发现4个新的突变基因位点，分别为c．699C>G，c．265C>T，c．722G>A和 c．1194A>G。结果见表1。

2.2 32例家系样本验证情况  对32例PKU患儿及其父母的血液PAH基因检测结果显示，27例患儿的2个 致病突变位点皆遗传自父母。1例家系样本由于缺少父亲血液样本，故只检测到患儿和母亲的突变位点（其中 患儿的2个致病突变位点中，有1个致病突变位点遗传 自母亲）。4例家系样本中只检测到患儿和父亲或母亲一方的部分突变位点。 表1无锡地区苯丙酮尿症人群苯丙氨酸羟化酶基因突变类型Table l Mutation of phenylanine hydroxylase gene identified with phenylketonuria public in Wuxi region
2.3基因型与表型的关系  部分突变类型无AV评分， 32例中仅21例采用AV评分法行基因型预测生化表型。21例通过AV预测的表型与实际生化表型的一致 率为38.0%（8/21例），其中预测表型为中重度的与实际生化表型的一致率为92.3%(12/13例），轻度的与实际生化表型的一致率为50. O%（4/8例）。结果见表2。

 3讨论
PKU的致病基因PAH由编码区的13个外显子和非编码区的12个内含子组成，当编码区及其两侧内含子有基因突变发生时，会引起PAH的功能减低或缺失， 从而导致相应的临床表现。中国人PAH基因突变集中在外显子3、6、7、11与12，其中以外显子6和7发生突变为多见[9-12]，本地区PKU患儿常见致病突变位点为：c.721C> T,c. 1068C> A,c.611A> G,c. 1197A>T,c.728G>A，e.331C >T和c.442-IG>A，较常见突变位点为：

c.1223G>A，c．781C>T，c.770G>rr和c.1238G>C，与文献报道的中国汉族人、北方人PKU突变图谱结果相符合[6,13]。这些突变位点主要分布在外显子3（6例）、6（6例）、7（18例）、11（12例）、12（5例）卜，其中以外显子7上基因突变为集中，突变频率高的基因是c.721C >T(ll%)，第2位的是c.728C>A(50/0)。本研究还发现4个新的突变基因位点，分别为c. 699C>G、c.265C >T、c.722G>A和c.1194A>G。其中c.699C>G位点为报道，经过相关查询在PAHdb及人类基凶突变数据库(HGMD)均未有相关记载，该突变发生在编码区，改变了氨基酸的构成，作者认为其可能与疾病严重程度相关，具体该新突变对PAH蛋白功能的影响，需要将其在体外表达系统中表达，以定性定量地判断突变对酶活性的影响，这将足下一步的T作计划。而c．265C >T、c．722G>A和c．1194A>G位点为汉族人口中发现报道，丰富了我国PAH基因突变数据库。

PKU患儿遗传基因来源于父母双方各自携带的致病基因，通过家系样本验让的方法，对可能的致病突变位点进行研究，有助于尽早发现患儿的致病位点，为尽早确诊和治疗提供条件，尤其在罕见突变为点和新致病位点发现中起很大作用。本研究采用家系验证的方法提示PKU患儿PAH基因突变绝大多数分别来自父母双方，但也有例外，患者只与父亲或母亲一方有相同的突变位点，而父母另一方未找到突变位点，且患者表现为巾重度PKU，而父亲或母亲为健康表型，认为除PAH基因型是决定PKU生化代谢表型的重要因素外，还存在一些其他修饰因子的作用，需进一步研究证实。

 目前主要通过新生儿遗传代谢病筛查早期确诊PKU患者，早期开始低PHE饮食治疗，将血PHE水平维持在理想范围，但是由于存在个体差异，每个患儿从确诊到获得佳治疗方案通常要经过一段时间的摸索，这期间常会出现血PHE水平异常波动，对患儿产生不利影响。本研究显示通过AV预测中重度PKU基因型和表型有较好的一致性，可为临床制定PKU患者个体化治疗方案提供重要的理论依据，与天津的一项研究相似[14]本研究也发现部分患者基因型和临床严重度不相符，特别是轻度PKU患者，可能与PKU临床严重度不仪与突变位点有关，同时还受其他一些因素的影响[15]。 本研究采用下一代测序技术，并结合家系验证的方式，为后期PKU患者的基因确诊和治疗提供了很好的技术方法和思路，也为本地区PKU的分子流行病学研究和预防提供了理论依据。

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