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长链非编码RNA HOTAIR在乳腺癌细胞中的表达及其功能

文章来源:中华实验外科杂志发布日期:2017-08-03浏览次数:128

长链非编码RNA( IncRNA)是近年来发现的一类长度在200~100 000 nt的RNA分子,该RNA虽然不编码蛋白质,但其通过自身复杂的结构和庞大的种类发挥着包括表观遗传学调
控在内的多种生物学调控功能‘1]。HOTAIR是新近发现的具有较多生物学功能的IncRNA,其参与了多种肿瘤的侵袭转移过程。我们以人乳腺癌组织及人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,采用小干扰RNA( siRNA)技术下调HOTAIR的表达,探讨HOTAIR在人乳腺癌中的生物学功能。
一、资料与方法

1.组织标本:手术切除的乳腺癌组织38例为研究对象,全部为女性,平均年龄( 55.4±12.6)岁,年龄范围33—76岁。患者术前均未接受过放化疗等新辅助治疗。38例患者中按国际抗癌联盟( UICC) TNM分期标准:I期7例,Ⅱ期25例,Ⅲ期6例。手术标本切除后立即放人事先准备好的液氮罐中冷冻,再将组织放置于- 80℃冰箱保存。
2.细胞与试剂:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231购自中国科学院上海细胞库;SYBR@ Premix Ex TaqTM购自TaKaRa公司;RNA提取试剂盒RNeasyTM Mini试剂盒购自TaKaRa公司;转染试剂Lipofectamine 2000购自Life Technologies公司。
3.实时荧光定量聚合酶链反应( FQ-PCR):采用Trizol提取组织及MDA-MB-231细胞总RNA。应用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA,采用SYBR Green Master Mix,在ABI 7500 96孔FQ-PCR仪上进行实验,定量检测HOTAIR的表达情况。
4.Transwell实验:MDA-MB-231细胞5×l04个细胞/孔放入Transwell上室内,下室加入600μl含10%胎牛血清的培养基。37℃培养24—48 h后,镜下观察穿过Transwell小室的细胞数目。
5.统计学方法:应用Stata 12.0统计软件分析,计量资料采用均数±标准差(x+s)表示,组间比较采用配对t检验,以P<0. 05为差异有统计学意义。
二、结果
1.HOTAIR在乳腺癌组织中的表达:38例乳腺癌组织和配对癌旁组织中HOTAIR的相对表达量分别为8.12±4.28和5. 24±3.19,癌组织显著高于癌旁组织(t=3.369,P=0.001),
2.HOTAIR与乳腺癌细胞增殖:乳腺癌细胞MDA-MB-231转染针对HOTAIR siRNA及无关序列后培养96 h后检测A 490值分别为1. 22±0.14和1.31±0.17,差异无统计学意义(t=
0. 910,P=0. 390)。
3.HOTAIR与乳腺癌细胞迁移:乳腺癌细胞MDA-MB-231转染针对HOTAIR小干扰RNA及无关序列后穿膜细胞分别为( 178.6±36.8)和(256.8±58.7)个,差异有统计学意义(t=2. 520.P=0.036)。
三、讨论
HOTAIR是近发现的一类长链非编码RNA,并被认为参与多种肿瘤的侵袭转移过程。Nakagawa等[2]对HOTAIR在肺癌转移中的作用进行了研究,表明HOTAIR在晚期肺癌及肺癌转移患者中呈高表达,体外实验证明高表达HOTAIR的肺癌A549细胞株转移能力增强,而沉默HOTAIR表达会降低A549的侵袭能力。在本研究中,我们以人乳腺癌组织及人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,采用小于扰RNA技术下调细胞中HOTAIR的表达,探讨HOTAIR在人乳腺癌中的表达及其生物学功能。研究结果显示,癌组织中HOTAIR的表示水平显著高于癌旁组织,提示HOTAIR可能与乳腺癌的发生发展有关;小干扰RNA下调HOTAIR表达后乳腺癌细胞增殖能力无明显变化,而乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移能力显著降低。我们认为,HOTAIR在人乳腺癌组织中呈高表达,与乳腺癌的发生发展有关,且其可能参与了乳腺癌细胞的侵袭转移。