微小RNA-542-3p在膀胱癌细胞增殖、迁移中的作用研究

微小RNA( miRNA，miR) -542-3p是近年来研究的一个非编码RNA，文献报道其可抑制肠癌细胞的迁移能力…。本研究旨在探讨其在膀胱癌中的表达及其生物学功能。
一、资料与方法

1．临床资料：手术治疗的膀胱癌患者36例，术中留取患者癌组织及癌旁组织标本，迅速置入液氮中冷冻，防止RNA降解，然后置入- 80℃冰箱保存待检。36例膀胱癌患者中男22例，女14例，平均年龄( 56.3±16.5)岁，世界卫生组织(WHO)肿瘤分级Gl级15例，G2级12例，G3级9例。国际抗癌联盟( UICC)临床分期标准：Tis/Tl期16例，T2~ T4期20例。肿瘤初发者28例，复发者8例。
2．试剂与仪器设备：Lipofectamine 2000购自Invitrogene公司；m1R-542-3p mimic和control由广州锐博公司合成。7900HT实时定量聚合酶链反应( Real-time PCR)仪购自美国ABI公司；荧光定量PCR试剂盒购自TaKaRa公司。
3．Real-time PCR:提取癌组织、癌旁组织及膀胱癌T24细胞中的总RNA．采用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA，并进行miR-542-3p表达水平检测。 4．细胞计数试剂盒( CCK-8)实验：将转染m1R-542-3p-mimic及miR-542-3p-control的T24细胞按5 000个／孔接种子96孔板，每组设置6个复孔，于接种后24、48、72、96 h，按照CCK-8试剂盒说明，检测细胞增殖。于450 nm波长处测定每组细胞的吸光度(A)值。取6孔平均值为结果，以时间为横轴，A值为纵轴绘制细胞增殖曲线。
5．划痕实验：培养T24细胞的6孔板中转染miR-542-3p—mimlc及m1R-542-3p-control的细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗后，用1 000μl枪头进行垂直划线，一个孔分为上、中、下划3条，用PBS清洗，在显微镜下选取特定位置拍照作为原点。于48 h后分别再次拍照对应位置，作图处理并统计伤痕变化。
6．统计学方法：应用SPSS 17.0统计软件分析，计量资料采用均数±标准差（x±5）表示，组间比较采用t检验，以P <0. 05为差异有统计学意义。
二、结果
1．m1R-542-3p在膀胱癌／癌旁组织中的表达：36对配对癌组织与癌旁组织中m1R-542-3p表达高于正常组织者为7例(19.4%)，而正常膀胱组织表达高于癌组织者为29例(80.6%)，差异有统计学意义(X=5.180，P=o．000)。
2．miR-542-3p与细胞增殖：在膀胱癌细胞株T24转染m1R-542-3p-mimic及m1R-542-3p-control 96 h后其细胞A490值分别为1. 33±0.12和1.21±0.11，差异无统计学意义(t=1.650，P=0. 100)。
3．miR-542-3p与膀胱癌侵袭转移：在膀胱癌细胞株T24转染miR-542-3p-minuc及m1R-542-3p-control 48 h后两组细胞的迁移距离分别为( 318.6±32. 4) μm和(397.2±26.8)μm，差异有统计学意义(f=4. 180，P=0.003)。
三、讨论
miR-542-3p早于2010年被发现，可靶向生存蛋白Survivin的3’端非编码区域（3’-UTR）抑制其mRNA和蛋白表达，从而在肺癌细胞株A549中阻断细胞周期、抑制细胞增殖[2]。此外，m1R-542-3p在肿瘤细胞中加强p53蛋白稳定性、抑制核糖体合成，是其抑制恶性肿瘤发生发展的另一个可能机制。以上研究结果表明miR-542-3p同恶性肿瘤发展密切相关。
本研究结果显示，膀胱癌旁组织高表达频率显著高于癌组织。说明miR-542-3p在膀胱癌的发生发展中可能发挥重要的负向调节作用，其缺失／低表达可能是膀胱癌发生发展的重要因素之一。同时，在膀胱癌T24细胞中过表达m1R-542-3p后，膀胱癌rl24细胞的增殖能力并无明显变化，而其迁移能力明显降低，说明nuR-542-3p能够显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移。