小干扰RNA下调长链非编码RNA TUG1表达对肠癌细胞LoVo增殖、迁移能力的影响

我们探讨TUG1在多株人肠癌细胞中表达情况及其与肠癌细胞生物学功能的关系：
一、材料与方法

1．材料：肠癌细胞株HCT116、HCT8、Hr129、LS174T、LoVo和SW620购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)。Lipofectanune2000购自Invitrogene公司；针对TUG1的小干扰RNA(

siRNA)及无关序列由深圳吉玛公司合成；反转录一聚合酶链反应( RT-PCR)仪购自美国ABI公司；细胞计数试剂盒(CCK-8)购自上海碧云天生物技术公司；Transwell试剂盒购自B&D公
司。
2．实时荧光定量聚合酶链反应( FQ-PCR)：采用FQ-PCR试剂盒将其反转录为cDNA，以甘油醛—3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参，检测TUC1相对表达水平：引物序列如下：TUGl:上游

引物：5’-CTGAAGAAAGGCAACATC-3’，下游引物：5’-GTAGCC-TACTACACCArITI'G_3’：CAPDH:上游弓I物：5’-CTCAACG-GArITTGGTCTGTATI'_3+，下游引物：5’-AGTCITCTGGGTG-
CCAGTGAT-3’。
3．CCK-8实验：分别将LoVo细胞、LoVo-siNC细胞及LoVo-siTUGl细胞以4×l03个／孔接种于96孔板，于接种后24、48、72、96 h，在490 nm波长处测定每组细胞的吸光度(A)值
。
4．Tranwell实验：用100μl无血清培养基配置1×lO 5/ml的LoVo、LoVo-siNC细胞及LoVo-siTUCl细胞，加至Transwell小室上室中，在24孑L板中加入600μl含10%胎牛血清的

培养基。37℃培养48 h后，显微镜下观察各组穿膜的细胞数目。
5．统计学方法：应用SPSS 17.O统计软件分析，计量资料采用均数±标准差（x+s）表示，组间比较采用f检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
1．TUC1在肠癌细胞株中的表达：采用FQ-PCR分别检测293T、HCT8、HCT116、LS174T、HT29、SW620和LoVo肠癌细胞株中TUG1的表达情况，结果显示上述细胞株中TUCI表达水平

分别为0. 56±0.15、1.20±0.21、2.21±0.24、2.56±0.27、2. 89±0.31、3.21±0.33和4.54±0.38，差异有统计学意义(F= 110. 410 ,P=0.000)，LoVo细胞中TUG1表达水平

高。
2．TUG1与LoVo细胞增殖能力：LoVo细胞、LoVo-siNC和LoVo-siTUGl细胞培养48 h后A490值分别为3.74±0.14，3. 56±0.15和2.01±0.12，差异有统计学意义(F=240. 820， P：0. 000)，LoVo-siTUGl细胞增殖能力明显下降。
3．TUG1与细胞侵袭能力：LoVo、LoVo-siNC及LoVo-siTUGl组穿膜细胞数分别为( 126.6±22. 2)、(118.3±24.2)和(45.2±15.1)个，差异有统计学意义(F=23. 040，P=0.000)

，LoVo-siTUGl组穿膜细胞数显著降低。
三、讨论
本研究中，我们对HCT116、HCT8、HI29、LS174T、LoVo和SW620等6株肠癌细胞株进行了TUC1表达水平的检测，结果发现LoVo细胞中TUG1表达水平高。进一步采用siRNA技
术下调LoVo细胞中TUG1表达后发现，LoVo细胞增殖能力明显下降，且细胞的侵袭迁移能力也同时降低。研究结果提示长链非编码RNA TUG1可促进肠癌细胞的增殖与侵袭能力。但
TUG1促进肠癌LoVo细胞增殖和侵袭转移的信号通路并不清楚。因此，下一步应采用免疫共沉淀或RNA-蛋白共沉淀等生物学技术进一步探讨TUC1促进细胞增殖及迁移的分子生物学 机制及信号通路，为开发TUG1为靶点的肠癌靶向治疗药物提供依据[1]。