肿瘤抑制候选基因3在胃癌中的表达及其生物学功能

本研究探讨肿瘤抑制候选基因3( TUSC3)在胃癌组织中的表达并采用小干扰RNA( siRN_N)技术下调胃癌细胞株中TUSC3的表达，探讨其影响胃癌细胞增殖、侵袭和转移的生物学功能。
一、资料与方法

1．病例资料：手术治疗的胃癌患者44例，术前未接受新辅助放化疗，平均年龄(56.8±18.3)岁，男26例，女18例，I／Ⅱ期20例，Ⅲ／Ⅳ期24例，肿瘤位于贲门18例，幽门20例，位于胃体6例，术后证实区域淋巴结转移者30例。
2．细胞与试剂仪器：胃癌SGC-7901细胞株（美国典型菌种保藏中心）；TUSC3兔抗羊IgG抗体（美国Santa Cruz公司）；mRNA反转录试剂盒（日本TaKaRa公司）；ABI 7500实时荧光定量聚合酶链反应( FQ-PCR)仪器（美国ABI公司）。
3．免疫组织化学：免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白，过氧化物酶( SP)法检测胃癌组织及癌旁组织中TUSC3蛋白的表达，具体操作按实验室操作流程进行。
4．FQ-PCR:利用Toyobo公司的SYBR GREEN Realtime PCR Master Mix，在ABI 7500 96孔FQ-PCR仪上进行实验，U6作为内参进行定量分析。
5．Transwell实验：用100¨l无血清培养基重悬SGC-7901细胞并加入Transwell小室上室内，下室加入600μl含10%胎牛血清的培养基。37℃培养24—48 h后观察穿过Transwell小室的细胞数目。
6．统计学方法：Stata 12.0统计软件分析，数据用均数±标准差（x+s）或“例数(%)”表示，组间比较采用￡或x2检验，以P <0. 05为差异有统计学意义。
二、结果
1．TUSC3表达：癌组织和癌旁组织中TUSC3阳性率为分别为22. 7% (10/44)和56.8% (25/44)，癌组织显著低于癌旁组织(X2 =10. 670,P=o.001).

2．TUSC3表达与淋巴结转移：TUSC3阳性组区域淋巴结转移率为52%显著低于阴性组的89.5% (X2=6. 990，P=0. 008)。
3．TUSC3生物学功能：下调TUSC3表达后SGC-7901细胞的穿膜能力明显增强[(98.6±12.4)比( 168.3±18.4)个，t=7. 020，P=0.000]。
三、讨论
TUSC3在人类多种肿瘤中缺少表达，包括胃癌、胰腺癌、非小细胞肺癌等。而在癌旁组织中，其表达水平往往高于癌组织，因而提示TUSC3可能为重要的肿瘤抑制因子…。本研究结果显示，TUSC3蛋白主要表达于胃癌细胞胞质内，呈棕黄色颗粒状。癌组织中TUSC3表达水平显著低于癌旁组织。癌组织与癌旁组织中的差异表达提示TUSC3可能作为重要的肿瘤抑制基因，参与了胃癌的发生与发展过程。进一步分析认为，TUSC3阳性表达与区域淋巴结转移有关。这种相关性可以作为胃癌患者预后不良的参考指标。细胞学研究结果认为，siRNA下调TUSC3基因表达后细胞穿膜能力明显增强。因此，TUSC3与胃癌细胞的迁移有关并可作为预后不良的标志。