本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的三聚氰胺和微孔条上预包被的偶联抗原竞争三聚氰胺抗体
配制样品稀释液:
称取89.5 g Na2HPO4·12H2O ,蒸馏水定容至1000 mL。
湿的宠物食品萃取方法(稀释100倍)
1.匀质样品到布丁状;
2.称取2 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并剧烈振荡;
3.超声萃取1 min,漩涡混合1 min,然后静止5 min,使样品分层;
4.5000 r/min室温离心5 min,用玻璃纤维滤纸过滤上清液,并将其收集于干净试管中;
5.用样品稀释液将滤液20倍稀释;
6.取50 μL进行实验。
干的宠物食品萃取方法(稀释200倍)
1.均质干的宠物饲料样品;
2.称取1 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并剧烈振荡;
3.超声萃取1 min,漩涡混合1 min,然后静止5 min,使样品分层;
4.5000 r/min室温离心5 min,用玻璃纤维滤纸过滤上清液,并将萃取液收集于干净试管中;
6.用样品稀释液将滤液20倍稀释;
7.取50 μL进行实验。
操作说明:
1.将试剂盒从冷藏环境中取出,置于室温(20~26℃)下平衡30min以上,将需用的板条放入支架,按顺序编号;
2.洗液配制:将50 mL浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水稀释至1000 mL备用(或按需量稀释);
3.在标准品孔中加入50 μL标准品,样品孔加入50 μL待测样品,然后每孔加入50 μL抗体(加入标品和样品时无时间差的影响),轻拍混匀,37℃下孵育40 min;
4.倒出孔中的液体,用洗板机洗涤4~6遍;没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中,静置20 s,倒出孔中的液体,将微孔架倒置,在吸水纸上连续拍打3次以上,以保证完全除去孔中的液体,重复操作4~6遍;
5.加入酶标记物100 μL,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min,取出重复洗板步骤;
6.显色:每孔加入底物缓冲液50 μL,再加底物液50 μL,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后,置37℃ 环境中反应10 min;
7.测定:每孔加入终止液50 μL,轻轻振荡混匀.设定酶标仪于450 nm处,测定每孔OD 值,根据标准曲线计算样品浓度。
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