1992年，吩噻嗪染色体和可见光联合作用来灭活袋装血浆的个病毒灭活方法已经被描述，该方法称作Springe法。自1993年，这种方法已经被应用于德国和瑞士的许多红十字输血服务机构。有100多万单位的新鲜冰冻血浆已经被用于临床，收到了良好的临床效果而且没有任何明显的副作用。
百特公司已经简化并改善了亚甲蓝光化学病毒灭活法。
表1 Spring 程序与百特程序的对比
程序数据 | Springe 程序 | 百特程序 |
用于细胞内病毒的灭活或去除的方法 | 用冻融法去除白细胞 | 用0.8微米的过滤器去除白细胞，后进行亚甲蓝光化学处理 |
新鲜冰冻血浆制备需要的冻融法的次数 | 1 | 0 |
每单位新鲜冰冻血浆所添加的亚甲蓝 | 85-120微克 | 74-92微克 |
光源 | 白色荧光灯管 | 白色荧光灯管 |
光照度 | 1小时周期60000lux（37J/cm2）,手动控制 | 30分钟周期33 J/cm2，未处理程序控制 |
光照条件 | 血袋单面进行光照，不需摆动 | 血袋双面进行光照，不需摆动 |
光照的容器 | 采血时用的血袋 | 一次性使用的 |
百特系统的另一个优势是光化学程序的标准化，它用一个预先准备好的袋子，在一个密闭的系统内，向每单位血浆中添加等量的亚甲蓝，并且通过未处理程序控制光照来提供等量的照度。见图1。
这种标准化能提高血浆蛋白的回收，而且这种方法可以被应用于任何血液中心。
此项研究的目的是评估用百特法灭活的血浆在健康志愿者体内的临床和生化相容性。当地的伦理机构同意了该研究。
材料和方法
设计：
该试验是随意组合的。2单位的自体同源新鲜冰冻血浆（或者经过处理或者没有经过处理）经过随机选择被输入到健康的志愿者体内。两周以后，将接受了处理过的血浆的志愿者与接受等量的未经处理的血浆的志愿者进行比较。
亚甲蓝处理
装置是一次性使用亚甲蓝设备，试验编号是GURX0052。每套设备包括PL732转移袋，袋内有10毫升的亚甲蓝，转移袋与一个去白细胞滤器相连接。血浆在无菌状态下连接到装置上，并在重力的作用下通过过滤进入转移袋，转移袋内亚甲蓝的量是74-92µg/单位血浆。缓慢混合后，血浆袋被放入白光照射设备中，在33J/cm2的光照下照射30分钟。
血浆的冰冻和溶解
血浆分离后，溶解的血浆即刻开始输注。每两单位血浆的输注时间是45分钟。两单位血浆输注后，血浆中亚甲蓝的峰值是40-60ng/毫升。
| 组1 | 组2 |
0周 | 分离血浆600毫升 分成两袋，每袋275毫升 用亚甲蓝处理血浆 将两袋亚甲蓝处理的血浆冰冻贮存 | 分离血浆600毫升 分成两袋，每袋275毫升 不用亚甲蓝处理血浆 将两袋未经亚甲蓝处理的血浆冰冻贮存 |
2周 | 分离血浆600毫升 分成两袋，每袋275毫升 不用亚甲蓝处理血浆 将两袋未经亚甲蓝处理的血浆冰冻贮存 溶解并输注在0周内贮存的两单位的亚甲蓝处理的自体同源血浆 | 分离血浆600毫升 分成两袋，每袋275毫升 用亚甲蓝处理血浆 将两袋亚甲蓝处理的血浆冰冻贮存 溶解并输注在0周内贮存的两单位的未经亚甲蓝处理的自体同源血浆 |
4周 | 分离血浆600毫升 溶解并输注在2周内贮存的两单位的未经亚甲蓝处理的自体同源血浆 | 分离血浆600毫升 溶解并输注在2周内贮存的两单位的亚甲蓝处理的自体同源血浆 |
试验结果：
A 受控组与测试组之间有数据上的不同。但是所有的数据在正常范围内并且检测不到会出现的新鲜冰冻血浆的不同效用。
B 关于纤维蛋白原的功能分析等。在任何时间点上都没有显著的区别。
C 在受控组和经亚甲蓝处理的血浆之间没有明显区别。
D 关于凝血酶时间。凝血酶时间提高了大约1秒。但是测试组和受控组没有明显区别。
样品的收集
图示中T00代表：样品收集后，血浆分离前
T0代表：血浆分离后，血浆输注前
T30M代表：血浆输注后30分钟
T1H：血浆输注后1小时
T4H：血浆输注后4小时
T24H：血浆输注后24小时
T4D：血浆输注后4天
分离程序在0周、2周、4周内做3次（见表2）。所有的样品在2小时内检测或者用液态氮瞬间冷冻，并且在做实验前贮存在零下80度环境中。
试验分析
血浆献血者的筛选工作在0周和2周的T00时间，筛选包括传染性疾病（艾滋病、B型肝炎、C型肝炎、人T细胞白血病病毒）和分组的血液以及预料不到的抗体（仅在第0周）。完全安全的筛选工作在第0周的T00时间，第2周和第四周的T00、T30M和T24H，并且包括血色素和血球容积的筛选。血球容积用coulter microdiff 18 进行分析，血浆血色素用一种分光光照度（philips pu 8720 uv/vis）进行测试。血细胞用coulter microdiff18 进行计数，其中血小板用coulter skts j进行计数。血液的化学性（钠、钾、尿素、肌氨酸酐和总蛋白）用hitachi917进行分析。血清丙氨酸氨基转移酶用hitachi 917进行分析。完全的生化筛选工作在第0周的T00时间和第2周、第4周的T00、T30M、T24时间，该项工作包括：活化部分凝血活酶时间，凝血酶原时间，凝血酶时间，Ⅷ因子，Ⅵ因子，纤维蛋白原，用一种凝血分析仪（ACL300血凝度测量器）进行的功能分析。另外，纤维蛋白原用HATACHI910通过免疫分析进行测定。纤维蛋白的降解产品用LATEX产品手动法进行分析。
限制的生化筛选工作在第2周和第4周的T0,T1H,T4H,T4D时间，并包括活化部分凝血活酶时间，凝血酶原时间，凝血酶时间和纤维蛋白原。限制的安全筛选工作在第2周和第4周的DI T4H和T4D时间，并包括血色素，血球容量计，血细胞的计数。补体激活测试在第2周、第4周的T0和T30M时间，并包括C3a,C5a和C1酶抑制剂，所用方法是ELLSA法。百特公司的生化实验室做了补体分析。
高铁血红蛋白和亚甲蓝剂量试验在第2周和第4周的T0,T30MHE T1H时间进行。
检测限值：亚甲蓝：4.1ng/ml
天青A：3.8ng/ml
天青B：5ng/ml
天青C：7.1ng/ml
亚氨嗉：10.7ng/ml
血小板凝聚测试者是6名志愿者，时间是第0周的T00和第2周、第4周的T30M时间。
结果：
受试者：
所有的受试者均在试验之前做出了口头同意，他们接受了献血浆指导，并且对初的医疗检测表示满意，他们都没有检测出任何有传染性病毒。并对那些意料之外的血液抗体进行了筛查。
次血浆分离前，受试者被随机分配到1组和2组，所有的受试者为男性，他们的年龄在20-30之间，体重在61.5-75千克之间。
第0周，所有的个体均被测试。1组和2组在血小板计数，血小板容积，白细胞计数，血细胞比容，血红蛋白，钠，钾，尿素，总蛋白，激活部分凝血活酶时间，凝血酶时间，纤维蛋白原，纤维蛋白分解产物Ⅷ因子Ⅺ因子方面没有区别。数据统计上，2组和1组之间在激活部分凝血活酶时间上有差别，但是，都在正常范围之内。
血浆的分离与亚甲蓝处理
血浆的分离程序以及事故被记录。预定的600毫升血浆可以从所有的受试者得以收集，只要在第0周，第1受试者只能提供509毫升血浆。所有的亚甲蓝处理的血浆均在具体的重量范围之内。所有的血浆均成功的经过亚甲蓝处理。在冻融过程中，两单位血浆被损坏。
医疗观察和副反应
血浆分离程序期间或以后，没有出现抱怨或副反应。不论是在输血过程还在输血后24小时已经4天后，受损血浆或亚甲蓝处理的血浆均与受试者的抱怨无关。
测量的数据
数据的分析
进行了顺序颠倒后的效果测试并做了数据记录。方法如下：1组（第2周-第4周）与2组（第4周-第2周）做比较，没有发现显著的效果。受控输血的数据与亚甲蓝输血的数据（受试者数目=12，第2周，第4周）作比较。
临床数据：在每个时间点上，对血压和脉率做了测量。血浆分离后，血压和脉率有明显降低，随后有恢复到了初始值。受试者与受控组之间没有明显区别。
安全数据
血细胞数量（血小板、白细胞、红细胞）、血细胞比容、血红素在每一时间点上做了测量。血浆分离前、输血后30分钟和24小时后，纳、钾、尿素、总蛋白、血浆血红蛋白被进行了测量。
测试组和受控组在以上任何数据上都没显示储明显不同。血浆分离后，能观察到白细胞数目和血小板数目的降低。分离血浆的输注可能导致血浓缩，这会影响红细胞数，血细胞比容，血红蛋白和总蛋白。没有发现毒性特征。可能由于样品原因，血浆血红蛋白会有偶尔下降。但是两组之间没有区别。没有产生高铁血红蛋白。
凝血数据
激活部分凝血活酶时间、部分凝血活酶时间、纤维蛋白原在每个时间点上均被进行了测试。在血浆分离前、输血后30分钟和24小时均对纤维蛋白原、纤维蛋白讲解产物、Ⅷ因子Ⅺ因子进行了测试。
受控组和测试组在激活部分凝血活酶时间上有数据上的不同。血浆输注后，激活部分凝血活酶时间缩短了1秒。总之，所有数据均在正常范围内，并且检测不到新鲜冰冻血浆输注效果有任何不同。两组之间，部分凝血活酶时间、纤维蛋白原、Ⅷ因子Ⅺ因子在任何时间点上都没有显著的区别。纤维蛋白降解产物一直低于临床可接受的数值。程序以后，所以受试者的凝血酶时间增长了大约1秒，但是测试组和受控组之间没有明显区别。
血小板聚集：不论是亚甲蓝处理血浆的输注还是受控血浆的数值均未检测到到血小板聚集的影响。
补体激活：不论是受控组还是测试组均检测不到补体激活。
亚甲蓝及其衍生物：用于检测血浆中亚甲蓝及其衍生物的样品在T0,T30M,T1H时间从接受了亚甲蓝处理的血浆的志愿者体内的以恢复。所有的检测结果均低于检测限值。
讨论：
用亚甲蓝与可见光结合的方法的生化背景以及这种方法的病毒灭活的效果已为众人所知并且已在其它地方进行了讨论。百特公司将一过滤步骤添加到光化学病毒灭活呈现在用于滤除细胞内有传染性的物质，因为细胞内有传染性的物质对已知的灭活方法有抵抗作用，而该方法能够滤除这些物质，所以，百特公司改善了病毒灭活方法。更重要的是，该方法去掉了冰冻步骤加上光化学程序的标准化，所以，该法能够提高凝血因子的回收。
该研究旨在评价用百特公司程序经亚甲蓝光化学病毒灭活方法处理的血浆在健康的志愿者体内的临床和生化相容性。输注的血浆为每千克体重7.3-8.8毫升。因为血球比容的均值为43%，健康的成人的血量为每千克体重71毫升，所以可以有大约20%的血浆被新鲜冰冻血浆所取代。尽管这个量低于每千克体重12-15毫升（这是英国目前所建议的治疗的范围值）但是，这个量却可以使我们能够观察到亚甲蓝处理血浆的即时或延后的毒性效果，因为此项研究的设计足够敏感可以检测到由于分离血浆的输注而引起的测量数据的改变。我们检测到亚甲蓝处理血浆对凝血数据没有消极影响。没有观察到补体激活。用一种标准方法检测血小板聚集，没有发现有激活现象。临床数据也没有被影响。该项研究的设计对由于亚甲蓝程序引起的改变非常敏感，所以我们认为的由亚甲蓝所引起的能够影响凝血蛋白的任何改变都会被识别出。我们认为没有改变是个非常重要的信息，因为即使是很小的改变都会对病人的恢复产生消极的影响，而且亚甲蓝处理血浆的有效性也好大大降低。更重要的是，亚甲蓝处理法不会对血浆系统产生临床上的明显的消极影响。
在目前的研究中，即使用敏感的方法来检测残留的亚甲蓝和衍生物，血浆中仍然不存在残留亚甲蓝或它的衍生物，或者至少是，血浆输注30分钟和1小时后，残留亚甲蓝和它的衍生物低于检测限值。从前期临床数据和临床数据来看，亚甲蓝能够迅速地从循环系统中消失，亚甲蓝的降低是由于粪便的排出。由于亚甲蓝在血液中不会堆积，所以在血浆交换过程中能达到的大浓度将会与新鲜冰冻血浆中的亚甲蓝浓度相等，大约是每毫升150纳克，而临床可接受的亚甲蓝的量大是每毫升15毫克，是亚甲蓝血浆输注的10000倍 。在目前的研究中，可以用亚甲蓝在血液中的降低来弥补亚甲蓝及其衍生物检测手段的缺失。该研究确信：亚甲蓝处理的血浆可以被安全地输注，因为它对凝血蛋白没有负面影响，临床上也没有任何显著的负面影响。
因此，我们认为，以上所描述的在一个密闭的系统内对单位血浆进行处理的亚甲蓝-光照病毒灭活法是一个有价值的转变，它的优势体现在该系统包含一个能够滤除任何细胞内有传染性的物质的过滤步骤。
上述资料可以说明亚甲蓝处理的血浆可以被安全地输注，因为它对凝血蛋白没有负面影响，临床上也没有任何显著的负面影响。
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