电针及针药结合对PD大鼠行为学及DA含量的影响

【摘要】 ［目的］观察电针及针药结合对帕金森病大鼠的行为学指标的影响，及其对纹状体内多巴胺含量的影响。［方法］纹状体内注入6OHDA制作PD大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组、手术组，将造模成功的手术组大鼠随机分为电针治疗组、美多巴治疗组、针药结合组、模型对照组。检测各组实验大鼠的旋转行为，并通过高效液相电化学法测定各组实验大鼠纹状体内多巴胺含量。［结果］对各组实验大鼠行为学检测及脑纹状体内多巴胺的含量检测结果显示，与模型对照组及假手术组比较，各治疗组差异显著（P<0.05）；各治疗组间比较无差异。［结论］说明电针疗法、、针药结合疗法有与口服美多巴相似的疗效，可以有效提高纹状体内DA的含量，改善帕金森病大鼠的旋转行为。

【关键词】 帕金森病；电针；针药结合；多巴胺

　　Abstract：［ob[x]jective］Observing the effect of the electroacupuncture on the rotational behavior and the content of dopamine in striatum to approach therapeutic effect.［Methods］The rat model of PD was made by injecting the 6hydroxy dopamine into the striatum from four points.The rats were measured the rotational behavior and detected content of dopamine in the striatum by HPLCECD.［Results］The curative effect was good contrasted with the control group.［Conclusion］EA increased concentration of dopamine in the striatum obviously，improved the rotational behavior，which could control the development of PD like the role of Madopar.

　　Key words：Parkinson’s disease; electroacupuncture; medication and acupuncture; dopamine

　　帕金森病是中老年人常见的一种以震颤、肌肉强直、运动弛缓为临床特征的中枢神经退行性疾病。其主要发病机制之一是黑质纹状体多巴胺神经递质水平低下，纹状体多巴胺含量显著减少，从而对锥体外系的运动调节功能失调［1］。本研究旨在探讨电针对PD大鼠DA含量的影响，以及电针与美多巴之间的相互作用，为临床治疗提供依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物

　　选用行为学检测无异常的雄性SD大鼠，体重（220±10）g，由浙江中医药大学实验动物中心提供。

　　1.2 主要试剂

　　6OHDA、APO、DA标准品、高氯酸、EDTA、1辛烷磺酸钠、TEA均购自美国Sigma公司。

　　1.3 实验方法［2］
　　
　　1.3.1 动物分组

　　将大鼠随机分为假手术组、手术组，将造模成功的手术组大鼠随机分为电针治疗组、美多巴治疗组、针药结合组、模型对照组，每组8只。

　　1.3.2 造模方法［3］

　　参照《大鼠立体定位图谱》［4］确定纹状体坐标位置，采用两个针道内四点定位注射，一针道两点为与前囟平行，正中线左旁开（L）3mm，硬膜下（V）5.5 mm、4.5mm；另一针道两点为前囟嘴侧0.7mm，正中线左旁开（L）3mm，硬膜下（V）5.5 mm、4.5mm；齿棒均低于耳间线2.4mm。将3μg/μl的6OHDA溶液3μl，缓慢匀速地注射到各靶点处。假手术组大鼠以等量生理盐水代替6OHDA，余方法及条件同上。

　　1.3.3 模型评价 ［57］

　　颈部皮下注射APO（0.5mg/㎏），观测大鼠的旋转行为。注射10min后开始记录，每次记录30min，每周检测1次，取平均值，规定以平均每分钟旋转不低于7次者为阳性，连续4周阳性者为造模成功。

　　1.3.4 治疗方法

　　电针治疗组参照《实验针灸学》取“百会、风府、合谷、太冲”穴。 “合谷、太冲”疾刺不留针；“百会”穴和“风府”穴接韩氏穴位神经刺激仪，采用连续波，频率50HZ，电流强度2mA，时间30min，每日1次，每周治疗6次，连续治疗 4周，并予与美多巴治疗组相同剂量的生理盐水灌胃。美多巴治疗组按照美多巴片50mg/㎏剂量，每日1次，连续给药4周，并予与电针治疗组相同的捆绑固定。针药结合组电针治疗同电针治疗组，灌胃同美多巴治疗组。模型对照组及假手术组给与电针治疗组相同的捆绑固定，以及与美多巴治疗组相同剂量的生理盐水灌胃。

　1.4 脑纹状体内神经递质含量检测

　　治疗结束后，旋转行为检测完毕，各组大鼠断头，迅速无菌摘除注射侧纹状体，-80℃冰箱中保存。测定时，取出组织，按每100mg样本加入1ml预冷的高氯酸（0.1mol/L，含0.02%EDTA）溶液，冰浴超声粉碎，并4℃高速15000rpm离心15min，取上清液为待测样品，用高效液相电化学法检测DA的含量。色谱条件：色谱柱：MD150（ESA公司）ODSC18反相分析柱150mm×3.2mm，3μm颗粒；流动相：75mM NaH2PO4·H2O、1.7mM 1辛烷磺酸钠、100μl/L TEA、25mM EDTA、10%乙腈，用磷酸调pH为3.0；流速：0.6ml/min；柱温：32℃；电化学检测器参数：E1：－150mV；E2：＋220mV；EGC：＋270mV；Full Scale/Range：1μA；Filter time constant：5mA；Signal output voltage：1.0V，Ag/AgCl为参比电极。

　　1.5 统计学方法

　　采用SPSS13.0统计软件处理。数据处理计量资料用（x±s）表示。

　　2 结果

　　2.1 行为学影响

　　结果显示：模型对照组与假手术组比较差异显著（P<0.01）；三治疗组旋转圈数的改变与模型对照组、假手术组比较具有显著差异（P<0.01）；三治疗组间两两比较组间无明显差异（P>0.05）见表1。表1 治疗前后各组大鼠的旋转行为改变（略）

　　2.2 脑纹状体内神经递质含量检测

　　用DA标准液倍比稀释成100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625ng/ml七个不同浓度，以吸收峰峰面积值（nA*s）对浓度（ng/ml）作线性回归并计算相关系数r，求得DA的回归方程和相关系数为：y=47.9443129x+21.478665，r=0.99978。如图所示， DA出峰时间为6.136min。见图1、图2。

　　结果显示：模型对照组与假手术组比较差异显著（P<0.05），说明PD大鼠纹状体内DA含量显著下降；各治疗组纹状体DA含量均低于假手术组（P<0.05），且均高于模型对照组（P<0.01），说明电针、美多巴片和针药结合均有提高纹状体内DA含量的作用；三治疗组间两两比较，组间无差异（P>0.05），表明电针有与服用美多巴片补充脑内神经递质相似的疗效，见表2。表2 治疗后各组大鼠的脑纹状体内DA的含量（略）

　　3 讨论

帕金森病是一种中枢神经系统的变性病，主要病变在黑质和纹状体，属于中医颤证的范畴。颤证的病机为本虚标实，本为肝肾不足、气血两亏、心虚神弱等；标为痰湿阻络、风阳内动、肝郁血瘀等。“百会”穴是益气补虚、醒脑开窍的要穴，具有平肝息风、醒脑开窍之效，对神经系统的病证均有显著疗效；“风府”穴为督脉要穴，近年来，有关风府穴治疗风证如帕金森病引起的手足振摇等的临床报道和实验报道日益增多；“太冲”乃是厥阴肝经之原穴，“合谷”乃手阳明大肠经之原穴，原穴是原气所出止的穴位，是脏腑经络之根本，“合谷配太冲”，即谓“四关”穴，是历代针灸医家常用的有效穴。本实验通过针刺 “百会”、“风府”，配合“四关”穴可以息风止痉、疏经活络、激发经气、通调脑络、滋养脑髓、定痉止颤。

PD的病因和发病机制还不清楚，但黑质纹状体神经递质水平低下是本病发生的主要机制之一，DA及其代谢产物含量减少是PD的主要神经生化改变，其减少的程度与黑质细胞丧失的程度成正比，因此，黑质纹状体系统DA的含量测定是衡量冶疗PD有效与否的客观指标。本实验发现模型组大鼠纹状体DA含量比假手术组明显降低，而各治疗组PD大鼠经过治疗以后，纹状体内DA含量都不同程度地增高，与模型组有着明显的差异，说明三种治疗方案都有着提高DA含量的作用；针刺后，针刺组DA含量比模型组明显增加，且与美多巴治疗组无明显差异，说明电针“百会”、“风府”和“四关”穴有与服用美多巴片补充脑内神经递质相似的疗效，能有效提高PD大鼠脑内DA含量，促进PD模型大鼠脑内DA的释放，补充黑质纹状体系统DA含量的不足，从而提高DA能神经元的活性，缓解帕金森病的症状，为临床电针治疗PD提供了有力的实验依据。

【参考文献】
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　　［2］赵焕英，苏月，杨秋慧，等.6-羟多巴胺纹状体内注射制作大鼠帕金森病模型的研究［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2003，12（1）：1620.

　　［3］David B，Sakina T，Nathalie L，et al.Molecular pathway involved in the neurotoxicity of 6OHDA，dopamine and MPTP：contribution to the apoptotic theory in Parkinson’s disease［J］.Prog Neurobiol，2001，65：135172.

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　　［7］Beresford JM，Davenport AP，Sirinathsinghji DJ，et al.Experimental hemiparkinsonism in the rat following chronic unilateral infusion of MPP+ into the nigrostriatal dopamine pathwayⅡ diferential localization of dopamine and cholecystokinin receptors［J］.Neurosci，1988，27（1）：129143.