电针内关穴对海洛因依赖大鼠心率变异性的影响

【摘要】 目的：观察海洛因依赖大鼠心率变异性的改变以及电针双侧内关穴对心脏生理的调整效应，为针刺戒毒提供一定的理论依据。方法：将32只SD大鼠随机分成对照组和实验组，实验组按剂量逐日递增原则，每日2次，连续9天皮下注射海洛因，第10天用纳洛酮催促戒断，确定海洛因依赖模型的建立；再将实验组分为非电针组、电针内关穴组和电针非穴位组,每组8只动物；非电针组继续给予海洛因维持剂量，电针内关穴组停止给药，处于自然戒断状态,同时选取内关穴进行电针治疗，每天1次，连续7天；电针非穴位组选取双侧肋下4个固定非穴点，治疗同内关穴组；对照组按同样方法注射等量生理盐水；4组各自进行30分钟心率变异性取样,对大鼠的心率变异性进行对照分析。结果：与对照组相比,海洛因依赖大鼠非电针组正常RR间期的标准差(SDNN)、相邻RR间期之差的标准差(SDSD)、相邻RR间期之差的均方根(rMSSD)均降低(P<0.01)，LF、HF也降低(P<0.01)；LF/HF比值升高,但差异无统计学意义(P>0.05)；与非电针组比较,电针内关穴组SDNN、SDSD、rMSSD均升高(P<0.05)，LF、HF也升高(P<0.05)，LF/HF比值减小，但差异无统计学意义(P>0.05)；电针非穴位组各项指标与非电针组比较差异无统计学意义(P>0.05)；SDNN与LF呈显著正相关（r=0.864,P<0.01），rMSSD与HF呈显著正相关（r=0.92,P<0.01）。结论：海洛因依赖大鼠心率变异性降低,自主神经调控功能降低；电针内关穴可以使海洛因依赖大鼠降低的心率变异性提高,心迷走活动加强，交感－迷走神经的均衡发生改变，自主神经功能得到良性调整。

【关键词】 海洛因依赖；心率变异性；电针；内关穴

Effects of Neiguan Points Electroacupunture on Heart Rate Variability in Heroin-dependence Rats

PAN Li, PAN Guishu

(Department of Cardiology, Baotou Hospital of Tradtional Mongolian and Chinese Medicine, Baotou 014040,China)

Abstract ob[x]jective: To investigate changes in heart rate variability of heroin-dependence rats and to test the adjusting function of autonomic nervous system by acupuncturing Neiguan points electrically. Methods: Thirty-two SD rats were randomly divided into the control group and the experimental group, Heroin was injected subcutaneously twice a day, for 9 days on the principle of daily increasing dose in the rats of the experimental groups . On the tenth day, the withdrawal signs precipitated by intraperitoned injection of naloxone was evaluated and the heroin-dependent model was established .Then the rats from the experimental group were sub-divided into non-electroacupunctured group, Neiguan points electroacupuntured group and non-points electroacupuntured group, with 8 rats for each group. Experiments were respectively conducted in heart rate variability of rats in four groups for 30 minutes and the data were analyzed respectively. Results: Compared with the control group, SDNN, rMSSD and SDSD in non-electroacupunctured group obviously dropped, LF and HF also significantly fell , and the ratio of LF and HF rose, but with no significant difference ;Compared with non-electroacupunctured group, SDNN, rMSSD and SDSD in Neiguan points electroacupuntured group increased , LF and HF also increased and the ratio of LF and HF dropped, but there was no significant difference ; There was no significant difference either in electroacupunctured non-points group. SDNN positively correlated with LF , and there was a positive correlation between rMSSD and HF. Conclusion: HRV in heroin-dependence rats decreases ,which indicates the functional disturbance of autonomic nervous system. It is suggested that HRV in rats are raised and parasympathetic fiber activities are improved by electroacupuncture of Neiguan Points. The balance between the sympathetic and parasympathetic fiber is regulated and the functions of autonomic nervous system are improved .

Key words Heroin-dependence ; Heart rate variability; Electroacupuncture ; Neiguan points

海洛因是吗啡的衍生物,其乙酰化结构通过血脑屏障进入中枢,作用于大脑不同脑区的阿片受体,产生不同的药理作用[1-2],其主要作用于中枢神经系统,而对心血管系统也可产生间接影响。对心血管的作用主要是海洛因制剂中的混入物-奎宁,它对心肌有直接毒性作用,其代谢产物通过抑制血管运动中枢而间接对心脏产生影响。据文献报道,海洛因依赖者中55%有心电图异常,常见有传导阻滞、去极化及复极异常等[3]。

心率变异性(heart rate variability,HRV)是近年来研究的热点问题，但是用于海洛因成瘾的研究很少。HRV是新近发展起来的反映心脏自主神经功能活动的一项能定量、可重复的检测方法，是指逐次检测窦性心搏间心动周期的微小差异，反映窦性心律的波动变化过程，其发生的主要机制是心脏的电活动节律直接接受心脏交感神经和迷走神经双重调节并相互平衡。正常情况下，迷走神经对HRV起着决定作用，迷走神经功能健全时HRV大，迷走神经功能受损时HRV小。HRV反映自主神经系统活性和定量评估心脏交感神经与迷走神经张力及其平衡性[4]。研究表明,心率异常的变化是与一定的病理条件相联系的,对HRV信号的分析,能了解在一定病理条件下,自主神经系统交感-副交感神经活动均衡性所受到的影响[5-7]。本文对海洛因成瘾大鼠的HRV信号进行了分析,希望从分析的信号中提取出吸毒对人体影响的特征信息,获取一些对吸毒者生理状况及其治疗后康复状况的评估有参考价值的结论。

1 材料与方法

1.1 材料 健康SD大鼠32只,雌雄不拘,体重180～220g,重庆第三军医大学动物实验中心提供,生产许可证号SCXK(渝)20020003。分笼饲养,自由饮水、进食。

1.2 试剂与仪器 海洛因(纯度61.48%,贵州省公安厅提供),盐酸纳洛酮注射液(湖南益桥制药有限公司)，TLC4000 US全息动态心电分析系统（河北秦皇岛康泰医疗器械有限公司），LH-402型韩氏穴位神经刺激仪（北京力普康医药科技发展公司）。

1.3 实验方法 将32只SD大鼠随机分成对照组（8只）和实验组（24只）。实验组参照文献的方法建立海洛因依赖大鼠模型[8]，海洛因依赖组大鼠按逐日递增海洛因3mg/kg的原则，首日每次剂量3mg/kg,2次/天（上午9点，下午4点），连续皮下注射9天，第9天每次剂量达27mg/kg；第10天给海洛因依赖组大鼠腹腔注射5mg/kg纳洛酮，诱发戒断症状并与已建立的海洛因依赖大鼠模型戒断标准比较，确定模型是否建立成功。再将实验组分为非电针组、电针内关穴组和电针非穴位组,每组8只动物。非电针组继续给予海洛因维持量27mg/kg，1次/天,连续7天；电针内关穴组停止给药，处于自然戒断状态,同时选取内关穴进行电针治疗，每天1次，连续7天；电针非穴位组选取双侧肋下4个固定非穴点，治疗同内关穴组；对照组按同样方法注射等量生理盐水。

1.4 针刺治疗 根据中国针灸学会实验针灸研究会制定的“动物针灸穴位图谱”［9］选取内关穴进行电针(HANS)治疗。电针方法:内关穴(前肢内侧,距腕关节约3mm的尺桡骨间,直刺1mm),用1.5寸毫针刺入深度为0.5～0.8寸,行提插捻转平补平泻之手法,分别接韩氏穴位神经刺激仪，进针后，顺着经脉走向进针，不进行手法刺激，施以连续波，波宽0.3ms，频率2/100Hz，疏密波交替，电压2～4V，强度以大鼠能安静耐受为度。刺激强度采用1mA、2mA、3mA逐渐递增法,每10分钟更替1次,刺激持续时间为30分钟。每天1次，连续治疗1周。

1.5 HRV实验方法 电针组出针后1分钟,对照组与非电针组各自进行HRV取样,对所取的30分钟资料中SDNN、rMSSD、SDSD等时域指标和HF、LF、LF/HF等频域指标进行分析。采样过程中避免干扰,将大鼠用25%氨基甲酸乙酯(4mL/kg)麻醉,固定四肢,采集V1心电信号,避免各种影响自主神经活动的因素。

1.6 统计分析 将所有数据以均数和标准差表示,组间比较若满足正态分布且方差齐时采用单因素方差分析LSD法,方差不齐时选用Tamhame’S T2法进行方差检验；若为偏态分布，先经对数转换再进行分析。两变量间的关系采用直线相关分析，所有数据均输入计算机，用SPSS 13.0软件进行处理，显著性界值为P<0.01或P<0.05。

2 结果

进行HRV分析时，采用计算机自动分析加人工校正,剔除干扰及伪差、早搏（海洛因成瘾大鼠可观察到频发房性早搏及偶发室性早搏）及其他非窦性异位搏动不在心率变异计算范围内。

2.1 HRV结果分析 海洛因成瘾非电针组与对照组比较，时域分析各项指标SDNN、SDSD、rMSSD均显著降低(P<0.01)；频域分析各项指标LF、HF也显著降低(P<0.01)，LF/HF升高，但差异无统计学意义(P>0.05);与非电针组比较,电针内关穴组SDNN、SDSD、rMSSD均升高(P<0.05)，LF、HF也升高(P<0.05)，LF/HF比值减小，但差异无统计学意义(P>0.05)；电针非穴位组与非电针组比较,SDNN、SDSD、rMSSD和LF、HF差异均无统计学意义,见表1、表2。表1 各组HRV时域分析各项指标的比较表2 各组HRV频域分析各项指标比较

　　2.2 相关性分析 本实验所得数据运用直线回归法分析表明，大鼠HRV时域分析指标与频域分析指标呈正相关，即SDNN与LF呈显著正相关（r=0.572,P<0.01）,rMSSD与HF呈显著正相关（r=0.634,P<0.01）。

3 讨论

海洛因是半合成产品,具有比吗啡更强的成瘾性,通常认为海洛因的药理作用是来源于吗啡,通过作用于心脏阿片受体,改变细胞内Ca2 +浓度,使心室肌细胞动作电位改变[10]，间接或直接影响心脏的除极、复极等心肌电生理,从而影响心肌的自律性。

HRV是心血管调节系统对各种生理变化的动力学反应,心率的波动是交感神经、副交感神经、肾素-血管紧张素系统功能共同作用的结果。HRV反映交感神经和副交感神经在心率调节方面的相互作用和平衡关系,交感神经、迷走神经的相互协调作用维持着正常的心跳节律,一旦这种相互协调作用失衡,将导致心率和心律的改变,这是HRV分析的生理基础。因此,HRV信号分析能有效评价机体的植物神经功能状况。迷走神经活动减弱，HRV降低；而迷走神经活动增高，对心脏有保护作用。在HRV时域分析法指标中，SDNN是常用的指标，反映总体HRV的变化,而频域法分析可将交感神经与副交感神经活动的成分分开，HF是代表心脏副交感神经活动的可靠指标，LF由交感神经和副交感神经双重介导，LF/HF是反映交感神经与副交感神经张力平衡变化的敏感指标。时域法与频域法联合应用可更全面地反映HRV的变化，它体现了神经体液调节变化程度，蕴涵了心血管系统调节的大量生理信息。通过对这些信号进行提取和分析，可定量评估心交感及副交感神经活动的强弱和相互作用。

大量研究发现，时域分析法和频域分析法所测的参数指标有一定的相关性。HRV指标中HF和rMSSD反映了迷走神经功能活性;LF主要反映了交感神经活动性，同时也受迷走神经活性的影响，故反映了交感神经与迷走神经的共同作用;LF/HF反映了交感神经与迷走神经的平衡情况。因此HF与rMSSD具有相关性，LF与SDNN具有相关性，本实验结果与文献报道一致。

本文结果显示,海洛因依赖大鼠HRV时域分析指标SDNN、SDSD、rMSSD和频域分析指标LF、HF均降低，提示自主神经系统对心脏的调节作用减弱；LF/HF比值升高，提示迷走神经-交感神经平衡失调，心脏自主神经丧失了迷走神经对心脏的保护作用。而HRV是反映神经、体液因素对心血管精细调节的敏感指标，推测其机制可能是海洛因依赖导致中枢心血管调节区域－下丘脑、脑干、海马结构中儿茶酚胺(Catecholamine,CA)递质释放增多，乙酰胆碱（Acetylcholine，ACh）释放减少，神经介质内皮素（Endothelin，ET）、一氧化氮（Nitric Oxide，NO）水平升高，ET mRNA与一氧化氮合酶（Nitric Oxide synthase，nNOS）mRNA表达增强，促使心肌失去同步性能，HRV降低。

研究表明，针刺内关穴对心脏具有明显的保护作用。针刺内关通过对心功能、心电、心肌代谢和神经体液等多方面产生影响，从而发挥对心脏的保护作用。林华等[11]将心肌缺血患者随机分为针刺内关及足三里治疗组，发现针刺内关使冠心病左室收缩及舒张功能得到明显改善，部分指标与足三里穴比较有统计学意义，证实了内关穴与心脏相关的相对特异性。另有研究证明，针刺内关穴有促进心率恢复正常的良性调整作用，此种效应优于足三里穴，也证实了内关穴作用于心脏的相对特异性[12]。

本实验结果表明，针刺内关穴可以使海洛因依赖大鼠降低的HRV指标升高（P<0.05)，迷走神经活性相应提高，LF/HF比值降低，提示交感神经－迷走神经平衡失调得到改善，推测针刺内关的效应可能是使中枢心血管调节区域ET、NO、CA释放减少，阻断ET mRNA与nNOS mRNA的异常表达，增加ACh含量，并降低血中去甲肾上腺素（Noradrenaline，NA）、多巴胺（Dopamine,DA）、ET及NO水平，使心肌逐渐恢复同步功能，从而使HRV增加。本文结果显示,针刺内关穴对海洛因依赖大鼠HRV的降低具有明显的改善作用，针刺后心率变异程度增大,植物神经对心率的良性调控作用加强,说明针刺可良性调整自主神经功能，提高迷走神经张力，预防心肌损伤和心律失常的发生，为临床电针脱瘾治疗海洛因依赖稽延性戒断症状提供一定的理论依据。

针刺戒毒的神经生理学机制表明，针刺可使交感神经与副交感神经的功能状态恢复相对平衡，消除植物神经的功能紊乱，使戒断症状得到抑制，或与针刺麻醉相反，使患者出现戒断综合征症状所形成的弥散性疼痛信息变得可以耐受，甚至微不足道，从而起到戒断毒瘾的作用[13]。在临床观察中发现，心动过速是阿片成瘾者脱毒期的主要体征之一，可被经皮电刺激HANS所抑制[14]。已有研究表明，外周的电刺激可抑制阿片戒断症状[15]。由此推论，通过电针刺激有可能使阿片依赖者的戒断症状得到缓解，并有助于阿片脱瘾，为针灸戒毒的临床应用提供了客观依据。

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