杜仲提取物对雌二醇致肾阳虚小鼠的影响

作者：范景,吕圭源,李恒辉,李巍,张益勋,苏洁　　作者单位：浙江中医药大学 杭州 310053　 温州医学院

　　【摘要】目的观察杜仲提取物对雌二醇致肾阳虚小鼠的影响。认识杜仲“甘，温，入肝、肾经”药性的现代科学内涵。方法：采用腹腔注射苯甲酸雌二醇造成小鼠肾阳虚模型。ICR雄性小鼠72只，随机分为对照组，模型组，桂附地黄丸组，杜仲水提取物组、正丁醇提取物组、乙酸乙酯提取物组，共6组，每组12只。对小鼠体征、肛温、抓力、游泳时间、自主活动、血清肌酐(Cr)及尿素(UR)、血液学指标、睾丸和精囊腺指数进行测定。结果：杜仲水提取物能提高肾阳虚小鼠肛温、游泳时间、自主活动、睾丸和精囊腺指数、Hb、WBC、LY、MO、PLT，降低UR;正丁醇提取物能提高小鼠抓力、游泳时间、自主活动次数、睾丸和精囊腺指数、RBC、Hb、WBC、LY、MO、PLT，降低UR;乙酸乙酯提取物能提高小鼠肛温、抓力、精囊腺指数、Hb、PLT，降低Cr、UR。结论：杜仲的药理作用可作为改善肾阳虚证之腰膝酸软、性欲减退、畏寒肢冷、精神萎靡、阳虚水泛，以及肾精亏虚、肝气虚弱所致血液亏虚的基础;并作为其“甘，温，入肝、肾经药”药性现代科学内涵的组成部分。杜仲水提取物和正丁醇提取物的作用较为接近且较强。

　　【关键词】 小鼠,肾阳虚,杜仲 提取物 性 味 归 经

　　Abstract ob[x]jective:To observe the effects of extracts from Cortex Eucommiae on estradiolinduced kidneyyang deficiency in mice and to understand the modern scientific connotation of the properties theories about sweetflavor, warmnature, meridian tropism in liver and kidney. Methods:Kidneyyang deficiency mice model was established with intraperitoneal injection of estradiol benzoate. A total of 72 healthy adult male ICR mice were randomly divided into 6 groups: control group, model group, positive control group (Guifudihuang), and 3 groups of Cortex Eucommiae (water extract, nbutanol extract, and acetoacetate extract), 12 mice in each group. The effects were observed by measuring physical sign, rectal temperature, grip strength, swimming time, locomotor activity, serum creatinine and urea levels, haematological indexed, testis index and seminal vesicle index. Results:The water extract markedly improved the rectal temperature, swimming time, locomotor activity, testis index, seminal vesicle index, Hb, WBC, LY, MO and PLT, and decreased urea. The nbutanol extract had the similar effects as the water one did except for increasing RBC instead of the rectal temperature. The acetoacetate extract dramatically improved the rectal temperature, grip strength, seminal vesicle index, Hb and PLT, and decreased urea and creatinine. Conclusion:These effects of Cortex Eucommiae could be as the basic of improving the symptoms of kidneyyang deficiency such as soreness of the waist and knees, hyposexuality, intolerance of cold and cold limbs, feeling listless and inert, edema, and blood deficiency that is induced by kidneyessence and liverqi deficiency, and also could be an important part of the modern scientific connotation of the properties theories about sweetflavor, warmnature, meridian tropism in liver and kidney. The effects of the water and nbutanol extracts were similar to each other and both stronger compared to the acetoacetate one.

　　Key words mice Cortex Eucommiae kidneyyang deficiency extract property and flavor meridian tropism

　　中国《药典》2005年版记载，杜仲味甘，性温，归肝、肾经，功能补肝肾、强筋骨、安胎，用于肾虚腰痛、筋骨无力、胎动不安等。《神农本草经》谓杜仲“主腰脊痛，补中益精气，坚筋骨，强志……久服轻身不老”。杜仲可用于治疗各种肾阳不足所致之证。为探讨其性、味、归经的现代科学内涵，开展如下研究。

　　1 实验材料

　　1.1 药 物 盐杜仲，批号080110，购自浙江中医药大学中药饮片厂，经鉴定为杜仲科植物杜仲Eucommiaulmoides Oliv.树皮的炮制品。药材先制成水提取物;再取药材用10倍体积95%乙醇提取2次，分别制成乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物。水、正丁醇、乙酸乙酯提取物分别加吐温80稀释至0.125g生药/mL。

　　1.2 试 剂 肌酐、尿素试剂盒(Cr、UR，上海复兴长征医学科学有限公司，批号P071254、P080431)。血液分析试剂(美国A Drew Scientific Group Co.，批号5018)。苯甲酸雌二醇(上海通用药业股份有限公司，批号070902)。桂附地黄丸(兰州太宝制药有限公司批号，80080542)。

　　1.3 动 物 ICR小鼠，雄性，体重18～22g，由浙江省实验动物中心提供，合格证号:SCXK(浙)20030001。

　　1.4 仪 器 HEMAVET950动物血液分析仪(美国A Drew Scientific Group Co.);XZ4型5光道小鼠自发活动自动记录仪、YSL13A大小鼠抓力测定仪(山东省医学科学院设备供应维修站);威图SELECTRAE全自动生化仪(荷兰威图公司);DTITB电子体温计(上海华辰医用仪表有限公司);LP123电子天平(江苏省常熟市衡器厂)。

　　2 实验方法

　　2.1 造模与给药 健康ICR雄性小鼠72只，随机分为对照组，模型组，桂附地黄丸组，杜仲水提取物组、正丁醇提取物组、乙酸乙酯提取物组，共6组，每组12只。除对照组外，其余5组按0.1mL/10g体重腹腔注射0.4mg/mL的苯甲酸雌二醇大豆油稀释液，1天1次，连续15天，造成肾阳虚模型[1]。杜仲提取物各组给予相应的0.125g生药/mL提取物，桂附组给予0.15g生药/mL桂附地黄丸混悬液，对照组和模型组给予0.4%吐温80，0.1mL/10g灌胃给药，1天1次，连续15天。

　　2.2 指标检测 观察小鼠一般体征。于给药前3天和给药第12天测量肛温。给药前3天和给药第13天测定游泳时间，超过1小时的以1小时计。给药前2天和给药第14天测定抓力，每只小鼠连续测定2次，取平均值。给药前1天和给药第15～16天，记录10min小鼠自主活动次数。末次给药后，摘眼球取血，一份不加抗凝剂，取血清，依说明书测定血清Cr、UR;另一份加枸橼酸钠抗凝，取血后4小时内测血液学指标：红细胞数量(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板数量(PLT)、白细胞数量(WBC)、嗜中性粒细胞数量(NE)、淋巴细胞数量(LY)、单核细胞数量(MO)、嗜酸性粒细胞数量(EO)、嗜碱性粒细胞数量(BA)。处死小鼠，摘取睾丸、精囊腺，计算指数(%)=脏器重量/体重×。

　　2.3 统计分析 数据以(±s)表示，组间比较采用ttest检验。

　　3 实验结果

　　3.1 对一般体征的影响 对照组小鼠皮毛干爽光滑，精神状态良好，喜动而不喜卧。模型组小鼠皮毛汗湿竖立，精神萎靡，弓背萎缩，喜挤卧而不喜动。杜仲提取物各组在实验前期(给药第1～7天)也出现与模型组小鼠相同体征，但在实验后期(给药第8～15天)逐渐恢复正常。

　　3.2 对肛温的影响 给药前各组间肛温无明显差异。与对照组比较，给药第12天，模型组肛温明显降低(P<0.01)，说明体温下降造模成功;与模型组比较，杜仲水提取物组和乙酸乙酯提取物组肛温明显升高(P<0.05)，正丁醇提取物对肛温有升高趋势。结果说明杜仲具有升高肾阳虚小鼠肛温的作用，见表1。表1 各组小鼠肛温比较与对照组比较，

　　3.3 对游泳时间的影响 给药前各组间游泳时间无明显差异。与对照组比较，给药第13天，模型组游泳时间显著减少(P<0.01)，说明腰膝酸软造模成功;与模型组比较，桂附地黄丸组、杜仲水提取物组和正丁醇提取物组游泳时间明显延长(P<0.05)。结果说明杜仲可能有改善腰膝酸软的作用，见表2。

　　3.4 对抓力的影响 给药前各组间抓力无明显差异。与对照组比较，给药第14天，模型组小鼠抓力显著减弱(P<0.01)，说明腰膝酸软造模成功;与模型组比较，桂附地黄丸组、杜仲正丁醇提取物组和乙酸乙酯提取物组小鼠抓力明显增强(P<0.01～0.05)。结果说明杜仲可能具有改善腰膝酸软的作用，见表3。表2 各组小鼠游泳时间比较(±s)

　　表3 各组小鼠抓力比较

　　3.5 对自主活动的影响 给药前各组间自主活动无明显差异。与对照组比较，给药第15～16天，模型组小鼠自主活动次数明显减少(P<0.01)，说明精神萎靡造模成功;与模型组比较，桂附地黄丸组、杜仲水提取物组和正丁醇提取物组自主活动次数显著增多(P<0.01)。结果说明杜仲可能有改善肾阳虚小鼠精神萎靡的作用，见表4。

　　3.6 对Cr、UR水平的影响 ①与对照组比较，模型组Cr有升高趋势;与模型组比较，杜仲乙酸乙酯提取物组Cr明显降低(P<0.05)，水提取物组和正丁醇提取物组Cr有降低趋势。②与对照组比较，模型组UR显著升高(P<0.01);与模型组比较， 桂附地黄丸组、杜仲水提取物组、正丁醇提取物组和乙酸乙酯提取物组UR明显降低(P<0.01)。结果显示杜仲具有改善肾阳虚小鼠肾功能的作用，见表5。表4 各组小鼠自主活动比较表5 各组小鼠Cr、UR水平比较

　　3.7 对血液学指标的影响 ①与模型组比较，杜仲正丁醇提取物明显升高RBC(P<0.01)，水提取物、正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物显著升高Hb(P<0.01～0.05)。②与模型组比较，杜仲水提取物和正丁醇提取物明显升高WBC、LY、MO (P均<0.05)。③与模型组比较，桂附地黄丸组、杜仲三个提取物都显著升高PLT(P<0.01～0.05)。结果表明杜仲各提取物能不同程度影响肾阳虚小鼠血液学指标，见表6～8。表6 各组小鼠红细胞参数比较表7 各组小鼠白细胞参数比较表8 各组小鼠血小板数比较

　　3.8 对睾丸、精囊腺指数的影响 结果显示，①与对照组比较，模型组睾丸指数明显减小(P<0.01);与模型组比较，杜仲水提取物组和正丁醇提取物组睾丸指数显著升高(P<0.01～0.05)，乙酸乙酯提取物组有改善趋势。②与对照组比较，模型组精囊腺指数明显减小(P<0.01);与模型组比较，桂附地黄丸组、杜仲水提取物组、正丁醇提取物组及乙酸乙酯提取物组精囊腺指数皆显著升高(P均<0.01)。结果说明杜仲可能有改善肾阳虚小鼠性欲减退的作用，见表9。表9 各组小鼠睾丸、精囊腺指数比较

　　4 讨 论

　　参考国家技术监督局发布《中医临床诊疗术语》，肾阳虚证的主症有腰膝酸软，性欲减退，畏寒肢冷;次症有精神萎靡，夜尿频多，下肢浮肿，动则气促，发槁齿摇，舌淡苔白，脉沉迟，尺无力。具备以上主症2项、次症2项，即可诊断为肾阳虚证。

　　腰膝酸软症状目前尚无相应的客观指标考察。本实验采用小鼠抓力减小和游泳时间缩短反映该症。结果杜仲正丁醇提取物能不同程度提高小鼠抓力和游泳时间，水提取物能延长游泳时间，乙酸乙酯提取物能提高抓力。这些作用可能与杜仲甘温入肾，能温阳、补肝、益肾作用有关。

　　目前多用交配能力、血清性激素水平、生殖器官指数等指标考察性欲冷淡症[3～5]。本实验观察了小鼠睾丸、精囊腺指数，结果显示，杜仲水提取物和正丁醇提取物能不同程度升高小鼠睾丸、精囊腺指数，乙酸乙酯提取物能升高小鼠精囊腺指数。这些作用可能与杜仲甘温入肾，能温补肾阳，填精益肾作用有关。

　　由于暂缺可精确测量动物四肢温度的仪器(预试验采用红外测温仪，结果误差大)，故本实验观察小鼠肛温。实验结果，杜仲水提取物和乙酸乙酯提取物能不同程度提高小鼠肛温。这可能与杜仲性温，能温阳散寒作用有关。

　　本实验采用自主活动次数来反映[6]精神萎靡症状。实验结果，杜仲水提取物和正丁醇提取物能不同程度增加小鼠自主活动次数。这可能与杜仲性温，能温补阳气作用有关。

　　阳虚水泛为肾阳虚兼证之一。本实验采用小鼠血清Cr、UR水平升高反映该证[7]。结果显示，杜仲三种提取物都能不同程度降低Cr、UR水平。这些作用可能与杜仲性温，能温阳行气利水有关。

　　肾精亏虚致化血无力，肝气虚弱致肝不藏血，从而导致血液亏虚。本实验采用血液学指标变化反映该证。结果显示，杜仲三种提取物均能升高Hb、PLT，杜仲水提取物和正丁醇提取物能不同程度升高WBC、LY、MO，正丁醇提取物还能升高RBC。这些作用可能与杜仲甘温入肝肾，能补肾填精，温阳益气作用有关。

　　比较杜仲水提取物、正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物作用发现，杜仲水提取物和正丁醇提取物的作用接近且较强，为甘，温，归肝、肾经共同药效物质群提供了启示，有待进一步分析性、味、归经等药性与药效及化学物的关系。