噬菌体裂解试验快速检测煤工尘肺结核的结果分析

作者：张芳,陈东进,刘宝仁　　作者单位：北京，北京京煤集团总医院结核科

　　【摘要】 目的 对比尘肺结核痰标本涂片、培养和噬菌体裂解试验在煤工尘肺结核病人中检测方法的比较。 方法 对我科100例已确诊煤工尘肺结核应用痰涂片、BACTEC培养和噬菌体裂解试验同步检测，对比其检验结果。 结果 8例涂阳培阳，12例涂阴培阳的噬菌体裂解试验均为阳性，80例涂阴培阴标本阳性36例、阴性44例。 结论 结核噬菌体裂解试验可以快速鉴定结核分支杆菌且比涂片、培养更敏感。

　　【关键词】 噬菌体,煤工尘肺,结核

　　长期以来，结核病实验室检测技术有涂片染色镜检、分离培养与菌型鉴定以及药敏试验等。这些技术有其优点，但也存在一些缺陷，涂片抗酸染色镜检与分离培养法检测临床标本阳性率低，约25%～35%，还存在着大约65%～75%涂片阴性或培养阴性结核病的诊断问题。煤工尘肺结核的临床诊断比单纯结核要复杂和困难，至今尚未找到理想的检测方法，近年来利用噬菌体裂解试验检测标本中活的结核杆菌的方法取得了可喜进展[1，2]。笔者对100例经临床诊断煤工尘肺结核的住院患者的标本进行检测，现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 100例患者均为我科已被确诊的煤工尘肺病人，全部接受抗结核治疗，全部为男性，年龄56～82岁，平均69岁，煤工尘肺诊断由集团公司尘肺诊断组集体会诊诊断，并经北京市尘肺诊断指导小组审核批准。其中I期40例，Ⅱ期52例，Ⅲ期8例，对每位患者同一份24h痰液分别进行检测。

　　1.2 方法 (1) 对所有100例病人的痰标本同时进行涂片、细菌(BACTEC)培养和噬菌体裂解试验检测;(2) 结核分支杆菌涂片、BACTEC快速培养按《结核病诊断实验室检验规程》操作;(3)噬菌体裂解试验试剂盒由北京天宇朝日生物技术有限公司提供;(4)标本前处理：加1倍体积4%NaOH液化，充分混匀，20min后离心15min(4000r/min)，去上清，1：10量加入缓冲液充分混匀，离心15min(4000r/min)，去上清，将沉淀物加1ml混匀，无菌条件下吸取1ml混悬液至无菌反应管中。含菌培养基的制备：取噬菌体0.1ml加入反应管中充分混匀，37℃孵育1h后加入0.1ml杀毒剂，混匀至室温5min后加入5ml缓冲液和1ml指示细胞。上述混 合培养液与5ml已溶解琼脂液混匀后倒入无菌平皿中，旋转混匀，待静止成型后，放37℃培养18～24h。每次检测时要同时设阳性对照和阴性对照平皿。结果观察：阳性平皿中可见大 小数量不等的噬菌斑出现或许多噬菌斑融合成透明状，阴性平皿中 可见指示细胞均匀分布无噬菌斑或噬菌斑少于19个。

　　1.3 注意事项 (1) 每次试验必须设全各种对照，以保证结果的可靠性; (2) 加入杀毒剂后一定要摇匀，以杀死全部噬菌体; (3) 浇注平板的琼脂温度不要超过55℃，以免噬菌体灭活; (4) 避免操作污染。

　　2 结果

　　2.1 检测结果 20份涂阳培阳和涂阴培阳的痰标本，经噬菌体裂解检测结果均为阳性;80份涂阴培阴的痰标本噬菌体裂解法检测结果有36份为阳性、44份为阴性。详见表1。 表1 100例尘肺结核患者痰标本噬菌体裂解法检测结果

　　2.2 复检情况 对所有经噬菌体裂解法检测结果阳性的病例进行重复检测，51例阳性中仍有40例阳性，其中5例因出院、死亡而未能重复，其重复符合率为78.4%。

　　3 讨论

　　本检测结果提示，在痰菌阳性的20份标本中(包括涂阳培阳标本)噬菌体裂解法检测均为阳性，在痰菌阴性的80份标本中，阳性36份、阴性44份，各占45%和55%，显示该法检测煤工尘肺结核患者痰标本结核分支杆菌的阳性率高于涂片和培养法，且重复率为78.4%。笔者认为，噬菌体裂解法检测痰标本中活结核杆菌阳性检出率高、特异性强、重复性好，而且方法简便，快速，无需贵重仪器，适合中小实验室广泛开展应用。