登革病毒核酸检测试剂注册审评概述

登革热是由登革病毒（ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ，ＤＶ）引起的一种急性传染病，广泛流行于全球热带及亚热带地区，多在城市和半城市地区，通常由蚊媒传播。近几十年全球登革热发病率大幅度增长。根据ＷＨＯ的官方数据，在２０１７－２０１８年病例数量下降之后，２０１９年病例数量急剧增加，其中来自我国的病例数报道也显著增加。

登革病毒感染可表现为无症状隐性感染、非重症感染及重症感染等。典型的登革热病程分为三期，即急性发热期、极期和恢复期。

登革病毒属黄病毒科黄病毒属，为ＲＮＡ病毒，基因组由单股正链ＲＮＡ组成，共有４个血清型（ＤＥＮＶ－１、ＤＥＮＶ－２ ＤＥＮＶ－３和ＤＥＮＶ－４），４种血清型均可引起登革热的感染和流行，其中２型传播广泛， ＤＥＮＶ的四种血清型在基因组序列上有６５－７０％的同源性，感染其中一型，将产生针对本血清型的保护。然而，研究表明，当再次感染异型ＤＥＮＶ时，会增加发生重症登革热的风险。ＤＥＮＶ与乙脑病毒和西尼罗病毒也有部分抗原相同。

登革病毒核酸检测与登革热的诊断

登革病毒感染的常用的实验室检测包括血常规、血生化检查、病原学和血清学检查等。其中登革病毒核酸检测是登革热病原学检测的重要参考。早在２００９年，ＷＨＯ就将病毒分离、ＮＳ１抗原检测和核酸检测三种方法列为的登革病毒感染的早期检测手段。在２０１７年，更是将登革病毒核酸检测，列为对疑似急性感染期患者血清样本检测的首要方法。我国《登革热诊疗指南》中，明确：患者急性发热期可应用登革病毒核酸检测进行早期诊断。疑似或临床诊断病例，急性期血清检测出病毒核酸，可作为确诊依据。我国卫生行业标准《登革热诊断》，也将登革病毒ＲＮＡ检测列入登革热病原学检测方法，用于登革热的早期诊断。

登革病毒核酸检测试剂的上市批准情况

目前全球仅少数几家公司生产的登革病毒核酸检测试剂批准上市。在美国，美国疾控中心生产的ＣＤＣ ＤＥＮＶ－１－４ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲ Ａｓｓａｙ，已经ＦＤＡ批准上市。另外，马来西亚、新加坡等少数登革热流行区域国家，也有相关检测试剂批准上市。在我国，仅中山大学达安基因股份有限公司生产的“登革病毒核酸检测试剂盒（ＰＣＲ－荧光探针法）”和“登革病毒分型核酸检测试剂盒（ＰＣＲ－荧光探针法）”已批准上市。

审评思路

１． 预期用途的声称

与其他病原体检测试剂相似，此类产品应明确检测样本类型（血清和／或血浆）、预期人群（如，曾前往登革热流行区、有高热等临床表现的疑似人群）。同时，需要明确可检出的登革病毒型别及是否可以进行分型检测。

２． 分析性能评估

由于登革病毒核酸检测主要用于急性期感染患者（＜５天）的早期诊断，且登革病毒感染的及时诊断是应对登革热疫情的重要手段之一，因此需采用对已知浓度（ＰＦＵ／ｍＬ或ＴＣＩＤ５０／ｍＬ）登革病毒液进行系列梯度稀释的方法，对此类检测试剂的分析灵敏度进行准确的建立，并采用１～４型登革病毒亚型病毒株进行低检出限的验证。

由于登革热的流行病区分布，临床表现等，与其他虫媒疾病，如基孔肯雅热、寨卡病毒病、黄热病存在易混淆的情况。因此，临床上需要进行与上述疾病的鉴别区分。对于登革病毒检测试剂，应在特异性研究中，对黄热病病毒、森林脑炎病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒、乙型肝炎病毒等进行交叉反应性研究，证明检测试剂可特异检出登革病毒的能力。对于登革病毒分型检测试剂，还应对不同型别之间的特异性检出能力进行额外的研究。

３． 临床试验

考虑到目前已上市同类检测试剂较少，临床试验可以选择与已上市产品或核酸序列测定方法进行比较研究。测序方法的性能验证应至少包含对其低检出限的评价。

为保证临床试验包含一定数量的阳性样本，临床试验应以发热疑似登革热患者作为研究对象，入组样本注意与预期人群相一致。

目前对登革热／重症登革热没有特异治疗办法，但及早发现和适宜的医护可将死亡率降到１％以下。可以说，登革热患者良好的临床结局，很大程度上依赖于对登革热疾病准确的早期诊断。作为登革病毒感染早期辅助诊断的主要手段之一，登革病毒核酸检测应具备良好的特异性和灵敏度。产品的研发与验证应充分合理，并注意在说明书中注明产品的主要性能、预期人群及使用局限性，以更好的指导临床使用。

（作者单位：国家药监局医疗器械技术审评中心审评六部）