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美国、欧洲、英国、日本、中国药典系统适用性要求

文章来源:嘉峪检测网发布日期:2022-07-01浏览次数:16

摘要  

 

系统适用性是色谱工作中必不可少的部分,国内外标准都对系统适用性试验做了要求。本文是笔者对色谱实验中系统适用性的漫谈,供广大读者在工作闲暇之处讨论,不足之处还望理解。

 

系统适用性是液相和气相色谱方法的重要组成部分,用来确认色谱系统的分离度和重复性能够满足特定的分析要求。测试是基于将仪器、电路、实验者和样品作为一个整体进行的。

 

美国药典规定任何色谱试验一定要进行系统适用性测试,否则,这台仪器做出的数据一律无效;ICH提出一定要将系统作为整体来测试;FDA提到应确定一SOP进行测试确保系统可用;英国药典规定建立系统适用性是为了任何使用方法时都是有效的;欧洲药典提出系统适用性测试反映了色谱系统性能,是建立分析方法不可或缺的一部分;日本药典与美国药典叙述基本一致;GMP指出检查分析方法验证过程时,应涉及是否开发了系统适用性试验,并且对每一项系统适用性试验的参数都进行了定义;中国药典并没有单独对系统适用性目的进行叙述,国内色谱工作者往往对系统适用性不够重视,看似简单的系统适用性其实有很多需要关注的地方,其重要性不比方法学中其他验证项差。

 

一、美国药典系统适用性的要求

 

美国药典并没有明确对分离度、理论塔板数、拖尾因子、重复性及灵敏度的统一要求,在药典正文中各个品种项下分别规定。当采用标准品或标准品溶液需要重复进样以判断系统的精密度,除非个论中有规定,系统适用性5针的数据的相对标准偏差不得超过2.0%,当超过2.0%时,需要计算连续6针进样的数据。在含量测定中,系统适用性的相对标准偏差与进样次数和含量限度上限有关,表1是USP对含量系统适用性测试相对标准偏差的规定。

 

表1 USP对含量系统适用性RSD的要求

 

含量限度上限

进样次数

3

4

5

6

RSD%

101.0%

   

0.349

102.0%

0.41

0.59

0.73

0.85

102.5%

0.52

0.74

0.92

1.06

103.0%

0.62

0.89

1.10

1.27

 

关于对称因子规定参考笔者撰写《拖尾因子、对称因子和不对称因子区别理论》,在此不做赘述。当系统适用性不符合要求时可以适当调整方法参数,不过每个变量的大值都应该进行验证其系统适用性,对改变后的方法进行重新评价。表2是USP对参数调整的规定。

 

表2 USP对系统参数再调整的规定

 

参数

规定变化量

一般是不改变流动相组分,调整比例即可

仅能对小溶剂组分的量进行改变,不得超过相对量的±30%或量的±10%

流动相pH值

正负0.2个单位

在满足pH值得情况下,缓冲盐浓度波动范围

±10%

色谱柱长度

±70%

液相色谱柱内径

与流速配合调整

气相毛细管柱内径

±50%

液相色谱柱填料±粒径

可以减少50%,但不能增大

气相毛细管柱填料粒径

根据需求增大或减少

气相柱流量

±50%

液相流速

与色谱柱内径配合调整

波长

不能做调整

液相进样体积

可以减少,但不能增加

气相进样体积

可以适当增大或减少

柱温

±10%

进样口温度

±10%

程序升温

±20%

 

二、欧洲药典和英国药典系统适用性的要求

 

欧洲药典和英国药典对系统适用性要求也做了非常详细的规定,并且对保留时间、保留体积、死体积、死时间等概念做了详细描述。EP和BP关于对称因子规定参考笔者撰写《拖尾因子、对称因子和不对称因子区别理论》,在此不做赘述。系统适用性5针的数据的相对标准偏差与USP规定基本一致。当系统适用性不符合要求时可以适当调整方法参数,EP和BP对等度洗脱和梯度洗脱分别做了规定,详见表3。

 

表3 EP和BP对系统参数再调整的规定

 

类型

参数

规定变化量

等度洗脱

流动相组分

小溶剂组分的量改变时,不得过相对量的±30%,或者量的±2%,以数字大者为准,但不得过±30%

流动相pH值

正负0.2个单位

流速

±50%,可以随柱尺寸改变

柱参数

固定相不得改变,粒径可以减少50%,不得增加

柱尺寸

长度改变±70%,内径可以改变±25%

柱温

±10℃

波长

不得改变

进样量

可以减少,不得增加

梯度洗脱

流动相组分

更换后组分洗脱能力要增强,主峰保留时间改变±15%

流动相pH值

不得改变

流动相盐浓度

±10%

流速

与等度洗脱一致

柱尺寸

固定相不得改变,粒径不得改变,长度和内径与等度一致

柱温

±5℃

波长

不得改变