9、1mg/ml标准品液:(0.2ml)
操作说明
1. 将试剂盒从冷藏环境中取出,置于室温(20~26℃)下平衡30min以上,将需用的条板固定于支架,按顺序编号;
2. 洗液配制:将50 mL浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水稀释至1000 mL备用。(或按需量稀释)
3. 标准品的配制:先将试剂盒中的1 mg/mL苏丹红标准品用洗液稀释1000倍,变成1000ng/mL,再用洗液将1000 ng/mL的标准品分别稀释成0.4 ng/mL, 3.2 ng/mL,6.4 ng/mL,12.8 ng/mL,25.6 ng/mL。(现配现用)
4. 在标准品孔中加入50 μL标准品,样品孔加入50 μL待测样品,然后每孔加入50 μL抗体(加入标品和样品时无时间差的影响),轻拍混匀,37℃下孵育30min;
5. 倒出孔中的液体,以试剂盒浓缩洗液稀释20倍后作为洗液,用洗板机洗涤4~6遍;没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中,静置20 s,倒出孔中的液体,将微孔架倒置,在吸水纸上连续拍打3次以上,以保证完全除去孔中的液体,重复操作4~6遍;
6. 每孔加入酶标记物100 μL,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min ,取出重复洗板步骤。
7. 显色:每孔加入底物缓冲液50 μL,再加底物液50 μL.轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后,置37℃ 环境中反应10 min。
8. 测定:每孔加入终止液50 μL,轻轻振荡混匀.设定酶标仪于450 nm处(建议用双波长450/630 nm 检测,在20 min内读完数据),测定每孔OD 值,根据标准曲线计算样品浓度。