本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AMOZ,在微孔条上预包被上偶联抗原。
样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制:
1.衍生化试剂 称15.1 mg邻硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)
2.C液:(供奶样用)称12.5 g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL。
D液:(供奶样用)称29.8 g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。
3.0.1 M K2HPO4 称22.8 g K2HPO4·3H2O
加去离子水溶解定溶至1 L
4.1M HCl取8.6 ml浓HCl加水定溶至100 mL。
5.1M NaOH称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。
操作说明:
1. 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出,置室温(20-25 ℃)平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2. 按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔板重新密封,保存于2-8 ℃,不要冷冻。
3. 加标准品/样本50 µL /孔,然后加入抗体工作液50 µL/孔,再振荡混匀,用封板膜盖板,室温反应30 min。
4. 洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。
5. 加入酶标记物100 µL/孔,用封板膜盖板,室温反应20 min。
6. 洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。
7.显色:每孔加入底物缓冲液50µl,再加底物液50µl,轻轻振荡混匀,室温环境下避光显色10min。
8.测定:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡匀,设定酶标仪于450nm处(在20min内读完数据),测定吸光度值。
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