通用名：猪蓝耳病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (ELISA)

【预期用途】
本试剂盒用于检测猪血清中猪蓝耳病毒抗体。评估猪场猪蓝耳苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。
【原 理】
本试剂盒系由预包被猪蓝耳病毒（PRRSV）GP5+GP6重组蛋白的微孔板和酶标记二抗及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清或血浆中猪蓝耳病毒特异性抗体。实验时，在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有猪蓝耳病毒的特异性抗体，则将与包被板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。
【试剂盒组成】
1.猪蓝耳病毒抗原预包被微孔板条96T×1
2.酶标记物 (红盖)11ml×1
3.样品稀释液 (黄盖)25ml×1
4.20X浓缩洗涤液 (透明盖)20ml×1
5.底物液A (白盖)6ml×1
6.底物液B (黑盖) 6ml×1
7.终止液 (黄盖)6ml×1
8.阳性对照 (红盖，已灭活)0.5ml×1
9.阴性对照 (绿盖，已灭活)0.5ml×1
10.盖板膜 1张
11.自封袋 1个
12.说明书  1份

【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品短期可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
【样品稀释】 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

【试验操作方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照血清100μl；样品孔每孔加入稀释后的血清样本100μl；空白对照孔不加。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A450）。
【结果判定】
定义：N=阴性对照孔平均A值；P=阳性对照孔平均A值；S=样品孔A值；S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。
1.正常情况下，N≤0.10，P≥0.50。
2.S/P≥0.18时判为阳性，S/P＜0.15时判为阴性，0.15≤S/P＜0.18时判为可疑。
当本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪蓝耳病毒IgG抗体，不能区别疫苗免疫和野毒感染。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
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