培养基

培养基介绍

培养基，指的是为微生物、植物或动物（或组织）提供可供其生长和繁殖所用的各种营养物质的组合而成的营养基质。通常由碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水组成。基质不仅为细胞提供养分，促进其增殖，而且为其生长、繁衍创造了良好的条件。配制好的介质一般要经过试验，并调整 pH值，还要经过消毒处理，一般有高温消毒和过滤消毒。因为介质中含有丰富的养分，容易受到污染和腐坏，所以调配完毕后，不要放置太长时间，最好是在调配完毕后立即使用。

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培养基注意事项

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。应该注意以下事项：对工作细胞库进行确认，对工作细胞的鉴定，对工作种子的鉴定，以及对所使用的培养液和其他添加剂（例如小牛血清，NaHCO3等）的鉴定，都可以通过细菌、真菌和支原体的灭菌实验进行确认和排除。并对检测结果的敏感性进行了检验。在实践中，只需将调配好的培养基中的微量添加到营养琼脂中，于恒温培养箱中，48小时后就能看到是否存在污染现象。然后进行高压灭菌装置、过滤灭菌装置进行确认，以保证灭菌、除菌的有效性；前一种方法应当在投入使用之前和之后，每半年进行一次验证，后一种方法应当在每个消毒前后（至少一次）进行验证。再就是有毒区和无毒区必须严格分隔，两个区域必须有一个单独的通风系统和一个孵化间，有毒区必须和无毒区之间维持一个较低的压力，以避免病毒对培养的细胞（特别是细胞库）造成的影响。

培养基使用方法

首先将培养基融化：把培养基放入滚烫的热水中，或者用其它具有同样作用的方式（例如高压蒸气）溶化培养基。对于已被高温消毒过的培养基，应尽可能缩短再热的时间，并应避免过热。当培养基溶化后，应立刻取出，放置在室温下（大约2分钟），以防玻璃瓶碎裂。将溶化的培养基置于47~50℃的恒温水中，降温至47~50℃所需要的时间与培养基的种类、体积及在水中的分装量有关。溶化后的培养基要尽可能快的用完，一般不宜超过4小时。其余的培养基固化后不能再熔化再用。尤其在感光介质方面，要按照有关规范，尽量减少溶化后的存放时间。将培养液倒进与试验培养液相似的另一种器皿内，放入温度表，并将熔化温度记录下来。在添加试样的介质中，温度应该在44~47摄氏度之间，或者根据有关的规范进行调整。

然后是除培养液中的气体：如有需要，可先将培养液置于沸腾的水槽或蒸气槽中，15分钟后再使用，并打开容器盖；热好后盖上锅盖，快速降温到工作温度。接着添加成分的加入：对于温度不稳定的添加组分，要在培养基降温到47~50℃时添加，对于已消毒的添加组分，要先降温到室温再添加，以防止冷液引起琼脂胶结或形成片状。慢慢地把所要加的东西倒入介质中，搅拌均匀，然后尽可能快地把它们分到备用的容器里。

最后是培养基的弃置：处理已被污染的、尚未用过的培养液，必须按照有关法律、法规的要求，采取安全方法处理。

培养基分类

培养基种类很多，主要的按以下方面进行分类：

一、按化学分类

1、天然培养基：是一种由动植物或微生物及其抽提液制作而成的培养基。例如。牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基和LB培养基等。常用的天然有机营养物质包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培养基不仅价格低廉，而且广泛用于实验室中，而且适合于工业化的大型微生物发酵。

2、组合培养基：是一种以自然介质为基础，通过化学物质模拟合成，人工设计合成的介质。例如，高氏1号培养基和查氏培养基等。合成培养基具有特定的配方，在配制合成培养基时，具有很好的重复性。但是，与天然培养基比较，它的成本比较高，微生物在里面的生长速度也比较缓慢，通常适合在实验室里使用，来开展与微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。

3、半组合培养基：是一种以化学药剂为主，外加一些自然成份为基础的介质。例如，马铃薯蔗糖培养基。

二、按物理分类

1、液体培养基：由80-90%的水分组成，并含有可溶或不可溶的营养素。

2、固体培养基：一种经调配而成的固态培养基。按其特性可划分为固化培养基，不可逆固化培养基，天然固体培养基、滤膜。

3、半固体培养基：将微量的凝结剂添加到液态介质中，制成一种半固态介质。

4、脱水培养基：又称预制干燥培养基，是指除了水以外，所有成份都是商品培养基。

三、培养功能分类

选择性培养基：一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。

鉴别培养基：一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。例如，伊红美蓝乳糖培养基（EMB）。

以及基础培养基、加富培养基等。

四、根据使用范围还可分为：细菌培养基、放线菌培养基、微藻培养基、酵母菌培养基、真菌培养基、食用菌菌种培养基、动物细胞培养基等。