CHB患者HBsAg特异性B细胞可能预测干扰素治疗效果

慢性乙型肝炎病毒感染(CHB)患者的治疗指南目前两类抗病毒药物：核苷(酸)类似物和干扰素。与核苷(酸)类似物相比，干扰素具有更高的HBsAg和HBeAg清除率，但其治疗依从性、副作用可能阻碍临床应用。因此，确定可靠的预测生物标志物以实现大化效益至关重要。

在HBV感染中，乙肝表面抗原(HBsAg)特异性B细胞的损伤和恢复与HBsAg血清学转化相关。然而，目前对HBsAg特异性B细胞免疫的认识有限，并且没有特异性和敏感性的方法来检测HBsAg特异性B细胞。

2023年欧洲肝脏研究协学(EASL)年会-国际肝脏大会(ILC 2023)将于2023年6月21-25日在奥地利维也纳举行。南京大学医学院附属鼓楼医院吴超教授/李婕教授团队发表于会上的一项研究，提出了一种单细胞水平检测HBsAg特异性B细胞的方法[采用优化的ELISPOT(酶联免疫斑点)方法]。这种方法可以探索不同阶段的HBsAg特异性B细胞的反应，以及这些反应对CHB患者干扰素治疗效果的影响。肝胆相照平台特邀李婕教授进行分享。

研究方法

本研究纳入142例不同免疫阶段的CHB患者，其中90例为初治(慢性肝炎期HBeAg阳性21例，慢性肝炎期HBeAg阴性5例，慢性感染期HBeAg阳性9例，慢性感染期HBeAg阴性55例)。52例患者为既往经治患者。

在5天的时间内刺激外周血淋巴细胞，使用ELISPOT监测外周血HBsAg特异性B细胞的频率。分析血清HBsAg水平与外周血HBsAg特异性B细胞的相关性，初步观察干扰素治疗前后HBsAg特异性B细胞的动态变化。

研究结果

在慢性肝炎期，6例(28.6%)HBeAg阳性患者的ELISPOT检测结果呈阳性，表明存在外周血HBsAg特异性B细胞，而慢性肝炎期HBeAg阴性患者ELISPOT检测无人呈阳性(0%)。

慢性感染期的患者中，3例(30%)HBeAg阳性和14例(25.5%)HBeAg阴性患者ELISPOT显示阳性结果。

HBeAg阳性慢性肝炎组外周血HBsAg特异性B细胞数量高于HBeAg阴性慢性肝炎组(p<0.05)。

干扰素治疗后，ELISPOT阳性组“功能治”比例高于基线ELISPOT阴性组(阳性组为50%，阴性组为17.2%，P<0.05)。

干扰素治疗后，10例(52.6%)患者HBsAg特异性B细胞增加，4例(21.1%)患者实现“功能性治”。同时，4例(21.1%)HBsAg特异性B细胞减少的患者和5例(26.3%)HBsAg特异性B细胞没有变化的患者未实现“功能性治”。

研究结论

在不同免疫状态的CHB患者中，外周血中含有不同比例的HBsAg特异性B细胞。干扰素治疗前外周血中是否存在HBsAg特异性B细胞可能是预测干扰素治疗效果的重要免疫学指标。

研究者说 李婕教授

干扰素是临床指南的慢性乙型病毒性肝炎的抗病毒治疗药物，是乙肝临床治的重要用药，但由于它疗效有限，而且在使用过程中患者还要克服注射给药的不便和药物不良反应，因此，确定可靠的疗效预测生物标志物显得尤为重要。

乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 消失伴或不伴血清转化为乙型肝炎表面抗体 (HBsAb) 被认为是慢性乙型肝炎 (CHB) 的一种功能性治和抗病毒治疗的理想终点。越来越多的研究表明，除先天免疫系统和病毒特异性T细胞外，B细胞在防御HBV方面也发挥作用。HBsAg特异性B细胞是体内HBsAb抗体的来源，因此对其功能的研究应引起足够的重视。

本研究采用优化的ELISPOT（酶联免疫斑点）方法对接受干扰素治疗患者治疗前基线外周血中HBsAg特异性B细胞进行检测。该方法能够准确的评估患者治疗前B细胞HBsAb分泌功能，可以准确反映患者抗病毒体液免疫的强度。进一步研究发现治疗前ELISPOT阳性组患者实现“功能治”的比例高于基线ELISPOT阴性状态患者。该结果提示，有效的B细胞参与是清除HBV的必要条件。B细胞反应的缺陷可能是导致治疗失败的原因之一。

因此，上述研究提示干扰素治疗前外周血中是否存在HBsAg特异性B细胞可能是预测干扰素治疗效果的重要免疫学指标，其潜在机制也值得进一步探究。