一种更精确便宜检测KRAS基因突变的新方法

　 由意大利研究者开发出的一种更加简单便宜而准确的KRAS突变的检测方法。目前许多专家团体均建议结肠癌患者在治疗前进行常规的KRAS突变检测。此检测可确认KRAS突变阳性的患者，此类患者应用抗表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体西妥昔单抗（爱必妥，百时美施贵宝公司，礼来公司）和帕尼单抗（维克替比，安进公司）通常无效。仅KRAS为野生型的患者适于进行上述靶向治疗。

　　在西班牙巴塞罗纳召开的第14届世界胃肠道肿瘤大会上，研究者通过展板对此种检测新方法的细节进行了宣传与介绍。此次研究报告的作者是来自于意大利库内奥SC总医院癌症遗传学和肿瘤转化医学实验室的Christiana Lo Nigro博士，他在接受Medscape Medical News采访时说：“这种新的检测方法便宜、快捷而且敏感，对患者基因型的诊断也更加准确。”

　　Lo Nigro博士介绍说，目前，KRAS突变检测的金标准是PCR产物的桑格定序法。“虽然此种方法可在基因扩增的基础上检测并确认患者存在的所有突变，但是此方法耗时、性价比不高，而且高敏感度大约仅仅为15-20%。

　　另一种检测方法为高通量焦磷酸测序法，此法更快些但还是需要一天时间来完成检测。Lo Nigro博士认为“这种方法的性价比也不高”，因为检测设备很贵，而且仅在几个检测中心有这种设备。另外，虽然焦磷酸测序法有约5%的检测限，但约5-10%样本处于检测“灰色地带”，即无法获得明确的测序结果。

　　意大利研究者所开发的这一检测新方法是基于可竞争引物结合位点的肽核酸（PNA）-引导下的PCR发夹技术（PNA分析法）。Lo Nigro博士解释道：“标准引物与新合成的PNA分子之间存在PCR的竞争，多数实验室已经配备了PCR的实验材料，只需新合成用于检测反应的15mer的PNA [NH2-GGAGCTGGTGGCGTA-CONH2]。

　　研究者的报告声称，新的检测方法只需1个小时，而且较目前常用的方法敏感性高。Lo Nigro 进一步解释：“桑格测序法以及的焦磷酸测序法的灵敏度极限分别为20%和10%，而此种新检测方法仅为2%。”

　　她指出：“采用这种新的方法，仅2%的KRAS突变患者会被误诊为KRAS野生型（没有KRAS突变）。这一点很重要，因为对患者基因突变型的误判会导致其接受毫无益处反而带来不良反应的治疗。

对不同检测方法进行比较的研究

　　研究者对三种方法用于检测68位结肠癌患者肿瘤标本的KRAS突变进行了盲法的对照研究，该结果被展示在宣传海报上。在68个样本中，桑格测序法发现有29个存在KRAS突变（42.6%），焦磷酸测序法检出32个（47.1%），而新的PNA介导的发夹PCR技术检出53个KRAS突变样本（77.9%）。

　　另一个研究进行了3个独立的实验以分析PNA介导的发夹PCR技术在检测KRAS突变的敏感性，结果发现此方法区分突变与野生型等位基因的敏感度高达1.4%（P < .005）。

　　研究者总结道：“我们已经证明PNA介导的发夹PCR技术更敏感。”这种方法耗时更短、价格更低、应用广泛、仅需一步式PCR与电泳设备即可完成。他们总结：“该技术适用于临床常规分析以确定患者是否需行EGFR靶向治疗。”