石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别

        一、石蜡切片 
        把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。为能得到平整无皱褶的组织切片。可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。 
        二、冰冻切片 
        冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中常用的一种切片方法，其突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机和配套的切片机(vibratome)可以把新鲜组织(不固定、不冷冻)切成20～400pm的厚片，以漂浮法在反应板内进行组织化学或免疫组织化学染色。因组织不冷冻，无冰晶形成也无组织抗原破坏，染色前又避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，故能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原。振动切片主要用于显示神经系统抗原分布的研究。对于柔软的胚胎脑组织，可用低熔点(45—55℃)10％琼脂糖包埋，振动切片机切成厚片(40—100gm)，采用漂浮法在反应板内进行免疫荧光组织化学染色，激光扫描共聚焦显微镜观察。