单个B细胞技术在肝脏疾病中的应用

单克隆抗体是具有高度特异性的抗体，目前已广泛应用于多种疾病，尤其是在各种病毒引发的肝损伤的治疗和研究中，显示出了不可替代的作用。近年来基于单个B淋巴细胞直接制备的人源性单克隆抗体具有抗原特异性高、免疫原性低及安全高效等优点，越来越受到瞩目，在肝脏疾病的治疗和研究中展现出了广阔的应用前景。

近年来，在各种急慢性肝炎尤其是 HBV、HCV、HDV 和 HEV感染导致的病毒性肝损伤的生物治疗及科学研究中涌现出了大量的单克隆抗体。这些单克隆抗体大部分集中应用于干涉和干扰肝炎病毒的传播和肝脏的感染。如在治疗肝移植后供肝急性HCV 再感染的研究方面的抗 B 族Ⅰ型清道夫受体人单克隆抗体、HCV1 抗体和甘露聚糖结合凝集素－HCV1抗体等。目前已知的应用于肝脏疾病的单克隆抗体的研究主要倾向于抗体的种类、结构、功能、特异性结合位点和疾病感染的类型、阶段等方面，但有关单克隆抗体的制备方法的论述和研究却并不多见，且这些单克隆抗体的制备方法大都为较为传统的抗体制备技术。因此，选择先进高效的单克隆抗体的制备技术将为肝脏疾病的生物治疗和科学研究带来广阔的发展前景。

该技术以单个B细胞为起始点，利用每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，直接从免疫的兔子中通过随机分离和抗原特异性分离两种方式从外周血或淋巴组织中分离单B细胞，从单个B细胞中扩增出抗体基因，进而获得抗原特异性抗体。该技术所制备的抗体具有高通量、高效率、高稳定性、高特异性等优点，保留了丰富的基因多样性和轻重链可变区的天然配对，应用前景广泛，是高效的抗体筛选方法之一。特别是在快速应对病原微生物传染病的抗体开发上有着巨大优势。

吉林大学白求恩第一医院转化医学研究院研究人员基于单个B细胞技术，建立外周血单个抗体分泌细胞分离和单个细胞RT-PCR系统，高效快速克隆高度特异性、全人源性的HBV单克隆抗体。研究人员选择3例HBV感染恢复期患者，从外周血中富集B淋巴细胞，加入HBcAg Peptide pool活化B淋巴细胞，流式分选出记忆性抗体分泌细胞(CD19~+CD10~-IgG~+CD27~+)，通过有限稀释法获得单个细胞，单细胞RT-PCR反转出cDNA，巢式PCR扩增抗体重链恒定区序列片段，将PCR产物纯化并克隆至pEASY~-T1 simple克隆载体，进行测序鉴定。

通过ELISA结果显示，3例HBV感染恢复期患者血浆中均检测到较高水平IgG，与健康志愿者相比，差异均有统计学意义(P值均0.05)。流式结果显示，B淋巴细胞比例均高于94%，且均可分离出记忆性抗体分泌细胞。从分离的抗体分泌细胞中挑选出24个含有1个形态完好的细胞，经鉴定，其中有14个扩增成功，且条带在200 bp左右，与预期片段大小相符。对抗体重链序列分析显示成功扩增出抗体恒定区片段。这说明，通过成功构建了单个抗体分泌细胞分离和单个细胞RT-PCR系统，获得了抗体重链序列，为后期全人源性乙型肝炎单克隆抗体的高通量生产打下了坚实的基础。 

单个 B 淋巴细胞抗体制备技术作为发展为迅速和成熟的一类单克隆抗体制备技术，具有准确、高效、简便等诸多优点，产生的抗体更是具有全人源性，高度抗原特异性、亲和性等优势。因此，将 B 淋巴细胞抗体制备技术应用于肝脏疾病的治疗和研究的抗体制备中，将为寻找和开拓肝脏疾病的治疗、预防、诊断方法及相关科学研究开辟新的道路。