伊曲康唑分散片人体药动学及生物等效性研究

【摘要】  目的: 研究伊曲康唑分散片和伊曲康唑胶囊在正常人体的药动学与生物等效性。方法:18名健康男性志愿受试者随机交叉口服0.2 g单剂量伊曲康唑分散片受试制剂和伊曲康唑胶囊参比制剂后，采用高效液相色谱法测定伊曲康唑的血浆药物浓度，采用方差分析及双单侧t检验判定其生物等效性。结果:两种制剂均符合一级吸收开放性一室模型，伊曲康唑分散片和伊曲康唑胶囊主要药代动力学参数AUC0→72分别为（2 221.9±762.9）和（2 311.9±844.4）ng/(h·mL)，AUC0→∞分别为（2 374.2±790.8 ）和（2 473.3±878.9）ng/(h·mL)，Cmax分别为（179.8±56.8）和（174.1±64.1）ng/mL，Tmax分别为（3.6±1.0）和（4.1±1.3）h，t1/2分别为（16.5±4.2）和（17.5±3.1）h。伊曲康唑分散片的相对生物利用度为（97.8±14.0）%。结论:伊曲康唑分散片和伊曲康唑胶囊为生物等效制剂。

【关键词】  伊曲康唑；药物代谢动力学；生物等效性

    伊曲康唑为抗真菌药物，主要用于念珠菌性阴道炎、花斑癣、皮肤癣菌病如足底部癣、手掌部癣、口腔念珠菌病、真菌性角膜炎、甲真菌病以及系统性真菌病等。由于伊曲康唑是一种高亲脂性化合物，患者服用伊曲康唑后生物利用度波动较大［1］。临床上一般采取餐后立即给药的方式，但食物成分又会影响其生物利用度［23］。本文对两厂家生产的伊曲康唑分散片和伊曲康唑胶囊的人体药动学和相对生物利用度进行研究，并对两制剂进行生物等效性评价，为临床用药提供参考。

　　1  材料与方法

　　1.1  试验材料

　　1.1.1  药品与试剂

　　受试制剂（T）：伊曲康唑分散片（0.1 g/片，海南新世通制药有限公司，批号：20060701）；参比制剂（R）：伊曲康唑胶囊（斯皮仁诺，0.1 g/粒，西安杨森制药有限公司，批号：060629487）。伊曲康唑对照品（含量99.8%，由海南新世通制药有限公司提供）。乙腈（色谱纯，CALEDON LABORATORIES LTD，加拿大），甲基叔丁基醚（色谱纯，TEDIA Company INC，美国），其它试剂为国产分析纯，水为重蒸馏水。

　　1.1.2  仪器

　　Agilent 1100 高效液相色谱仪，配Agilent 1100 FLD检测器及Chemstations 色谱工作站（Agilent公司，美国）。AB135S电子分析天平（梅特勒托利多，瑞士），TDZ4AWS低速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。

　　1.2  血药浓度测定方法［1］

　　1.2.1  色谱条件

　　采用Hypersil ODS2（4.6 mm×200 mm，5 μm）色谱柱，柱温30 ℃；流动相：（1 000 mL水＋1 mL三乙胺＋750 μL 磷酸）∶乙腈（66∶34，V/V），流速：1.0 mL/min；检测波长：Ex 260 nm，Em 365 nm；进样量：20 μL。

　　1.2.2  溶液的配制

　　精密称取伊曲康唑对照品6.8 mg置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得68.0 μg/mL的伊曲康唑对照品储备溶液，用甲醇逐步稀释成5 440.0、1 088.0、217.6 ng/mL的对照品工作溶液，置冰箱中冷藏备用。

　　1.2.3  血样处理

　　精密量取样品血浆0.5 mL于10 mL离心管中，加1 mol/L的氢氧化钠溶液200 μL，旋涡振荡5 min，再加入3.0 mL甲基叔丁基醚，旋涡振荡2 min，3 000 r/min离心5 min，吸取上清液置于5 mL玻璃离心管中，45 ℃水浴氮气吹干，残渣加100 μL流动相溶解，20 μL进样。外标法以峰面积进行定量分析。

　　1.2.4  标准曲线制备

　　用空白血浆将伊曲康唑标准储备液稀释成4.4、10.9、21.8、54.4、108.8、217.6、435.2 ng/mL的系列标准血浆样品，按样品处理方法处理并测定，以伊曲康唑峰面积对伊曲康唑浓度进行线性回归，得标准曲线方程。

　　1.2.5  回收率及精密度测定

　　在空白血浆中加入标准溶液，分别配制成低、中、高浓度（10.9、108.8、435.2 ng/mL）标准系列血样各5份，按“样品处理”方法处理并测定，另用甲醇配制含伊曲康唑浓度分别10.9、108.8、435.2 ng/mL的甲醇溶液各1 mL，进样20  μL，记录伊曲康唑峰面积，以此为标准，将两组峰面积进行比较计算伊曲康唑的萃取回收率。取空白血浆及对照品溶液，按“标准曲线制备”项下方法制备伊曲康唑低、中、高三个浓度（10.9、108.8、435.2 ng/mL）的质量控制（QC）样品，每一浓度平行操作5份，代入线性方程计算浓度，以测得值与加入值的比值计算回收率，并计算日内精密度。连续3d配制并测定上述浓度样品，考察方法的日间精密度。

　　1.2.6  样品稳定性

　　用空白血浆配制3个不同浓度（10.9、108.8、435.2 ng/mL）的样品，分别进行冻融实验，20 ℃冻存条件下稳定性及样品室温稳定性试验。结果样品反复冻融4次、20 ℃冻存条件下120 d、室温放置10 h均稳定。

　　1.3  生物利用度试验方法

    18名健康志愿受试者，均为男性，年龄（22.8±1.3）岁，身高（169.5±4.9）cm，体重（60.1±6.3）kg，无烟酒嗜好，实验前经询问病史、体格检查和实验室检查未发现异常。受试者无药物过敏史和药物依赖史，无慢性病史，两周内未服用任何药物。受试期间统一清淡饮食，不使用除受试（参比）制剂以外的任何药物，不接受烟、酒及含咖啡因饮料。受试者试验前签署知情同意书。试验方案经中南大学湘雅二医院医学伦理委员会批准。

    采用两制剂双周期交叉试验设计，将受试者随机等分成两组，每组9人。受试者禁食12 h后，于早上8：00分别口服受试制剂或参比制剂0.2 g，统一用温开水200 mL送服。服药前1 h及服药后2 h禁止饮水，服药后4 h及10 h统一进食标准餐。受试者服药前及服药后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0 h 取静脉血4 mL。间隔2周后，交叉单剂量服用参比制剂或受试制剂，并于相同时间点采集血样。血样置肝素管中，立即离心，分离出血浆，于20 ℃冰箱中贮藏。

　　1.4  药动学分析及数据统计方法

    18名受试者血药浓度时间数据经DAS药动学程序［4］处理，符合一室模型。拟合求得消除速率常数λz，t1/2，梯形面积法求得AUC0→72，AUC0→∞=AUC0→72+
C72/λZ，Tmax及Cmax均用实测值，相对生物利用度 F=AUC0→72（T）/AUC0→72(R)×100 %。

    数据统计方法：AUC0→72和Cmax经对数转换后进行药物间、周期间、个体间的三因素方差分析，再以双单侧t检验进行等效性判断。若受试制剂AUC0→72对数值的90 %可信限落在参比制剂80％～125 %范围内，Cmax对数值的90%可信限落在参比制剂70％～143 %范围内，则认定受试制剂与参比制剂生物等效［23］。Tmax采用非参数检验方法，判断试验制剂与参比制剂之间有无差别。

　　2  结果

　　2.1  色谱图

    图1分别为空白血浆、标准品、空白血浆中加入标准品和受试者服药后血样的色谱图。伊曲康唑的保留时间约为6.5 min，血浆内源性物质及其它杂质不干扰样品的分离测定。

　　2.2  标准曲线线性范围和小可定量浓度

    回归方程为A=0.6380C+3.2756，相关系数r=0.9997。伊曲康唑血浆浓度在4.4～435.2 ng/mL 范围内线性关系良好，低定量限为4.4 ng/mL（S/N>10）。

　　2.3  回收率及精密度试验结果

    萃取回收率：伊曲康唑低、中、高浓度的萃取回收率分别为（89.1±2.8）%、（88.3±3.4）%、（90.5±2.2）%。

    方法回收率及精密度：伊曲康唑低、中、高三个浓度的方法回收率、日内精密度、日间精密度测定结果见表1。方法回收率均在85%～115%之内，日内、日间RSD均小于15%。符合生物等效性研究的方法学要求。表1  回收率和精密度试验结果（略）

　　2.4  血药浓度测定结果

    18例受试者口服伊曲康唑分散片和伊曲康唑胶囊0.2 g后各时间的平均血浆药物浓度时间曲线见图2。
      　
　　2.5  药动学参数

    单剂量口服伊曲康唑T和R制剂0.2 g后的主要药代动力学参数见表2。表2  主要药代动力学参数（略）

　　2.6  生物等效性分析结果

    AUC0→12、Tmax、Cmax分别经三因素方差分析，仅个体间差异有统计学意义（P<0.01），药物间、周期间差异无统计学意义。经双向单侧t检验，logAUC0→72TL=5.79，TH=7.89，均大于T0.05（1.729），P<0.05；logCmaxTL=8.62，TH=7.32，均大于t0.05（1.729），P<0.05。等效性检验合格，说明试验制剂与参比制剂均在规定的80%～120%范围内，90%置信区间AUC0→72为91.30%～102.3%，Cmax为95.3%～111.4%。受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为（97.8±14.0）%。Tmax采用非参数检验方法检验符合要求。因此判定两制剂具有生物等效性。

　　3  讨论

    本研究建立的HPLC法测定伊曲康唑的血浆药物浓度，色谱条件稳定。方法简便，特异性高，无内源性物质及其他杂质干扰，回收率、精密度等符合药动学和生物利用度研究的要求。

    AUC0→72、Tmax、Cmax分别经三因素方差分析，周期间差异无统计学意义（P>0.05），说明实验设计合理，无周期间影响。受试制剂和参比制剂的各主要药动学参数之间差异无统计学意义（P>0.05）。双单侧t检验结果表明，试验制剂与参比制剂为生物等效制剂。

    试验结果中，健康受试者口服伊曲康唑0.2 g分散片后，达峰浓度时间Tmax为3.6 h左右，口服伊曲康唑0.2 g胶囊后，达峰浓度时间Tmax为4.1 h左右，受试制剂Tmax较参比制剂小，符合分散片口服吸收快的特点。

【参考文献】
  　　［1］缪海均, 刘皋林, 恽芸蕾, 等. 盐酸伊曲康唑胶囊的人体生物等效性研究 ［J］. 中国药房, 2006, 17(1): 4243.

　　［2］Barone JA, Koh JG, Bierman RH, et al. Food interaction and steadystate pharmacokinetics of itraconazole capsules in healthy male voluneteers ［J］. Antimicrob Agents Chemother, 1993, 37(4): 778.

　　［3］Feola D, Rapp RP. Effect of food intake on the bioavailability of itraconazole ［J］. Clin Infect Dis, 1997, 25(2): 344

　　［4］孙瑞元. Drug And Statistics软件, 2.0.1版.

 

作者：何周康，阳利龙，祝文兵，张毕奎，朱运贵，徐萍

作者单位：湖南省儿童医院，湖南长沙 410007