交泰丸对与下丘脑—垂体—肾上腺轴相关的细胞因子的影响探讨

【关键词】  交泰丸/药理学； 失眠/中药疗法； 细胞因子/血液； 疾病模型，动物； 大鼠 
交泰丸，出自明代《韩氏医通》，由黄连、肉桂两味药物以特殊的配伍比例（质量比为10∶1）组成，具有交通心肾、安神之功效，主要用于治疗心肾不交引起的惊悸、夜寐不安等症，临床疗效确切［1-2］。本研究观察了交泰丸对与下丘脑—垂体—肾上腺（HPA）轴相关的细胞因子的影响。 
    1  材料与方法 
    1.1  药物  黄连和肉桂均购自广州中医药大学附属医院，经广州中医药大学中药学院中药鉴定教研室鉴定为正品；对氯苯丙胺酸（PCPA）为美国Sigma公司产品。 
    1.2  动物  健康清洁级雄性SD大鼠50只，体质量180～200g，从广东省医学实验动物中心购进，合格证号：2006A015。每只大鼠均在相同条件下自由饮水，摄食，保持自然光照。 
    1.3  试剂  白细胞介素1（IL1）试剂盒（批号：24985001）为B＆M公司产品；肿瘤坏死因子α（TNFα）试剂盒（批号：20061120）为晶美公司产品。 
    1.4  主要仪器  CR22G高速冷冻离心机（日本日立）；RT2100C酶标分析仪（广州览众医疗设备有限公司）；GSX500BSⅡ型隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；AUW120D型分析天平（日本岛津）；各种规格移液枪（广州实技科学仪器有限公司）。 
    1.5  分组  按照随机原则，利用随机数字表法将大鼠分为5组：正常对照组、模型组、泻心组（单用黄连15g）、补肾组（单用肉桂1.5g）、交通心肾组（黄连、肉桂质量比为15g∶1.5g），每组10只。 
    1.6  造模［3］  除正常对照组外，其他各组均一次性腹腔注射PCPA300mg/kg，30h后观察大鼠行为，复制大鼠完全失眠模型。 
    1.7  给药  造模成功后，正常对照组与模型组分别用生理盐水灌胃（2.5g·kg-1·d-1），其他各组以不同比例配伍的药液分别灌胃（2.5g·kg-1·d-1），每天1次，连续7d。 
    1.8  样品采集与处理  实验各组后一次给药24h后，用100g/L水合氯醛腹腔注射（2.3mL/kg）麻醉后，腹腔静脉取血3mL，静置1h，4℃过夜，1 500r/min离心30min，取上清液，大鼠血清中IL1、TNFα 含量采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测，均严格按照试剂盒操作。 
    1.9  统计学方法  采用SPSS 11.0统计软件进行统计分析。 
    2  结果 
    2.1  一般情况  大鼠在PCPA腹腔注射30h后出现烦躁不安，白天也活动不停，不能正常睡眠，昼夜节律基本被破坏，出现完全失眠状态，说明失眠模型复制成功。各用药组连续给药7d后，模型组大鼠失眠状态无明显改善，泻心组大鼠失眠有一定好转，补肾组大鼠失眠有加重的趋势，交通心肾组大鼠失眠明显减轻。 
    2.2  各组大鼠血清IL1、TNFα含量比较表1结果显示，模型组IL1、TNFα水平显著性降低（P＜0.05或P＜0.01）；交通心肾组IL1、TNFα水平显著性升高（P＜0.05）；泻心组IL1、TNFα水平有一定程度升高，补肾组以上2指标水平低于模型组，但与模型组比较均无显著性差异（P＞0.05）。 表1  各组大鼠血清IL1、TNFα含量比较统计方法：方差分析；①Ｐ＜０.０５，②Ｐ＜０.０1，与正常对照组比较；③Ｐ＜０.０5，与模型组比较  转贴于 中国论文下载中心

3  讨论 
    中医认为人的睡眠是营卫之气正常循行，阴阳之气规律转化的结果，这种规律性遭到破坏，则人体就表现出睡眠障碍。现代医学认为睡眠分为浅睡眠和深睡眠，分别称慢波睡眠（SWS）和快眼动睡（REM）。库完善［4］研究提出，HPA轴的功能与睡眠状态密切相关，夜间睡眠早期SWS占优势，HPA轴分泌活动受抑制，睡眠后期则REM占优势，HPA轴分泌呈活跃状态。通过调节HPA轴可以改善睡眠状态，维持各睡眠成分的正常比例。HPA轴的相关调节因子不仅参与对HPA轴的调节，同时也直接参与了对睡眠的调节。 
    细胞因子不但是重要的免疫调节因子，而且具有广泛的中枢调节作用，它们不仅在外周血液单核细胞中释放并存在，而且外周神经和大脑中也存在，因此细胞因子能通过不同线路影响中枢神经系统的睡眠过程［5］。IL1是一种睡眠因子，研究表明［6-7］，睡眠剥夺（SD）时IL1以及其他促睡眠物质在体内的蓄积标志着睡眠的积累，这些物质给机体以睡眠压力，从而形成SD后的睡眠“反跳”现象，以补偿所失去的睡眠。TNF在免疫系统影响睡眠过程中起到中介的作用，可通过提高脑内5羟色胺（5HT）的更新率，增强5HT能神经元的功能，延长动物的慢波睡眠时间。 
    本实验通过腹腔注射对氯苯丙胺酸复制大鼠失眠状态。失眠模型大鼠血清中IL1、TNFα含量均下降，与正常对照组比较差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）；泻心组大鼠IL1、TNFα含量有所升高，补肾组大鼠IL1、TNFα含量降低，甚至低于模型组，但与模型组比较无显著性差异（P＞0.05）；交通心肾组大鼠IL1、TNF α含量升高，与模型组比较差异有显著性意义（P＜0.05）。 
    交泰丸由黄连、肉桂按10∶1的比例配伍而成，方中黄连大苦大寒，清泄亢盛之心火，使心阴免受煎灼，得以下润于肾；肉桂辛甘大热，助阳补炎，引火归源，能助肾中阳气、益命门之火，蒸肾中之阴得以化而上奉心阳。有研究表明，交泰丸中大剂量苦寒的黄连对HPA轴具有抑制作用［8］，故泻心组大鼠IL1、TNFα含量升高，所以大鼠失眠有所减轻；小剂量辛温的肉桂对HPA轴具有兴奋的作用［8］，故补肾组大鼠IL1、TNFα含量降低，大鼠失眠状态不但没有减轻，反而有所加重；交通心肾组通过黄连与肉桂按10∶1比例配伍后，IL1、TNFα含量均升高，因为黄连用量显著大于肉桂用量，IL1、TNFα含量虽有升高，但由于肉桂的抑制作用不会升高太过，说明交泰丸通过大剂量寒凉药与小剂量辛温药的配伍后，能有效调节HPA轴反馈与负反馈的动态过程，从而发挥交通心肾治疗失眠的作用。