黑木耳多糖和五味子醇提物对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用

　   作者：徐秀卉1，杨　波2，陆振宇1 作者单位：1.杭州康恩贝制药有限公司(杭州　310052);2.哈尔滨商业大学药学院(哈尔滨　150076)

　　【摘要】 目的：研究黑木耳多糖和五味子醇提取物配伍使用对对乙酰氨基酚引起的小鼠急性肝损伤协同保护作用。方法：以对乙酰氨基酚200mg/kg腹腔注射给药造成小鼠急性肝损伤模型，通过测定小鼠血液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)和肝脏组织还原性谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的含量来评价五味子醇提取物、黑木耳多糖及二者配伍后对小鼠肝损伤的保护作用。结果：五味子醇提取物(200mg/kg)和黑木耳多糖(250mg/kg)单独给药对肝脏的保护作用不显著。二者配伍给药(五味子醇提取物+黑木耳多糖，100mg/kg+125mg/kg,200mg/kg+250mg/kg)可以显著改善ALT、AST、GST、GSH和MDA各项指标(P<0.05或P<0.01)。两药相互作用指数CDI均小于1.00。结论：五味子醇提取物与黑木耳多糖配伍使用可以保护对乙酰氨基酚引起的急性肝损伤，二者作用呈现协同效应。

　　【关键词】 黑木耳多糖;五味子;对乙酰氨基酚;肝损伤

　　Abstract：ob[x]jective：To study the synergistic protective effect of alcohol extracts from Shizandra (AES) with Auricularia auriculajudae polysaccharides (AAP) on Paracetamol (Par)-induced acute liver injury in mice.Methods：Mice liver injury was induced by peritoneal injection Par physiologic saline solution at a dose of 200mg/kg.The activities of serum alanine amiotransferase (ALT)，aspartate aminotransferase (AST)，glutathione s-transterase (GST) and malonaldehyde (MDA)，glutathione (GSH) in the liver tissue were observed to evaluate the effects of AES，AAP and their combination on liver injury.Results：The AES (200mg/kg) or AAP (250mg/kg) alone did not produce any effect on liver injury.The combination of AES at dose of 100、200mg/kg respectively with AAP at dose of 125、250mg/kg significantly improved the levels of ALT、AST、GST、GSH and MDA (P<0.05 or P<0.01).And the coefficients of drug interaction (CDI) were all less than 1.00.Conclusion：The combination of AES and AAP may play a part in protecting mice liver from Par，and the AES and AAP show the synergistic effect.

　　Key words：Auricularia auriculajudae polysaccharides;Shizandra;paracetamol;liver injury

　　现代药理学研究表明，五味子(Schisandra chinensis Turcz Bail.)醇提物对肝损伤具有一定的保护作用，其主要活性物质为五味子醇甲和五味子乙素[1]。黑木耳多糖是从黑木耳(Auricularia auriculajudae)中提取的多糖类物质，具有免疫调节，抗肿瘤，抗衰老，降血糖，抗氧化[2-6]等作用。本实验研究五味子醇提取、黑木耳多糖及其组合物对对乙酰氨基酚引起的小鼠急性肝损伤的保护作用。

　　1　材料与方法

　　1.1　药物与试剂

　　对乙酰氨基酚(SIGMA，批号：115K0098);ALT、AST、GST、GSH、MDA及蛋白定量试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

　　1.2　仪器

　　BS124S电子天平(德国赛多利斯);低速离心机(北京医用离心机厂);紫外可见分光光度计(上海光谱有限公司)。

　　1.3　试液的制备

　　干燥的五味子药材1000g以10倍量95%乙醇进行回流提取两次，每次2h，合并提取液，过滤，减压浓缩至无醇味，取出，水浴挥发至药材溶液为100g。称取10g预处理的黑木耳粉末，以微波功率90W，提取时间20min，料液比1：25，提取次数4次为提取条件进行提取。提取液以4000r/min离心10min，取上清液加入95%乙醇至乙醇终浓度为80%，静置过夜，抽滤，沉淀经无水乙醇、丙酮、石油醚各抽洗3次，干燥得黑木耳多糖，以苯酚硫酸法测得多糖含量为45.6%，配置成1000ml多糖溶液。

　　1.4　动物分组

　　雄性昆明种小鼠，体重18-22g，随机分为7组，每组10只，即正常对照组(生理盐水25ml/kg)，模型组(生理盐水25ml/kg)，五味子醇提取物组(200mg/kg)，黑木耳多糖组(250mg/kg)，配伍低剂量组(五味子醇提物50mg/kg+黑木耳多糖62.5mg/kg)，配伍中剂量组(五味子醇提物100mg/kg+黑木耳多糖125mg/kg)，配伍高剂量组(五味子醇提物200mg/kg+黑木耳多糖250mg/kg)。每日按计量灌胃给药，连续10d，末次给药后1h，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射对乙酰氨基酚生理盐水溶液200mg/kg造模。小鼠禁食24h后，摘除小鼠眼球取血制血清并取出肝脏制备匀浆测定相应指标。

　　1.5　指标测定

　　1.5.1　血清AST、ALT、GST的测定

　　取血后静置1h,3000r/min离心15min，取血清，AST、ALT、GST的测定均按试剂盒说明书进行。

　　1.5.2　肝匀浆中MDA和GSH的测定

　　取出肝脏，以0.9%冰生理盐水清洗掉血液后制成10%组织匀浆备用。GSH、MDA及蛋白含量的测定均按试剂盒说明书进行。

　　1.5.3　药物联合作用评价

　　采用两药相互作用指数(CDI)评价两药相互作用性质，CDI=AB/(A×B)。其中AB为两药联合组与对照组指标的比值;A或B是各药物单独使用组与对照组指标的比值。若CDI<1，两药作用性质为协同，CDI=1，两药作用性质为相加，CDI>1，两药作用性质为拮抗。

　　2　结果

　　2.1　对小鼠血清AST、ALT的影响

　　与正常组相比较模型组AST和ALT均显著升高。五味子醇提取物和黑木耳多糖对小鼠血清中AST的水平没有显著的影响，但是可以显著降低ALT的水平(P<0.05)。配伍低、中、高剂量组对AST的影响分别为P<0.05，P<0.05和P<0.01;对ALT的影响分别为P<0.05，P<0.01和P<0.01。结果见表1。表1　对小鼠血清中AST和ALT的影响

　　2.2　对小鼠血清GST和肝组织GSH的影响

　　与正常对照组相比较模型组血清中GST的水平显著升高，肝组织中的GSH水平显著下降。五味子醇提取物对二者无显著影响，黑木耳多糖可升高GSH水平(P<0.05)。配伍低、中、高剂量组对GST的影响分别为P>0.05，P<0.05和P<0.05;对GSH的影响分别为P<0.05，P<0.01和P<0.01。结果见表2。表2　对小鼠血清中GST和肝组织中GSH的影响

　　2.3　对小鼠肝组织MDA的影响

　　与正常对照组相比较模型组肝组织中MDA的水平显著升高。五味子醇提取物、黑木耳多糖及配伍低剂量组对MDA均无显著影响。配伍中、高剂量组均显著降低肝组织中的MDA水平(P<0.01)。结果见表3。表3　对小鼠肝组织中MDA的影响

　　3　讨论

　　实验可知，过量的对乙酰氨基酚可引起小鼠肝脏急性损伤，其代谢过程中产生的N-乙酰基-对苯醌亚胺超过了GSH的解毒能力，从而引起肝功能减退，ALT及AST在血液中的水平显著升高。同时，对乙酰氨基酚还可引起血液中GST升高，肝组织中GSH降低和MDA升高，这一结果可能是对乙酰氨基酚在肝内代谢过程中产生的自由基引起肝细胞膜脂质过氧化造成的。从实验结果来看，配伍剂量组可以显著改善上述各项指标，而五味子醇提取物及黑木耳多糖单独使用效果不明显。另外，CDI结果表明，二者配伍应用具有协同保肝作用。