体液中45种氨基酸的快速串联质谱分析方法

         本文概述了利用放射性同位素标记联合LC/MS/MS方法检测体液中45种氨基酸的方法。本文包括所需仪器,预期结果。该方法可应用于AB SCIEX 3200和4000系列LC/MS/MS系统上。 该方法和Cliquid® AA45/20软件联用,可用于尿液、血清和血浆样品中45种氨基酸的常规检测分析。注:该方法包内不含液相色谱柱和AA45/32或者AA20/20的启动包。 氨基酸同分异构体由于化学特性不同因而分离,每种氨基酸都使用内标来做标准曲线,进而补偿不同仪器带来的差异。 样品先进行蛋白沉淀,然后用iTRAQ®试剂进行衍生。总运行时间为13分钟。

图1. 45种氨基酸的分离色谱图,运行时间为13 min

         标准曲线
         标准曲线使用的是AA45/32启动包的对照样本, 定量检出限从0.5-10 μm,动态线性范围为3-4.5个数量级。 注意: 实际获得的结果可能会由于LC色谱柱分离效果、化学试剂、 仪器性能和样本制备方法不同而有所不同。建议在实际使用之前先对方法进行充分验证。

图2. 上面是方法中丝氨酸的典型性标准曲线。 

         AB SCIEX公司临床研究应用文献
         需要的仪器
         AB SCIEX API 3200TM ,3200 QTRAP® LC/MS/MS或者API 4000TM ,4000 QTRAP® LC/MS/ MS系统 
         安捷伦1100/1200 HPLC二元泵系统,带96孔板的自动进样器以及可加热的柱温箱 
         AA45/32启动包,货号:No.4374891(iTRAQ®试剂,内标,血浆对照样本,用户使用手册) 
         AB SCIEX AAA 液相分析柱 ,货号:No.4374841 
         LC/MS水,甲醇,正己烷和乙腈 
         移液管和标准玻璃器皿