耐药模型的开发思路与构建策略

癌症是全球头号疾病之一。伴随人口老龄化趋势，在世界范围内，每年新增确诊癌症患者数量近两千万，且在逐年增长，以乳腺癌、肺癌、消化道癌症。随着对癌症研究的深入，以及如靶向疗法、免疫疗法、细胞疗法等治疗手段的革新，癌症患者的生存期被大大延长，生活质量也得到提升，使得癌症有“慢性病化”的发展趋势。而伴随这一趋势，肿瘤耐药问题显得越发重要。

肿瘤的耐药

肿瘤的耐药，是指病人在接受了一段时间的治疗，体内的肿瘤组织细胞对原有疗法产生耐受，使其治疗收益降低归零，引发疾病进展的现象过程。耐药性的产生可能是由于病人体内本身存在对原有疗法不敏感的肿瘤细胞群体，经治疗筛选后得以幸存壮大，造成复发，也可能是在治疗过程中，伴随基因组改变、表观遗传学调控、代谢及免疫调控等驱动因素作用，促使肿瘤细胞获得对药物疗法的耐受能力，引起疾病进展。

耐药的发生具有普遍性和个性化特点，即对于各类药物或疗法都有可能产生耐药问题，且造成耐药发生的机制原理因病人而异。目前经研究，造成肿瘤细胞产生耐药的机理包括但不限于以下方面：

（1）肿瘤细胞通过改变药物靶向分子的结构特征，使药物分子无法有效结合目标蛋白；

（2）通过绕过或放弃被药物靶向针对的通路，依赖替代性通路生存，豁免药物疗效；

（3）通过增强细胞生存与逃逸能力，如基因修复、侵袭迁移等，来提高对药物疗法的耐受能力；

（4）通过合成特定代谢产物，中和药物成份，降低其有效活性；

（5）通过调节细胞内外代谢通路，如流入（Influx）与外排（Efflux）通路的调节，或合成胞外基质等保护层，来限制药物成分进入细胞发挥作用等。

耐药模型的构建策略

       构建策略上，可以采用对体外细胞给予药物暴露冲击诱导的方式，来模拟临床病人接受治疗后的获得性耐药产生过程。具体操作而言，本文介绍的方式是结合了脉冲式（Pulsed）与连续式（Continuous）给药冲击方式：脉冲式给药采用单次4~6小时高浓度药物暴露，模拟临床病人接受治疗时的药物代谢与暴露情况；接受脉冲式药物冲击后，细胞将继续在低浓度的药物暴露条件下生长，以维持其产生的耐药性不丢失。经过多轮药物冲击后获得的耐药细胞模型，将与原始的野生型细胞进行对比，以其体外药敏检测的IC50值的比值，即RF值，为判断标准，来衡量耐药性的强弱，并以此作为耐药模型构建成功与否的评价标准。参考McDermott et al.2等同行工作，我们将RF值>5作为判定耐药模型构建成功的标准。

       在成功构建体外耐药细胞系后，可进一步在免疫缺陷小鼠身上构建耐药细胞系的移植瘤模型，研究评价成瘤情况以及其对受试药物的耐受表现。