卵巢恶性肿瘤的DNA倍体分析及临床意义

　作者：李际春,李妍　　作者单位：宁夏医科大学附属医院妇科，银川

　　【摘要】 目的 分析卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤的DNA倍体，探讨其临床意义。方法 采用流式细胞术测定新鲜卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤组织标本的DNA倍体。结果 6例正常卵巢组织均为DNA二倍体，30例卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤中DNA异倍体23例(76.67%)，其中20例上皮性恶性卵巢肿瘤DNA异倍体15例(60%)，5例非上皮性卵巢癌DNA异倍体5例()，5例交界性卵巢肿瘤DNA异倍体3例(60%);与正常卵巢组比较差异有统计学意义(P<0.01);卵巢恶性肿瘤的DI值与病理类型及临床分期无关(均P>0.05)。结论 DNA倍体测定可用于卵巢恶性肿瘤的辅助诊断。

　　【关键词】 卵巢癌;DNA倍体;病理分级

　　Clinical Significance of DNA Ploidy in Epithelial Ovarian Cancer

　　(Department of Gynechology, the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ.,Yinchuan 750004)Abstract: ob[x]jective To explore the clinical significance of DNA ploidy in ovarian cancer.Methods 30 cases with epithelial ovarian cancer were subjected to DNA ploidy using flow cytometry(FCM) and the normal cervical tissues were control group.Results All controls showed diploid. 23(67.76%) ovarian cancer patients showed DNA aneuploid. 15(60%) cases showed DNA anueploidy in 20 epithelial ovarian cancer patients and all 5() cases with non-epithelial ovarian cancer showed DNA aneuploid. 3(60%) cases were aneuploid in 5 borderline ovarian tumor. Significant difference were found among them.Conclusion DNA ploidy examination of ovarian carcinoma can be an useful index for its diagnosis and differentiation.

　　Key words：ovarian carcinoma; DNA ploidy;pathology grade

　　卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，也是目前死亡率高的妇科恶性肿瘤。其早期缺乏特异性临床指征，肿瘤细胞组织学分类复杂，50%～70%患者就诊时已属晚期。人体正常细胞是恒定的DNA二倍体或四倍体，当受到致癌因素刺激时，DNA被损伤成为DNA异倍体细胞，本文分析卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤的DNA倍体，可为卵巢肿瘤的诊断和预后判断提供依据。

　　1 材料和方法

　　1.1 病例资料

　　取宁夏地区2005年7月-2005年12月期间手术并经病理学证实为卵巢恶性或交界性肿瘤的患者30例，患者年龄平均46.1岁，小21岁，大71岁。所有患者术前均未接受化疗及放疗，参照WHO制定的组织学分类标准，其中交界性卵巢肿瘤5例(交界性浆液性囊腺瘤3例，交界性黏液性囊腺瘤2例);上皮性卵巢癌20例(浆液性囊腺癌12例，黏液性囊腺癌8例)，非上皮性卵巢癌5例(其中颗粒细胞瘤3例，转移性卵巢癌2例);组织学分级采用3级分法。25例卵巢癌中，病理分化程度为中-高分化者6例，低分化者19例;根据国际妇产科联盟(FIGO)2000年分期标准，Ⅰ期7例，Ⅱ期7例，Ⅲ期11例，无Ⅳ期病例。另取同期因其它良性疾病同时行卵巢切除，并经病理学证实卵巢组织无异常病理的患者6例为正常对照组，其中，子宫肌瘤3例，宫颈原位癌2例，单侧卵巢单纯性囊肿1例，平均年龄42.3岁。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 单细胞悬液制备：取手术切除的新鲜肿瘤组织标本或-180℃冻存的肿瘤组织，进行HE染色，选择瘤细胞含量丰富的标本制备单细胞悬液[1]，进行DNA倍体测定。

　　1.2.2 DNA倍体测定： 采用美国Becton-Dickinson 公司生产的FACSCalibur 型流式细胞仪进行测定，每份标本测定104个细胞核，以正常卵巢组织作为外标。DNA指数(DI)为异倍体G0/G2峰均道指与二倍体G0/G1峰均道指之比，表示DNA相对含量;当DNA直方图上只有一个G0/G1(D1=1)时为DNA二倍体;若出现明显的2个或2个以上G0/G1(D1>1.1)，且其后有相应的S期及G2M期峰为异倍体[2]。

　　1.3 统计学方法 实验数据以均数±标准差(±s)表示，样本率的比较采用卡方检验，两样本均数的比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义;本实验数据采用SPSS 12.0分析软件进行分析。

　　2 结果

　　2.1 各组DNA异倍体率比较

　　6例正常卵巢组织均为DNA二倍体;30例卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤中DNA异倍体23例(76.67%)，其中20例上皮性恶性卵巢肿瘤DNA异倍体15例(60%)，5例非上皮性卵巢癌DNA异倍体5例()，5例交界性卵巢肿瘤DNA异倍体3例(60%)，与正常卵巢组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。

　　2.2 各组细胞DI值比较

　　2.3 不同病理类型卵巢癌DI值的比较

　　2.4 不同临床分期卵巢恶性肿瘤DI值比较

　　3 讨论

　　在生物细胞中，DNA含量是恒定的参量，并随细胞周期发生有规律的变化。肿瘤的发生有其复杂的病因学和病理学机制，但机体细胞内在的遗传物质变化是一切肿瘤发生的基础。人体正常的体细胞染色体均为二倍体，当细胞受到致癌物质刺激，DNA损伤，导致细胞基因突变与染色体畸形断裂，使细胞在增殖分裂的过程中出现DNA量的丢失、扩增或染色体移位等，导致细胞DNA质和量的异常，使原有的细胞生物学特征发生改变，成为DNA含量异常的肿瘤细胞[2]。在二倍体基础上多或少一条或几条染色体，或者染色体组成发生增减的细胞个体成为异倍体(Heteroploid)。

　　研究表明，人类大多数肿瘤细胞的染色体都有异常，表现为染色体结构和数目的异常。文献报道，卵巢癌组织中DNA异倍体的检出率在51%～82%之间[3]。本实验中30例卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤DNA异倍体率为76.67%，上皮性卵巢癌DNA异倍体率为60%，与文献报道相符，6例正常卵巢组织均为二倍体，无异倍体出现，恶性卵巢肿瘤组织中DI值明显高于正常卵巢组织，进一步证实恶性肿瘤标本的DNA含量发生改变，通过对细胞DNA含量的研究，有助于卵巢恶性肿瘤的定性诊断。

　　目前，对于卵巢恶性肿瘤DNA含量与病理类型的关系尚有争论[4]。本实验中，5例非上皮性卵巢癌均出现DNA异倍体，其DI值与上皮性卵巢癌比较差异无统计学意义，但由于本组样本例数较少，尚不能得出结论。

　　有关DNA含量及DNA倍体与卵巢恶性肿瘤临床分期的关系已有一些报道，一些研究认为，卵巢恶性肿瘤DNA含量及DNA异倍体率随着临床分期的增加而增高，但也有不同报道，本实验结果显示，DI值及DNA异倍体率与临床分期无关。

　　卵巢交界性肿瘤(borderline ovarian tumors,BOT)又称为具有低度恶性潜能的卵巢上皮性肿瘤(ovarian epithelial tumor of low malignant,LMP)，是一组介于良、恶性肿瘤之间的一类特殊类型的卵巢肿瘤，1973年世界卫生组织正式将其命名。Karen等[5]对交界性卵巢肿瘤进行DNA定量分析，初步研究结果表明DNA异倍体交界性卵巢肿瘤恶性程度高、易复发，生存期短，但也有人持不同意见。本研究5例交界性卵巢肿瘤，其中有3例出现DNA异倍体，异倍体率为60%，且其DI值低于卵巢恶性肿瘤组，两组比较差异有统计学意义。有研究认为，异倍体交界性肿瘤较二倍体肿瘤复发的危险性明显增高，此外，部分交界性肿瘤难以与卵巢癌鉴别。DNA异倍体的出现是癌变的重要标志，是否可以将DNA二倍体交界性卵巢肿瘤视为低度恶性潜能的肿瘤，而将DNA异倍体交界性卵巢肿瘤视为卵巢癌，有待于进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1]王延魁，孙元玲，钱和年，等.不同取材方法对上皮性卵巢癌流式细胞DNA含量的影响[J]. 中国实用妇科与产科杂志，2004，12(3)：153.

　　[2]石永红，孙慧宽. C-erbB-2 表达及DNA 含量与乳腺癌组织学类型的相关性研究[J]. 临床与实验病理学杂志，1998，4：448.

　　[3]Braly PS,Klevecz RR. Flow cytometric evaluation of ovarian cancer[J]. Cancer,2003，71(4): 1621-1630.

　　[4]Fribhmder ML. Clinical and biological significance of anerploidy in human tumors[J]. J Clin Pathol,2001,39:961.

　　[5]Kaern J,Trope C,Kjorstad KE,et al. Cellular DNA content as a new prognostic tool in patients with borderline tumors of ovary[J]. Gynecol Oncol,2005,38(3):452.