同源异形盒基因HOXB7在结肠癌中的表达及临床意义

　　我们前期利用激光捕获显微切割结合基因芯片技术，结合结肠癌生物学信息，筛选出一些结肠癌相关基因L1}，其中同源异形盒基因(HOXB7)表达明显上调。 　　

　　目前已有研究表明HOXB7在乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中过表达，并且与肿瘤细胞增殖、浸润、血管生成等重要指标密切相关z7，但其在结肠癌中的报道目前尚少。我们应用免疫组织化学方法观察HOXB7在结肠癌中的表达，并探讨其与结肠癌临床各病理因素的关系。 　　

　　材料与方法 　　

　　1一般资料:随机抽取2001至2003年上海市人民医院普外科手术标本库中73例结肠癌患者的癌组织以及相应正常结肠上皮。其中男47例，女26例;年龄35}89岁，中位年龄62岁;AJCC分期I期7例、II期34例、IQ期20例、IV期12例;术前均无放、化疗治疗史;所有病例均有完整的术后随访资料，其中位随访时间为59个月(10}83个月)。样本与资料收集均经上海市人民医院伦理委员会批准。 　　

　　2.实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)检测:从新鲜结肠癌组织以及相应正常组织中，应用AllPrepDNA/RNAMini试剂盒(德国Qiagen公司)抽提RNA;Fermentas逆转录试剂盒(加拿大Fermentas公司)进行cDNA合成;SYBRGreenMix(加拿大Fermentas公司)和Mastercyclereprealplex(德国Eppendoff公司)进行Real-timePCR检测。引物序列:HOXB7,_[游引物5'-GAGCCGAGTTCC'I'TCAACAT-3'、下游引物5'-TCTG-GTAGCGGGTGTAGGTC-3';[3-actin，上游引物5'-CT-GGGACGACATGGAGAAAA-3'、下游引物5'-AAG-GAAGGCTGGAAGAGTGC-3'}Real-timePCR反应条件:变性95℃10min,95℃lOs、退火温度55℃20s,72℃60s,50个循环，重复3次。 　　

　　3.免疫组织化学方法:所有标本均经10%福马林固定、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、常规石蜡包埋、切片厚3一5}a,m、脱蜡水化、抗原修复、0.3%过氧化氢阻断中华实验外科杂志2013年3月第30卷第3期Chin]ExpSurd,March2后，一抗孵育[HOXB7,1:250，美国Abcam公司;细胞核增殖抗原(Ki-67)，北京中杉金桥公司],4℃过夜。 　　

　　通用型二抗(北京中杉金桥公司)室温孵育，磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏术素复染，盐酸乙醇化(备用)，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片镜检。免疫组织化学染色等级评分}3·:0分(阴性)v分(弱阳性)v2分(中等阳性),3分(强阳性);染色范围等级评分:0分(0%),1分(1%一25%),2分(26%一50%),3分(51%一75%)、4分(76%一)。以染色强度和范围的评分总和，分为3组:0一1分，阴性;2}4分，弱阳性;5一7分，强阳性。其中阳性包括弱阳性和强阳性。 　　

　　4统计学方法:应用SPSS19.0统计软件分析，采用厂检验或者Fisher's精确检验。 　　

　　结果
　　1.HOXB7在结肠癌及正常组织中的表达:HOXB7蛋白在结肠癌组织和正常组织的阳性表达率分}JiJ为64.38070(47/73)和27.40%(20/73)，差异有统计学意义(P<0.01，表1);随机抽取的31例结肠癌患者中，HOXB7mRNA表达在21例(67.74%,21/31)结肠癌组织中表达较正常结肠茹膜上调(1.67一32.45倍)，与免疫组织化学结果一致。 　　

　　2.HOXB7蛋自表达与结肠癌临床病理参数的关系(表2):不同T分期的结肠癌组织中，T;和Tz分期中的HOXB7蛋白阳性率为40.06%,T:和T4分期中HOXB7蛋白阳性率为79.49%，两者差异有统计学意义(P<0.01);有无远处转移的结肠癌组织中，HOXB7蛋白表达的阳性率分别为91.67%和59.02%，两者差异有统计学意义(P<0.05)，有远处转移的结肠癌组织中HOXB7蛋白表达的阳性率高;不同A,TCC分期的结肠癌中，I和11期中的HOXB7蛋白Is},胜表达率为48.78%,III和W期中HOXB7蛋白阳性表达率为84.38%，两者差异有统计学意义(P<0.01)，随着分期的提高，HOXB7蛋白表达的阳性率也显著升高。HOXB7与Ki-67显著相关(P<0.01)，提示HOXB7有潜在促进结肠癌细胞增殖的作用。 　　

　　讨论
　　同源异形盒HOX家族是1类含有180个碱基对的高度保守DNA序列，可编码含60个氨基酸单位的DNA结构域，因此又被称为同源异形结构域冈。 　　

　　HOXB7属HOX家族B簇，定位于人类17q21.3染色体。近年来的研究结果显示，HOXB7基因编码的同源蛋白可作为转录调节因子，与细胞外基质相关信号、就附因子、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)等相互作用，激活或者抑制相应下游序列的靶基因，从而参与多种生物学活动，其作用机制复杂，尚未完全清楚。 　　

　　HOXB7是一种新的肿瘤相关基因，在人类乳腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中呈现过表达。本研究结果显示HOXB7蛋白表达在64.38%的结肠癌组织中表达阳性，而在绝大多数正常组织中表达阴性或者弱阳性;Real-timePCR结果也显示癌组织的HOXB7mRNA表达较癌旁组织表达显著上调，与之前研究结果一致。 　　

　　HOXB7基因过表达发生在转录与转录后水平，提示HOXB7可能是潜在的结肠癌分子诊断标志物。据报道，HOXB7诊断卵巢癌早期病变的敏感性高、特异性强，可能是新的血清学分子诊断标志物。 　　

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