分子诊断加速器！优质冻干RT-qPCR试剂原料

近几年，分子诊断快速兴起，促进了国内检验技术的发展。目前该技术已广泛应用于疾病检测、基因检测、病毒和病原菌检测、食品安全检测、遗传检测、动物检测，环境检测等各个领域。

       众所周知，传统分子诊断试剂存在运输和保存的难题。为确保试剂内有效成分（DNA酶、反转录酶等）的生物活性，一般需要在-20℃左右的冷链环境中储运。冷链运输的需要大量的冰袋或干冰，成本较高，而且环境温度的变化容易造成检测试剂反复冻融，会直接影响试剂的性能和保质期。

那么，是否有更方便安全的

存储和运输的方式呢？

经深入研究，发现将液体试剂

冻干成固体试剂将能很好解决上述问题

冻干试剂优势  

可常温运输和储存，更长的保质期

随来随测，不同品种同时上机，不同品类同时检测

提高效率，控制成本：常温、长期稳定；快速配送、便捷使用

冻干试剂研发风险  

绝大部分的溶液都可以开发成冻干剂型，但是存在一定的风险，原料及保护剂、冻干工艺、冻干设备性能深度跨越、相互干扰，这种领域交叉相互干扰会导致研发周期失控。由此可见，冻干绝不是简单的工艺，每一步都需要慎重选择。

缩短研发周期的关键因素  

原料厂家的酶和体系，冻干难度有差异，更加重要的是，能否提供足够的技术支持

在开发过程需判断：体系干扰、辅料及保护剂影响、工艺和环境干扰

翌圣生物提供优质可冻干原料

——让核酸检测更加高效、便捷、经济

冻干原料的筛选不是单纯去掉不可冻干物质，原料选择环节需要针对每一个组份进行筛选或调试。切忌盲目寻找可冻干原料；不同原料，冻干工艺及冻干体系都需要相应调整。

翌圣生物在此技术上不断加大投入，力求推出优质可冻干原料，帮助客户从原料上解决冻干难题。

图. qPCR反应体系的组成示意图

可冻干原料酶的筛选  

 可冻干酶选择误区

液体体系中筛选出性能优的无甘油酶，用于冻干一定没有问题

把已有体系中不可冻干的成分去掉就是可冻干体系了

冻干过程能够将不可冻干的体系变为可冻干体系

 可冻干酶筛选需注意

液体体系中筛选出的性能优的酶，不一定冻干后性能还是优，需要多几款候选酶

酶的氨基酸序列和修饰差异，会影响酶的空间结构稳定性和冻干耐受性

酶的储液直接影响酶的稳定性，可冻干酶需要优化储液以保证酶储存稳定

甘油酶去除甘油之后，稳定性、酶活都可能发生极大变化，对应体系需要重调

可冻干反应体系的调整    

Buffer中不可含有可挥发和易氧化成分

需对盐离子浓度进行调试-过高可能造成冻干形态差；过低可能影响扩增性能

冻干可能造成pH值变化，影响扩增性能

高乘数的试剂利于冻干

冻干原料体系中的保护剂含量需明确

冻干对酶有一定损伤，补酶量需调试

Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with   MgCl2)  （CAT#13775）

一种无甘油、即用型的分子诊断试剂，含有耐热逆转录酶、热启动Taq DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTPs、氯化镁以及冻干保护剂，同时添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子。该产品是开发常温稳定、可室温运输储存、多重RT-qPCR的理想选择。

来源：翌圣生物

  三大优势值得信赖  

冻干后依然保持酶活性完整，性能和液体试剂一样

冻干后室温下保存依然稳定，不需要冷链运输和低温储存

降低成本和操作复杂性：提供参考冻干工艺，助力冻干流程；不需要额外添加冻干保护剂，可直接用于冻干

部分数据展示

图. 13775液体性能：对假病毒模板分别使用高灵敏度版RT-qPCR试剂13110（红色）和13775（蓝色）试剂进行多重RT-qPCR扩增，左为FAM通道，右为VIC通道。

图. 13775液体试剂热稳定性37℃ 5 Days：将13775液体试剂置于37℃（绿色）和-20℃（蓝色）条件下5天，进行多重RT-qPCR扩增测试，左为FAM通道，右为VIC通道。

图. 13775产品冻干后性能：对假病毒模板分别使用液体试剂（红色）和13775冻干粉（紫红色）进行多重RT-qPCR扩增，左为FAM通道，右为VIC通道。结果表明，冻干后13775试剂活性完好，且依然具有高效多重反应能力。

图. 13775冻干粉热稳定性—37℃ 21 Days：将13775冻干粉置于37℃（绿色）和-20℃（蓝色）条件下21天，进行多重RT-qPCR扩增测试，左为FAM通道，右为VIC通道。结果表明，冻干粉在37℃放置21天后，仍有良好的扩增效果。

声明：本平台标明来源的文章，仅用于分享，不代表平台立场，如涉及版权等问题，请尽快联系我们，会及时更正，谢谢！