益母草酸醇提取液不同精制方法的比较研究

【摘要】  目的通过对不同精制方法的比较，筛选出益母草酸醇提取液的佳精制方法。方法采用水沉、大孔树脂吸附和离子树脂交换等3种方法对益母草酸醇提取液进行精制，以所得物中益母草总生物碱的含量为指标，对3种方法进行比较研究。结果3种方法所得物中总生物碱含量以离子树脂交换法高，大孔树脂吸附法次之，水沉法低。结论 可采用离子树脂交换法对益母草酸醇提取液进行纯化。

【关键词】  益母草 益母草总生物碱 水沉法 大孔树脂吸附法 离子树脂交换法

　　Abstract：ob[x]jectiveTo sieve the best purification method of Herba Leonuri's acidic alcohol- extract by comparing the purification efficiency of different methods.MethodsHerba Leonuri's acidic alcohol-extract was purified by water precipitation, macropurous resin-absorption and cation-exchange resin, total alkaloid in rarefied material was selected as markers. ResultsTotal alkaloid content was varied from one method to another; the total alkaloid content that obtained by cationexchange resin was higher than the others. ConclusionCationexchange resin is the best purification method of Herba Leonuri's acidic alcohol-extract.

　　Key words：Leonurus japonicus Houtt；  Total alkaloid of Herba Leonuri;  Water precipitation；  Macropurous resin-absorption；  Cation-exchange resin

    益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的干燥全草，是中医妇科常用药。据文献报道［1］，益母草含有生物碱类、黄酮类、二萜类、挥发油类及微量元素等多种化学成分，其中生物碱为其主要有效成分，如水苏碱、益母草碱、益母草定等。现有的益母草制剂多以水煮醇沉，浓缩干燥为制剂工艺［2］，该方法对有效成分生物碱的提取率较低，同时由于醇沉除杂效率低，得膏率较高，不利于一些新型制剂的开发。我们在前期提取工艺研究中发现采用酸性乙醇为溶剂可提高益母草生物碱的提取率，本实验对益母草酸醇提取液中总生物碱的精制方法进行研究，为进一步的制剂学研究打下基础。

　　1  仪器与试药

    益母草：购于广州中医药大学大药房；盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号110712－200306）；乙醇、盐酸、雷氏盐均为分析纯；AB-8大孔吸附树脂（南开大学化工厂），001×7强酸性阳离子交换树脂（广州化学试剂二厂）。

　　2  方法与结果

　　2.1  益母草总生物碱的提取益母草药材加pH至1～2的95%乙醇回流提取3次，分别为12，10，8倍量各1.0 h。合并提取液，浓缩至每毫升含1 g生药，备用。

　　2.2  益母草总生物碱的精制为全面反映各精制方法对结果的影响，采用了每种精制方法各选2～3个不同的精制水平，每一水平做3份平行实验的实验方法制备样品［3］。具体过程如下。

　　2.2.1  水沉法取上述酸醇提取液450 ml，均分为9份，50 ml/份，分别加入1，2，3倍量的水，各倍数平行做3份，冷藏过夜，离心，取上清液浓缩且真空干燥成干浸膏，备用。

　　2.2.2  大孔树脂法取上述酸醇提取液450 ml，回收溶剂，浸膏用水转溶，离心，取上清液，加氨水碱化至pH 9～10，离心，分离上清液，均分为9份，分别上预处理过的大孔树脂柱（生药量∶树脂量＝1∶1）。吸附完全后先用蒸馏水洗脱至无糖类反应，再换用乙醇洗脱，乙醇浓度分别为60%，70%，80％，每一浓度平行各做3份。收集乙醇洗脱液浓缩且真空干燥成干浸膏，备用。

　　2.2.3  离子交换树脂法取上述酸醇提取液300 ml，回收溶剂，浸膏用水转溶，离心，分离上清液，加水定容到300 ml，均分为6份，各加入2倍量的强酸性阳离子交换树脂，浸泡过夜后上柱，先用蒸馏水洗至中性，再分别用1 mol/L NaOH，氨水－乙醇（20∶80）两种洗脱剂洗脱，每种洗脱剂平行各做3份，收集洗脱液浓缩且真空干燥成干浸膏，备用。

　　2.3  含量测定与结果分析

　　2.3.1  总生物碱的含量测定照分光光度法［2］。

    对照品溶液制备：精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品25 mg，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升中含盐酸水苏碱1 mg)。

    药材溶液的制备：取药材粉末（过3号筛）约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 ml，置蒸发皿中，于水浴上蒸干，精密加入0.1 mol/L盐酸溶液10 ml使溶解，加活性炭0.5 g，置水浴中加热30 s，搅拌，滤过，滤液置 25 ml量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液分次洗涤蒸发皿和滤器，洗液并人同一量瓶中，备用。
    供试品溶液的制备：取上述纯化物干膏适量（约相当于益母草生药3 g），按药材溶液的制备方法制备。

    测定法：精密量取对照品溶液10 ml，置25 ml量瓶中，另取0.1 mol/L盐酸溶液20 ml，置25 ml量瓶中。在对照品溶液，0.1 mol/L盐酸溶液及上述药材、供试品溶液的量瓶中，各精密加入新制的2%硫氰酸铬铵溶液3 ml，摇匀，加0.1 mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，置冰浴中放置1 h，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以0.1 mol/L盐酸溶液为空白，照分光光度法(附录V B)，在520 nm的波长处分别测定吸收度，用空白试剂的吸收度分别减去对照品与供试品的吸收度，计算，即得。

　　2.3.2  结果与分析

　　益母草药材中总生物碱含量为：0.69%。不同精制方法所得干膏的出膏率和总生物碱含量见表1，同时根据益母草药材中总生物碱含量计算不同方法的生物碱转移率。结果见表1。表1   益母草不同精制方法的比较(略)

    为比较各精制方法的精制效果，对各方法所得物中生物碱含量数据进行了方差分析。结果见表2。表2  方差分析表（略）

    分析结果表明，各精制方法之间有显著性差异。为进一步表明各方法两两间有无差异，继续对3种方法进行了多重比较（S法）。分析结果见表3。表3   两两间多重比较（了）

    综合以上分析，上述3种方法对益母草酸醇提取液的精制效果，以所得物中总生物碱含量为指标，离子交换树脂法精制后总生物碱含量高，与其它各法均有显著差异。因此可采用离子交换法对益母草酸醇提取液进行纯化。

　　3  讨论

    由本次实验结果可知，离子交换树脂法对益母草酸醇提取液的纯化效果较好，能除去大部分的杂质，精制后所得物中总生物碱含量是常规水沉法的7倍左右。这可能是由于益母草经酸性乙醇提取后其中的生物碱类成分以生物碱盐的正离子状态存在，与树脂之间的交换属优惠平衡，从而与非离子型的杂质分离。但结合直观分析，益母草酸醇提取液经离子交换树脂法精制后总生物碱转移率仅为40%～50%，因此采用离子交换法对益母草酸醇提取液进行纯化尚需对离子交换的条件进行优化。为提高总生物碱的转移率可对离子树脂的类型、洗脱剂的种类、浓度等因素进行考察［4］。

    大孔树脂法精制出膏率低，有利于进行一些载药量低的新型制剂的开发。本试验采用弱极性的AB-8型大孔树脂精制益母草酸醇提取液，结果总生物碱转移率低。这主要是由于大孔树脂的极性差异较大，对具体成分只有选用对应极性合适的大孔树脂，选择适宜的洗脱溶媒和洗脱顺序，才能获得良好的精制效果［5］。益母草类生物碱多为极性较大的水溶性生物碱，在今后的工作中可考虑用极性更大的大孔树脂来对其进行分离。

【参考文献】

　　［1］张 娴，彭国平.益母草属化学成分研究进展［J］.天然产物研究与开发，2003，15（2）：162.

　　［2］国家药典委员会.中国药典（Ⅰ部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：576,577，附录VB.

　　［3］张保献，逵应坤，冯青然，等. 不同精制方法对苦参水提液中苦参生物碱含量的影响［J］.中国中药杂志，2000，25（10）：607.

　　［4］王洪新，王 健.苦豆子种子生物碱离子交换分离的因素研究［J］.中草药，2002，33（12）：1080.

　　［5］李作平，霍长虹.大孔吸附树脂在水溶性天然药物化学成分提取分离中的应用［J］.河北医科大学学报，2002，23(2)：121.

作者：严优芍 李卫民