SLE患者外周血淋巴细胞的CD40-CD40L表达及意义

作者：王世俊 刘东海

作者单位：315400 浙江省余姚市人民医院检验科　315000 浙江省宁波二院中心实验室

 

【关键词】  系统性红斑狼疮

　　系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus SLE）是自身免疫介导的、以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病。SLE的发病机制复杂，至今仍未完全阐明，目前普遍认为免疫调节异常在其发病中起到了主导作用，其中包括一对共刺激信号CD40-CD40L的调节异常，淋巴细胞的功能失调、异常活化等。本研究采用流式细胞术测定SLE患者CD40-CD40L、异常活化淋巴细胞的表达，以及与疾病活动度的关系，为揭示SLE的发病机制提供实验依据。
　　
　　1  资料与方法

　　1.1  一般资料  2004年3月至2007年3月，本院救治SLE患者32例，均符合美国风湿病学会（ARA）1982年修订SLE分类标准［１］。根据欧洲狼疮活动性指标积分评分［２］，分为活动期和缓解期，其中活动期SLE患者15例，男3例，女12例；年龄12～50岁。缓解期SLE患者17例，男3例，女14例；年龄11～51岁。正常对照组为18例健康体检者，无自身免疫病史，男5例，女13例；年龄17～37岁。

　　1.2  主要试剂与仪器  鼠抗人单克隆抗体CD40-PE、CD40L-PE 相同荧光标记的同种型免疫型蛋白阴性对照均购于法国（IMMUNERECH）公司，Q-PREP溶血仪、EPICS-XL流式细胞仪为美国BECKMAN COULTER 公司产品。

　　1.3  检测方法  (1)采用微量全血标记法，即取EDTA-K2抗凝血50μl分别加入15mm×75mm Falcon管中；(2)分别加入10μl荧光标记鼠抗人单克隆抗体CD40-PE、CD40L-PE 阴性对照加入相同荧光标记的同种型免疫型蛋白，室温避光孵育15min；(3)用Q-PRCP仪溶血、固定 ；(4)流式细胞仪上机检测：样本上机前，先用荧光微球调整光路，根据前向角（FSC）与侧向角（SSC）设门，用阴性对照设定阈值，接着样本上机，分别设门于淋巴细胞和单核细胞在门内收集10000个以上的细胞，记录CD40、CD40L的阳性百分率。

　　1.4  统计学处理  所有的资料均用(x±s)表示，组间比较采用t检验。

　　2  结果
   
　　活动期SLE患者淋巴细胞表达的CD40、CD40L均明显高于正常对照组（P<0.05)，缓解期SLE患者淋巴细胞表达的CD40L亦明显高于正常对照组（P<0.05)，而缓解期SLE患者淋巴细胞表达的CD40与正常对照组比较，差异无显著性（P>0.05），见表１。32例SLE患者（活动期和缓解期）淋巴细胞CD40、CD40L的表达量与淋巴细胞活化的相关性分析：淋巴细胞CD40表达量与CD3-HLADR呈正相关（R=0.551，P<0.05)，淋巴细胞CD40L表达量与CD3-HLADR亦呈正相关（R=0.586，P<0.05)。

　　表1  SLE患者CD40-CD40L检测结果（略）

　　正常对照组与活动期比较*P<0.05，与缓解期比较#P<0.05

　　3  讨论
    　　
　　系统性红斑狼疮（SLE）是一种以多器官、多系统损害，体内有多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病。SLE许多临床症状被认为是B细胞功能亢进所引起，即B细胞的高度活化，产生针对自身组织（包括细胞核及各种核的成分、细胞膜、细胞浆各种组织成分）的自身抗体，它们只能与自身组织抗原结合，形成自身免疫复合物，从而引起全身一系列的反应。CD40和CD40L是一对介导B细胞和T细胞之间信号传导的共刺激分子。既往的研究表明活化的T细胞的CD40L与B细胞的CD40分子结合，通过诱导细胞活化和细胞因子的产生，直接参与调节体液免疫，间接调节细胞免疫；可以促进B细胞生长、分化、克隆转换、IG分泌及阻断B细胞凋亡，促进自身抗体的产生［3～5］。本实验结果显示，活动期SLE患者淋巴细胞表达的CD40与CD40L明显增加，高于正常对照组；活动期与缓解期比较，虽差异无显著性，但前者高于后者。至于三组之间差别，活动期SLE患者高，正常对照组低，这说明了PBMC的CD40-CD40L异常表达与SLE发病密切相关，同时也表明了与疾病的发展程度有关。