直接法试剂盒测定高密度脂蛋白胆固醇的性能比较

【关键词】 基质效应

［摘 要］ 目的：探讨直接法试剂盒测定高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的性能比较和基质效应。方法：选择一种进口试剂盒和两种国产试剂盒，比较他们的批内和批间精密度、线性范围、准确度和抗干扰能力，再以进口试剂的测定结果为参照系统，评估两种国产试剂盒及其与进口校准品组成的检测系统的测定结果和基质效应。结果：三种试剂盒及其与校准品组成的Aa、Bb、Cc、Ba、Ca五个检测系统，批内和批间精密度均小于5%，相对偏倚小于5%，线性可达到4.0 mmol/L，表明进口试剂盒和两种国产试剂盒检测HDLC的性能均完全符合试验要求。Aa系统与Bb、Cc、Ba系统相比，检测结果差异无显著性（P>0.05）。与Ca系统比较差异有较显著性（P<0.05）。Ca系统存在校准偏差和基质效应。结论：两种国产试剂盒的各项性能指标均接近进口试剂，但是，用不同厂家的校准品来校准试剂盒，有时会使检测结果有严重的校准偏差和基质效应。

　　［关键词］ 高密度脂蛋白胆固醇；匀相法；基质效应

作为冠心病(CAD)的负危险因素和异常脂质血症制定治疗方案的要求，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的测定在临床实验室中已常规化［1］。过去，临床普通实验室HDLC的测定方法均采用繁杂的技术，标本需要经沉淀分离后测定胆固醇含量。1995年中华医学检验学会PTAMg2+沉淀法作为HDLC测定常规方法［2］。由于工作量的增加、沉淀法不良的精密度及样品中高三酰甘油的干扰。近年来国内外相继研制开发出一些新型HDLC的直接测定法，即匀相法测定试剂，因其简便、快速、易于自动化，而且随着自动化分析仪的日益普及，自动分析的直接法检测HDLC已逐步取代了沉淀法。我们选择一种进口和两种国产试剂盒进行比较分析，现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1 试剂和校准品 采用3家公司生产的HDLC试剂盒，包括Randox公司和两家国内公司的产品。3种试剂盒分别用A~C表示，各试剂盒提供的校准品相应用a~c表示，从而组成相应的检测系统。

　　1.2 质控血清 采用多家进口冻干质控血清，包括DADE MoniTrol level
1、level 2（批号分别为LMU07091F、LMU07092F）；Randox Precission Human MultiSerum（批号：311UN/3）；科美质控品（批号：0505）和日本一化Seronorm Human（批号：OK2431）。

　　1.3 血清样品 均取自我院的职工体检标本。

　　1.4 仪器 日立7170A型全自动生化分析仪。

　　1.5 统计学方法 采用SPSS软件进行回归分析，和配对t检验。

　　2 方法

　　2.1 精密度试验 各品牌的试剂盒均按其说明书设定分析参数，并用各自所带的校准品进行校准。每一检测体系均检测高、中、低三个不同浓度的新鲜混合血清样品HDLC含量20次，计算其批内精密度。再每天测定上述三个样品，连续20 d，计算其批间精密度。

　　2.2 线性试验 用去离子水5 ml溶解日本一化Seronorm Human（批号：FE1093）的高值质控血清，HDLC的标示值为5.60 mmol/L。然后按不同的比例稀释并在Aa、B、b、Cc三个检测系统中先按从高到低的顺序测定，接着再按从低到高的顺序测定HDLC含量，结果取均值，并与预期值比较。

　2.3 比较试验及基质效应的评估 三种试剂盒与其校准品分别组成Aa、Bb、Cc、Ba、Ca五个检测系统，测定40份新鲜正常人血清，然后比较五个检测系统检测的HDLC结果。再以Aa（Randox产品）系统为参照系统，检测20份新鲜血清和5份质控血清（浓度覆盖0 mmol/L~2.85 mmol/L）的HDLC含量，每份样品测定三次，结果取其均值，评估Bb、Cc、Ba、Ca四个检测系统测定的校准偏差和基质效应。观察使用不同的校准品对试剂盒测定结果的影响。

　2.4 干扰试验 分别用不同浓度的血红蛋白、胆红素、维生素C、谷胱甘肽来观察三种试剂盒的抗干扰能力。

　3 结果

　　3.1 精密度试验结果 对不同浓度的HDLC新鲜血清样品，三种试剂盒的批内精密度均低于其说明书标示值的上限。批间精密度介于2.11%~3.49%之间。见表1。表1： 三种试剂盒测定HDL　C的精密度检测系统批内精密度(略)

　　3.2 线性试验结果 三种试剂盒均称其线性范围为0 mmol/L~2.8 mmol/L，经检测发现三种试剂盒的线性范围均可达4.0 mmol/L。完全满足试验要求。见表2，图1。表2：三种检测系统检测HDL　C的线性检测系统回归方程R2值范围（略）图1 三种检测系统检测HDLC的线性（略）

　　3.3 准确性试验 用Random的定值血清两份，分别用Aa、Bb、Cc三个检测系统进行测定HDLC含量，平行测定6次，取其均值，再与标示值比较。见表3。表3：三个检测系统的HDLC检测准确性比较标示值(略)

　　3.4 对比试验和基质效应的评估 比较Aa、Bb、Cc、Ba、Ca五个检测系统对新鲜血清和不同厂家的质控品HDLC的检测结果，除Ca检测系统外，比较Bb、Cc、Ba检测系统与Aa检测系统HDLC的检测结果差异无显著性。与Aa检测系统比较，Ca检测系统检测新鲜血清和质控血清的偏倚均大于20%，而且与20份新鲜血清的检测结果的均值比较，质控血清的偏倚有显著的增大，Ca检测系统存在校准偏差和基质效应。见表4、表5。表4：五个检测系统对新鲜血清HDLC的检测结果的比较（略）表5：五个检测系统对质控品HDLC的检测结果的比较质控品（略）

　　3.5 抗干扰能力 取新鲜无溶血、无黄疸血清分别加入不同量的血红蛋白，使每管血红蛋白的浓度分别为2 g/L、4 g/L、6 g/L、8 g/L、10 g/L，检测结果显示当血红蛋白浓度小于4 g/L时，对HDLC的测定没有干扰。加入不同浓度的胆红素，使每管的胆红素浓度分别为50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L，试验结果表明，当胆红素浓度大于150 μmol/L时对测定结果有负干扰。加入不同浓度的维生素C，使每管浓度分别为0.1 g/L、0.2 g/L、0.3 g/L、0.4 g/L、0.5 g/L、0.8 g/L，结果显示当维生素C低于0.4 g/L对结果无影响。同样加入不同浓度的谷胱甘肽，使每管的谷胱甘肽浓度分别为0.15 g/L、0.3 g/L、0.6 g/L、0.9 g/L、1.5 g/L、2.25 g/L、3.0 g/L、6.0 g/L，结果表明，当谷胱甘肽浓度大于2.25 g/L时，对HDLC的测定有负干扰。

　　3.6 储存和冷冻的影响 一份混合血清经Randox试剂平行测定10次后，HDLC含量为1.51 mmol/L，于-70 ℃保存3个月后，复溶后再用Aa、Bb、Cc三个检测系统平行测定HDLC含量10次，HDLC含量分别为：1.516 mmol/L、1.504 mmol/L、1.508 mmol/L。表明冷冻储存和复溶对HDLC测定无明显影响。

　　4 讨论

　　HDLC测定的准确性取决于测定方法的合理选用及测定的标准化。国内各地的参考值高低相差悬殊，主要原因是没有重视方法的合理选用及标准化问题。由于目前尚无HDLC测定的决定性方法及1级参考材料，使HDLC标准化工作难度大。选择性抑制法是应用两种不同的表面活性剂及多阴离子，依据脂蛋白的酶反应选择性原理，直接测定血清HDLC。为了保证HDLC测定结果的稳定的准确性，匀相试剂的制造商应该在每隔几年或当系统被修改后应继续参加CRMLN认证。实验室应该按试剂供应商提供的不同仪器参数进行设定，严格按试剂供应商提供的校准品进行校准。
　　
　　对临床实验室来说，准确地测定病人的标本是首要目的，因此，厂家在仪器、试剂的研制和测定方法的选择过程中，是以病人的新鲜标本作为佳检测对象，实验室在使用测定系统时不用考虑新鲜血清标本的基质效应，即测定系统对新鲜标本的基质效应应该接近于零［3］。从本研究中我们发现各试剂盒与其配套的校准品组成的检测系统，精密度均很好，也无基质效应。但用别的厂家的校准品校准另一家试剂盒时，如Ca系统，即可引起显著基质效应和校准偏差。因此，在日常工作中，一定要尽量避免使用一个厂家生产的校准品去校准另一个厂家生产的试剂盒。HDLC的颗粒相当不稳定，冷冻复溶过程对一些沉淀法有影响［4，5］，但长期储存和冷冻的特殊影响在匀相法还没有详细的报道，NCEP在标本采集的24 h~48 h内必须分离HDLC，长期储存的标本应冷冻，-50 ℃以下可以保存1 a~2 a。复溶的标本在测定取样前必须仔细的轻轻混匀。我们在-70 ℃条件下，保存血清3个月，测定HDLC的结果无显著变化。

　　实验结果表明，由三种试剂盒与其校准品组成的Aa、Bb、Cc检测系统，各系统的检测结果较为接近，差异无显著性，所得结果有可比性。且其精密度、线性范围、抗血红蛋白、胆红素、维生素C、谷胱甘肽的干扰能力均符合要求，适用于临床实验室常规测定HDLC。

　　参考文献：

　　［1］ 张葵.HDLC测定方法的回顾及实验室选择评价［J］.临床检验杂志，2002，20：373376.

　　［2］ 中华医学检验学会血脂测定方法 四.血清高密度脂蛋白胆固醇测定法（草案）［J］.中华医学检验杂志，1995，18：311312.

　　［3］ 王毓三.基质效应［J］.临床检验杂志，2002，20：112113.

　　［4］ Bachorik P S，Walker R E，Kwiterovich P O Jr.Determination of highdensity lipoproteincholeaterol in human plasma stored at70 degress C ［J］.J Lipid Res,1982,23:12361242.

　　［5］ Waymack P P，Ethridge S F，Miller W G，et al.Use of frozen reference sera for accuracy transfer to three homogeneous LDL choleaterol methods［J］.Clin chem,2000,46:103108.