新鲜血比对方法在血液分析仪中的应用

【摘要】 　　目的：应用正常人新鲜全血对多台血液分析仪进行比对，使血液分析仪各参数之间具有可比性。方法：选择性能良好、规范化操作的血液分析仪作为参比仪，用该仪器定值的健康人新鲜血校准比对3台血液分析仪（比对仪）。结果： 3台比对仪白细胞（WBC）比对前偏倚分别为（7.32、4.49、8.70）%，血小板（PLT）比对前偏倚分别为（4.75、17.1、11.8）%； WBC比对后偏倚分别为（0.3、2.5、1.7）%， PLT比对后偏倚分别为（1.7、0.7、1.1）%；WBC、PLT差异有统计学意义（P＜0.05），RBC、HGB、HCT、MCV差异无统计学意义（P＞0.05）,但相关性存在差异，通过比对试验校准仪器后结果一致性良好。结论： 该方法能方便、经济地对血液分析进行有效的质量控制。

【关键词】 血液分析仪；新鲜全血；比对法

　　［ABSTRACT］ ob[x]jective: To investigate application of the comparison of fresh whole blood in hematology analyzer. Methods: The hematology analyzer with good performance, and standardized operation was selected as a reference instrument, and the results tested by 3 hematology analyzers with the fresh blood of healthy individuals was calibrated ba[x]sed on the former. Results: For the 3 hematology analyzers, the bias before the comparison were: WBC(-7.32, -4.49, -8.70)%; RBC(-1.34, -3.58, -1.34)% ; HGB (-0.06,1.81,1.69)%; HCT(3.05,1.52, -0.8)%; MCV(0.03,0.67,4.7)%; PLT(-4.75, -17.1, -11.8)%, respectively; the bias after comparison were: WBC(-0.3,2.5, -1.7)%; RBC(0.9, -1.6, -1.3)%; HGB(1.4 , 0, -0.03)%; HCT(1.7, -0.2,0.3)%; MCV (0.9, -0.6, -0.3)%; PLT(-1.7, -0.7, -1.1)%. There was significant difference in WBC and PLT(P <0.05), and no significant difference in RBC, HGB, HCT, MCV((P> 0.05). But there was differenct relevance. The results by calibrating the equipment were consistent with the comparison test. Conclusions: The method is effective and economical in quality control for the blood analysis.

　　［KEY WORDS］ Hematology analyzer; Fresh whole blood; Comparison

　　血液分析仪是临床实验室进行血细胞分析的常用仪器，其检测结果的准确性直接影响患者疾病的诊断、治疗和观察，只有将血液分析仪检测结果直接或简洁溯源至参考方法［12］，并进行良好的室内质量控制和室间质量评价，才能更有效地保证结果的准确性和可比性。目前大、中型医院使用进口血液分析仪普遍，同一实验室或实验室一个部门拥有多台血液分析仪也较常见。由于进口血液分析仪配套的校准物和质控物进口周期长、价格昂贵、效期短［3］，此外一些血液分析仪无适合的校准物和质控物，因此，实验室内每台血液分析仪都使用配套校准物和质控物有实际困难。本研究采用比对方法，以性能良好、规范操作的血液分析仪为参比仪，用该仪器定值的健康人新鲜血校准比对血液分析仪（比对仪），使比对仪全血细胞计数结果简洁溯源至参考方法［4］；健康人新鲜血标本作为比对物，对比对仪进行校准比对，保证比对仪检测结果的准确性和可比性。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 仪器与试剂

　　德国西门子医疗诊断设备有限公司生产的全自动血液分析仪ADVIA 2120 1台，中国深圳迈瑞公司生产的全自动血液分析仪BC5500 3台（分别标注为A、B、C），共4台全自动血液分析仪及其配套试剂。

　　1.1.2 校准物

　　ADVIA 2120全自动血液分析仪的配套校准物（批号：SP91013）由德国西门子医疗诊断设备有限公司提供。

　　1.1.3　质控物

　　全血质控物（批号：TP91021、TP92021、TP93021）由德国西门子医疗诊断设备有限公司提供。

　　1.1.4 抗凝新鲜血

　　健康人新鲜血由健康志愿者提供，用真空采血器采集正常人新鲜全血10mL,用乙二胺四乙酸二钾（EDTAK2) 抗凝剂混匀（抗凝浓度1.8～2.2mg/mL),同时将血液分成3份，第1份用于定值测定，第2份用于比对测定，第3份用于比对后验证，2h内完成4台血液分析仪的比对试验。

　　1.2 方法

　　1.2.1 参比仪质量保证

　　以性能良好、规范化操作的血液分析仪作为参比仪系统。选择ADVIA 2120作为3台BC5500比对的参比仪，该仪器使用配套试剂及质控品；该仪器由西门子公司技术人员于2009年3月9日用配套校准品校准；每个工作日用配套低、中、高3个水平的全血质控物进行室内质量控制，结果良好。在ADVIA2120仪器上连续测定第1份新鲜全血11次，计算第2～11次各参数检测结果，作为新鲜全血的定值。

　　1.2.2 比对仪器的分析前准备

　　将3台BC5500血液分析仪管道清洗，去除管道中的残留血液、吸附的蛋白和纤维等，然后测定试剂的空白，本底必须符合要求。另取1份正常人新鲜血在各台仪器上进行精密度测试，计算血红蛋白（HGB）、白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）和血小板（PLT）的变异系数（CV），确认仪器的精密度在要求范围内方可进行比对试验。

　1.2.3 血液分析仪的比对仪

　　取第2份新鲜全血颠倒混匀，在BC5500三台待比对仪器上分别连续测定11次，计算第2～11次各参数均值与定值之间的偏倚，采用以下标准判断仪器是否需要比对：WBC≤3%、RBC≤1.5%、Hb≤1.5%、HCT≤1.5%、MCV≤1.5%、PLT≤3%，超出上述范围，计算新的比对系数并重新设置输入仪器内。偏倚=（均值  定值）/定值×，新比对系数=旧比对系数×定值/检测值。

　　1.2.4 校准比对后结果的验证

　　取第3份新鲜全血，在已比对仪器上重复测定11次，计算第2～11次均值与定值之间的偏倚。

　　1.3 统计学处理

　　数据以（±s）表示，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　各仪器重复性测定结果见表1。表1 各仪器重复性测定结果的变异系数（略）

　　新鲜全血定值的确定结果见表2。表2 新鲜全血各参数定值的测定结果(略)

　　比对前各台仪器新鲜全血测定结果见表3。表3 校准比对前各仪器新鲜全血测定结果与偏倚(略)

　　比对后各仪器验证：比对后的结果偏倚远小于美国CLIA，88能力验证分析质量要求［5］(WBC、RBC、HGB、HCT、PLT、MCV可接受限为靶值±15%、±6%、±7%、±6%、±25%、±6%)，结果见表4。表4 校准比对后各仪器新鲜全血测定结果与偏倚(略)

　　各台血液分析仪比对前、后的系数结果见表5。表5 3台血液分析仪比对前、后的系数（略）

　　BC5500A、BC5500C的，校准前比对偏倚为-7.32%、-8.7%，校准后降到2.5%、-1.7%；BC5500B、BC5500C的PLT，校准前比对偏倚为-11.7%、-11.8%，校准后降到-0.7%、-1.1%；差异均有统计学意义均（P<0.05）。

　　3 讨论

　　血液分析仪操作简便，结果准确可靠，已经成为各级医院临床检验专业的主要检测手段。随着医院工作量的逐渐增大，很多医院已拥有多台不同型号的血液分析仪，但由于各厂家生产的血液分析仪采用的原理和试剂性质不同，造成结果潜在差异［6］。因此，要保证血液分析仪检测结果之间的一致性，除了要有完善的质量控制体系，还必须建立合理的比对程序，即用可溯源的血液检测系统定期对本实验室用于常规检测的血液分析仪进行比对。由于仪器配套校准物质成本高、有效期短等多种原因，难以得到普遍推广［7］。用“定值”的正常人新鲜全血进行仪器比对为提供了一条可行的途径。用ADVIA 2120全自动血液分析仪作为规范操作检测系统对健康人新鲜全血进行定值及仪器比对，ADVIA 2120全自动血液分析仪每年由西门子公司技术人员用配套校准品校准。并且规范的开展室内质评管理，同时参加室间质评成绩优良，结果准确可靠，所以可作为室内质控参比仪器。在血液分析仪的比对过程中，3台血液分析仪的部分检测项目经过1次比对，与定值的偏倚降低到允许范围内，但部分检测项目需经过2次比对后偏倚才降到规定允许范围内，如BC5500 A、BC5500 C的WBC，校准前比对偏倚为-7.32％、-8.7％，校准后比对偏倚降到2.5％、-1.7％;又如BC5500 B、BC5500 C的PLT，校准前比对偏倚为-17.1％、-11.8％，校准后比对偏倚降到-0.7％、-1.1％；差异均有统计学意义（均P＜0.05），RBC、HGB、HCT、MCV校准前、后差异无统计学意义（均P ＞0.05）,但相关性存在差异，通过比对试验仪器校准仪器后结果一致性良好。校准比对前，一般先对仪器精密度进行测试，各项参数的CV均要求在仪器规定的范围内（见表1）。同时新鲜全血标本应及时检测，因为新鲜全血稳定性差，一般要求在4h内完成定值及仪器的比对［8］。

　　本方法取材方便、操作简单、经济有效，对目前同一实验室拥有多台仪器血液分析仪进行质量控制，加强同一实验室内多台血液分析仪间全血细胞计数准确性和可比性有实际应用价值。

【参考文献】
　　1 International Council for Standardization in Haematolgy. Expert panel on cytometry and international society of laboratory hematology task force on platelet counting:Platelet ciunting by RBC/Platelet ratio method ［J］.Am J lin Pathol,2001，115:460464.

　　2 International Council for Standardization in Haematolgy.Prepared by expert panel on cytometry:Recmmendation for refernce method for packed cell volume［J］.Lab Hemaol,2001，7:148170.

　　3 彭明婷，申子瑜.对血细胞分析朔源体系的研究［J］.中华检验医学杂志，2007，27：132133.

　　4 丛玉隆.血液体液检验与临床释疑［M］.北京： 人民军医出版社,2004.294298.

　　5 申子喻.医院管理学：临床实验室管理分册［M］.北京:人民卫生出版社,2008.143.

　　6 藤本敬二.血液分析仪的溯源的国际参考方法［J］.中华检验医学杂志，2004，27（1）：5356.

　　7 彭明婷.建立血细胞分析溯源体系的有关问题［J］. 中华检验医学杂志，2006，29（4）：381.

　　8 叶应妩.全国临床检验操作规程［M］.第3版.南京：东南大学出版社，2006.141.