nm23和VEGF-C在胃癌组织中的表达及意义

作者：巩有方,董海生,张凤敏,姜卫星　　作者单位：河北省邯郸市，河北冀中能源峰峰集团总医院外二科(巩有方、张凤敏、姜卫星、张浩、赵健);峰峰羊渠河矿社区管理处医院外科(董海生)

　　【摘要】目的探讨nm23及血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达与胃癌的生物学行为及淋巴结转移的关系。方法　应用免疫组化法对52例胃癌组织中nm23及VEGF-C表达进行测定。结果　nm23低表达或VEGF-C高表达者淋巴结转移率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)，而与肿瘤大小、TNM、性别无关(P>0.05)。结论　通过nm23及VEGF-C表达检测对估计肿瘤转移预后有显著意义，而且二者协同检测意义更大。

　　【关键词】 血管内皮生长因子;胃癌;免疫组化;淋巴结转移

　　【Abstract】　ob[x]jective　To investigate the correlation between the ex[x]pression of nm23，vascular endothelium growth factor-C (VEGF-C) and biological behavior as well as lymphatic me[x]tastasis of gastric carcinoma tissues.Methods　The immunohistochemical method was used to detect the ex[x]pression of VEGF-C and nm23 in 52 cases of gastric carcinoma tissues.Results　The lymphatic me[x]tastasis rate in low-ex[x]pression of nm23 or high-ex[x]pression of VEGF-C of gastric carcinoma tissues was significantly higher than that without lymphatic me[x]tastasis tissues (P<0.05)，however，which was not related with the size of carcinoma，TNM and patients’ sex (P>0.05).Conclusion　The detection of nm23 and VEGF-C ex[x]pression levels plays an important role in evaluating patients’ prognosis and carcinoma me[x]tastasis，furthermore，the combined detection of nm23 with VEGF-C has more significant clinical value.

　　【Key words】　vascular endothelium growth factor-C;gastric carcinoma; immunohistochemistry;lymphatic me[x]tastasis

　　胃癌是常见的恶性消化道肿瘤。全部恶性肿瘤的第三位，胃癌的主要的转移方式之一是经淋巴道转移，是影响患者预后的一个重要因素。血管内皮生长因子-C(VEGF-C)主要作用介导肿瘤淋巴管、血管生成和增殖，从而促进肿瘤细胞生长和侵袭，nm23是肿瘤转移抑制基因，而该基因缺失或者突变，均会促进肿瘤的生长和转移。本试验通过VEGF-C和nm23在胃癌组织中表达情况来探讨其预后的价值。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　选取河北冀中能源峰峰集团总医院2005年5月至2008年12月手术切除及胃癌标本52例，所有患者术前均未行化疗和放疗。年龄32～74岁，平均年龄48.2岁;其中Ⅰ期10例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，此外取24例癌旁正常组织作为对照。

　　1.2　方法

　　兔抗人多克隆VEGF-C抗体，S-P试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供，染色方法参照试剂盒说明，分别用1.5%正常兔血清和0.01 mol/L PBS液取代抗体作为替代对照和空白对照。抗nm23基因产物单克隆抗体由美国Santa Cruz公司生产，免疫组化染色采用抗生蛋白链菌素-生物素标记法(LSAB)。试剂盒有丹麦DAKO公司生产，按产品说明书试验。TBS代替抗体作阴性对照。

　　1.3　结果判定

　　nm23阳性染色为位于细胞浆的棕黄色颗粒或团块，当阳性染色的癌细胞<30%时定为阴性表达，即低表达;≥30%时为正常表达[1]。选染色均为癌细胞密集区，在400倍视野下，以着色细胞占视野细胞总数的多少分为0～3级。0级：0;1级：<25%;2级：26%～50%;3级：>50%。1级以上为阳性，0级为阴性。

　　1.4　统计学分析

　　计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　nm23和VEGF-C在胃癌和癌旁正常胃组织中的表达的关系

　　nm23在癌细胞和癌旁正常胃组织中都可见阳性表达，但nm-23在52例胃癌组织中阳性表达23例(44.23%)，低于正常组织的83.33%(P<0.01);VEGF-C在胃癌组织中阳性表达33例(63.46%)，显著高于正常胃组织的29.17%(P<0.01)。

　　2.2　nm23低表达与胃癌生物学行为的关系

　　52例胃癌组织中nm23低表达有29例，低表达率为55.77%，而淋巴结转移组中有26例，其中低表达有10例(38.46%);在分化程度差组中，胃癌20例中低表达有5例(25.00%)。有淋巴结转移组阳性率明显低于无淋巴结转移组(P<0.01)。在分化程度差组明显低于分化程度高组，而nm23低表达在性别、肿瘤大小和TNM分期间差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.3　VEGF-C高表达与胃癌生物学行为的关系

　　52例胃癌中，VEGF-C阳性表达33例(63.46%)，淋巴结转移组中，有淋巴结转移者26例中，VEGF-C表达有19例(73.08%)，有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。分化程度组中，分化程度差20例中，VEGF-C高表达18例(90%)，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。而VEGF-C表达在肿瘤大小、患者性别、TNM分期关系间差异无统计学意义(P>0.05)。nm23低表达、VEGF-C高表达与临床各因素关系

　　2.4　相关性分析

　　在29例nm23低表达阳性患者中，有24例VEGF-C为阳性表达。23例nm23低表达阴性患者中，VEGF-C为阴性表达8例。提示nm23低表达与VEGF-C高表达呈正相关关系(r=0.61，P<0.01)。

　　3　讨论

　　3.1　nm23

　　1988年nm23基因由美国国立癌症研究所的Steeg等[2]应用克隆杂交技术首先从小鼠的黑色素瘤细胞中分离得到。该基因定位于人类染色体17q22，产物为152个氨基酸组成的17 kd核内及胞浆蛋白，该蛋白与二磷酸核苷激酶(nucleotide diphosphate kinase，NDPK)的氨基酸序列具有高度同源性。目前认为nm23可能是一种具有NDPK功能的基因，并由此可能抑制肿瘤的转移能力，NDPK一方面参与细胞骨架微管蛋白的多聚化以调节细胞运动，并参与细胞分裂时纺锤体的形成来调节细胞分化，另一方面通过影响G蛋白的信号传递发挥负调节作用[3-5]。nm23基因表达与多种肿瘤好转呈负相关[4]。本研究发现：胃癌组织中nm-23的表达(55.77%)显著低于正常组织的87.5%(P<0.05)。在组内比较中，nm-23在分化程度、有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05)。这提示nm-23基因在抑制肿瘤细胞的活性，在胃癌的发生发展过程中起一定的作用。本实验说明，nm-23基因具有抑制肿瘤细胞的活性，该基因缺失、突变或失活均会促进胃癌的发生及转移，可以作为肿瘤预后的一项指标。

　　3.2　VEGF-C

　　VEGF-C通过旁分泌方式特异地作用于表达VEGF-C的血管内皮细胞，使血管内皮细胞分裂增殖，从而形成新生血管。在没有血管形成时，大多数肿瘤生长的直径很少超过1 mm。目前研究VEGF-C作用机制是选择性作用于血管内皮细胞膜上2种受体：flt-1、KDR，通过磷酸肌醇特异性磷酸酯酶c使胞内IP3浓度升高而发挥作用。VGEF-C的表达与肿瘤复发、转移呈正相关，可以作为肿瘤预后的预测因素之一。目前研究VEGF-C在术前预测甲状腺癌[6]、结肠癌的淋巴结转移方面的可能性;而胃癌方面结论仍有争论;有研究发现人胃癌细胞中VEGF-C的表达与性别、年龄、大小无关，但与肿瘤细胞浸润深度、淋巴结转移密切相关[7]。狄茂军等[8]经研究发现VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达随临床分期的升高其表达有增强的趋势，但均未达到统计学意义的差别。Onogawa等[9]研究发现，VEGF-C表达与胃癌浆膜浸润、淋巴结转移有关。Amioka等[10]通过研究胃癌标本发现VEGF-C与浸润深度、淋巴结转移有关，VEGF-C阳性组胃癌淋巴管密度明显高于阴性组。因此，在胃癌的生长及转移过程中，VEGF-C是一项不可或缺的因素之一。

　　本研究表明，在有可能影响胃癌生物学行为的因素当中， VGEF-C高表达在淋巴结转移、分化程度间差异有统计学意义(P<0.05)。亦可能与肿瘤细胞的生物学特性有关，这需要以后进一步研究。新研究患者应用抗VEGF-C抗体能明显抑制肿瘤生长和转移，这也从另一方面提示VEGF-C在肿瘤发生转移中的作用。

　　【参考文献】

　　1　张声，叶乐华，杜华.P53过表达和nm23低表达与胃癌淋巴结转移关系的探讨.中华肿瘤杂志，1995,17：418-420.

　　2　Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene association with low me[x]tastatic potential.J Natl Cancer Inst,1998,80：200.

　　3　Demirbas S，Sucullu I，Yildirim S，et al.Influence of the c-erbB-2，nm23，bcl-2 and p53 protein markers on colorectal cancer.Turk J Gastroenterol,2006,17：13-19.

　　4　Steeg PS.Perspectives on classic article：me[x]tastasis suppressor genes.J Natl Cancer Inst,2004,96：E4.

　　5　Wang LB，Jiang ZN，Fan MY，et al.Changes of histology and ex[x]pression of MMP-2 and nm-23-H1 in primary and me[x]tastatic gastric cancer.World J Gastroenterol,2008,14：1612-1616.

　　6　巩有方，赵现斌，张浩，等.甲状腺乳头状癌组织中CD105、VEGF-C表达与其转移的关系.中国医师杂志，2009,11：1253-1255.

　　7　钱立元，魏源水，张翼，等.VEGF-C在胃癌组织中的表达与淋巴管生成及淋巴结转移的相关性研究.中国普通外科杂志，2007,16：915-918.

　　8　狄茂军，王卫星，兰明银，等.VEGF-C与VEGFR-3在胃癌组织中的表达及意义.临床消化病杂志，2008,20：150-152.

　　9　Onogawa S，Kitadai Y，Amioka T，et al.ex[x]pression of vascular endothelial growth factor-C and D(VEGF-C and VEGF-D)in early gastric carcinoma：correlation with clinicopathological parameters.Cancer Lett,2005,226：85.

　　10　Amioka T，Kitadai Y，Tanaka S，et al.Vascular endothelial growth factor-C ex[x]pression predicts lymph node me[x]tastasis of human gastric carcinomas invading the submucosa.Eur J Cancer,2002,38：1413-1419.