ICAM3在急性白血病中的表达及临床意义

　　作者：陈玲,于桂兰,李元堂,赵广玲,徐功立　　作者单位：山东大学附属省立医院 1. 血液科; 2. 检验科， 济南 250021

　　【摘要】目的 探讨细胞间粘附分子3(intercellular adhesion molecule3，ICAM3)在急性白血病(acute leukemia,AL)中的表达及其在临床疗效、髓外浸润中的意义。方法 采用骨髓涂片免疫组织化学法检测了33例急性非淋巴细胞白血病(acute nonlymphoblstic leukemia，ANLL)、21例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)患者治疗前后及10例正常对照骨髓单个核细胞ICAM3的表达率。结果 化疗前AL组ICAM3表达率均显著高于正常对照组，ANLL组与ALL组比较ICAM3表达率差异无统计学意义(P>0.05)，且TALL组与BALL组ICAM3表达率差异无统计学意义(P>0.05);ICAM3的表达与患者发病年龄、性别、就诊时血红蛋白(Hb)、血小板(BPC)等因素无关，与骨髓原始细胞比例呈正相关(r=0.467,P<0.01);外周血白细胞(WBC)≥100×109患者ICAM3的表达率比WBC<100×109组高(P<0.05);所有AL患者经过一个疗程化疗后ANLL、ALL未缓解组的ICAM3表达率明显高于缓解组(P<0.01)，但缓解组与对照组之间ICAM3表达率差异无统计学意义(P>0.05);组织浸润组骨髓AL细胞ICAM3表达率高于无组织浸润组(P<0.01)。结论 ICAM3在AL中的表达明显高于正常对照组，其表达水平的高低可作为AL观察临床疗效及判断预后的指标之一。同时，AL的组织浸润机制可能与细胞间粘附分子表达升高有关。

　　【关键词】 急性白血病;细胞间粘附分子3,髓外浸润

　　To explore the ex[x]pressions of the intercellular adhesion molecule3(ICAM3) in acute leukemia and to investigate its role in clinical therapeutic efficacy and extramedullary infiltration (EI). Methods The ex[x]pressions of ICAM3 in 33 cases of acute nonlymphoblastic leukemia(ANLL), 21 cases of acute lymphoblastic leukemia (ALL) and 10 normal bone marrow mononuclear cells were determine by bone marrow smear immunohistochemistry. Results The ex[x]pression of ICAM3 in AL patients was significantly higher than that in the controls, and it had no correlation with patients′ age, gender, Hb and BPC, but had direct correlations with the ratio of primitive bone marrow cells. Also the ex[x]pression of ICAM3 was higher in patients whose WBC≥100×109/L than in patients whose WBC<100×109/L(P<0.05), and also was much higher in AL patients without complete remission (CR) than in AL patients with CR(P<0.01), but there were no significant differences between patients with CR and the controls(P>0.05). Meanwhile the ex[x]pression of ICAM3 was much higher in leukemic cells with EI than that in leukemia cells without EI(P<0.01). Conclusion ICAM3 could be used as a helpful marker to assess the therapeutic efficacy and prognosis for AL, and its increase might relate to infiltration of acute leukemic cells.

　　Key words: Acute leukemia; Intercellular adhesion molecule3 ; Extramedullary infiltration

　　细胞间粘附分子3(intercellular adhesion molecule3，ICAM3) 即CD50,属于免疫球蛋白超家族，是淋巴细胞功能相关抗原1(lymphocyte function associated antigen1，LFA1)的第三受体，表达在所有的白细胞上，而在内皮细胞上多缺如。研究表明,急性白血病(acute leukemia,AL)细胞粘附分子(intercellular adhesion molecules, ICAMs)表达异常与白血病发生、发展及预后密切相关[12]，并参与肿瘤细胞的“免疫逃脱”作用。本研究对54例初诊AL患者的ICAM3水平进行检测,旨在探讨其在临床疗效、预后及髓外浸润中的意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料 2007年4月至11月在山东大学附属省立医院血液科收治的初发AL患者54例。男33例，女21例，年龄12～77岁，中位年龄40.5岁，均按统一标准诊断与分型[3]。(1) 急性非淋巴细胞性白血病(acute nonlymphoblastic leukemia，ANLL)33例，男21例，女12例。入院时白细胞(WBC) 0.06×109/L～155.03×109/L,中位数8.90×109/L。血红蛋白(Hb) 40?g/L～131?g/L，中位数71?g/L。血小板(BPC) 6×109/L～153×109/L,中位数22×109/L。骨髓原始细胞百分比为29.5%～96.0%，中位数86.0%;(2)　急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)21例，其中BALL 14例，TALL 7例。14例BALL患者中，男8例，女6例。WBC 1.22×109/L～43.0×109/L,中位数4.34×109/L。Hb 49?g/L～123?g/L，中位数94.5?g/L。BPC 24×109/L～146×109/L, 中位数65×109/L。骨髓原始细胞百分比为56.5%～93.0%，中位数85.75%;7例TALL患者，男4例，女3例。WBC 1.10×109/L～146.26×109/L,中位数108.22×109/L。Hb 43?g/L～147?g/L，中位数72?g/L。BPC 16×109/L～101×109/L,中位数36×109/L。骨髓原始细胞百分比为77.5%～97.0%，中位数89.5%。

　　上述ANLL和ALL患者均除外以下疾病:① 近期各种感染性疾病或伴有严重肝肾功能异常;② 近3个月发生过急性心衰、心梗;③ 自身免疫性疾病及免疫缺陷性疾病;④ 近期服用影响免疫功能的药物;⑤ 妊娠或哺乳期妇女;所有入组患者均在第1次及第2次化疗前分别作骨髓穿刺涂片留取标本，第1次化疗后一般休药7～14?d开始第2疗程治疗。(3) 正常对照组10例,男6例,女4例, 年龄12～74岁,中位年龄41.5岁。为山东大学附属省立医院非血液病患者。

　　1.2 免疫组织化学二步法检测各组骨髓单个核细胞ICAM3的表达 选择国际上的线单抗，ICAM3抗体购于美国Labvision公司，应用抗生物素蛋白生物素复合物(ABCAP)染色技术对骨髓涂片进行ICAM3的检测(玻片法)。将骨髓涂片置纯丙酮内固定5～10?min后即刻置于洗涤液内浸洗3?min/次，3次。取出涂片滴加单克隆一抗，置湿盒内30?min(实验操作过程中室温控制在20～25?℃)，后置于洗涤液内浸洗3?min/次，3次。滴加反应集合物，置湿盒内30?min，后置于洗涤液内浸洗3?min/次，3次。滴加显色剂5～10?min，流水冲洗，苏木素复染后流水冲洗3～5?min，晾干，甘油-明胶封片、镜检。

　　结果判断 阳性表达：细胞膜或细胞浆见鲜红色沉淀物。阴性表达：细胞膜或细胞浆未见鲜红色沉淀物。油镜下每张涂片选取5个有代表性的高倍视野,每个视野计数200个单个核细胞,计算阳性细胞百分数。

　　1.3 白血病髓外浸润临床判断指标 具有下列之一即为髓外浸润组: ① 齿龈明显增生肿胀; ② 肝、脾、淋巴结肿大; ③ 脑膜浸润(中枢神经系统白血病); ④ 皮肤结节。以上体征均在化疗后随病情好转而改善，随病情恶化而加重。

　　1.4 治疗方案 ALL组给予VDLP(长春新碱，浙江海正药业股份公司生产，批号：070401A;柔红霉素，意大利爱宝药厂生产，批号：TF1008B;左旋门冬酰胺酶，江苏常州千红生化制药有限公司，批号：070328;强的松，江苏鹏鹞制药有限公司生产，批号：0708242) 4周为一疗程化疗。ANLL 组除M3型采用全反式维甲酸(山东良福制药有限公司，批号：070601)或全反式维甲酸与化疗结合治疗，余皆给予DA(柔红霉素;阿糖胞苷，哈尔滨博莱制药有限公司，批号：070226) 或HA(高三尖杉酯碱，浙江杭州民生制药集团有限公司，批号：0703039;阿糖胞苷) 1周方案化疗。所有药物均按常规标准剂量及用法应用。

　　1.5 完全缓解标准(CR) ① 临床无白血病浸润所致的症状和体征，生活正常或接近正常;② 血象：Hb≥100?g/L(男)或90?g/L(女性及儿童)，中性粒细胞值≥1.5×109/L,血小板≥100×109/L，外周血白细胞分类中无白血病细胞;③ 骨髓象：原粒细胞Ⅰ型+Ⅱ型(原单+幼单核细胞或原淋+幼淋巴细胞)≤5%，红细胞及巨核细胞系列正常。

　　1.6 统计学处理 所有数据均采用SPSS13.0统计软件分析。数据采用中位数、±s、百分率表示,多组间均数比较采用方差分析，两组间均数比较采用t检验，两参数间的相关性采用Spearman等级检验。

　　2 结 果

　　2.1 化疗前各组ICAM3的表达 见图1，表1。由图1可见，ICAM3在AL细胞高表达。由表1可见，与正常对照组比较，ANLL组与ALL组化疗前ICAM3表达率显著升高，但ANLL组化疗前ICAM3表达率与ALL组差异无统计学意义，TALL组与BALL组比较化疗前ICAM3表达率差异无统计学意义(P>0.05)。

　　2.2 化疗后各组间ICAM3的表达率的比较 经过一个疗程的化疗后，ANLL、ALL缓解组ICAM3的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);未缓解组的ICAM3表达率明显高于缓解组，差异具有统计学意义(P<0.01)，见表2。

　　3 讨 论

　　ICAM3在人正常骨髓内皮细胞以及原代脐静脉内皮细胞呈低水平表达[4]。近年来研究表明其在细胞内信号传递过程中也起一定作用[5]。ICAM3在局部免疫应答中早启动，主要介导白细胞之间及T细胞与抗原递呈细胞之间的粘附，参与树突状细胞与T细胞相互作用，诱导T细胞早期活化，对免疫应答的诱导阶段具有重要作用，并与LFA1结合通过分子结构而调节细胞间粘附分子1(ICAM1，CD54)/LFA1的相互作用[6]。AL是常见的血液系统恶性肿瘤,发病机制尚不明确。近年来对基因调控的深入研究证实AL的发生与众多基因参与的异常信号传导有关,其中粘附分子的主要作用是促进异源细胞间的相互粘附,使得不同细胞间的相互效应得以实现,形成肿瘤浸润和转移[7]。

　　本研究应用免疫组织化学法检测了正常对照组、AL组骨髓单个核细胞ICAM3表达率, 结果显示ICAM3在正常对照组表达率很低，而ANLL组、ALL组表达率显著高于正常对照组。ICAM3的表达在ANLL组与ALL组及TALL组与BALL组差异无统计学意义。推测ICAM3的表达可能与细胞类型无关。ICAM3在所有类型AL患者骨髓白血病细胞表达显著升高，可能与白血病的早期形成密切相关。国外已有研究证实在淋巴系的肿瘤中ICAM3的表达上调[8]。Kim等[9]研究显示ICAM3可诱发非小细胞肺癌细胞株H1299的大量增值。提示ICAM3可能是肿瘤形成的相关调控因子。

　　本研究结果显示，ICAM3在外周血WBC计数≥100×109/L(即高白细胞急性白血病)患者的表达高于WBC<100×109组(P<0.05)，且WBC≥100×109/L的患者CR低，预后较差。化疗前ICAM3表达率与骨髓原始细胞比例呈正相关，这可能与肿瘤负荷有关。Darom等[10]检测了36例B淋巴细胞粘膜相关性淋巴瘤患者ICAM3的表达，发现ICAM3的表达与肿瘤负荷成比例，ICAM3水平高，则肿瘤负荷高。本研究中所有AL患者经过一个疗程化疗后ANLL、ALL未缓解组与缓解组ICAM3表达率有显著差异，未缓解组的ICAM3表达率明显高于缓解组(P<0.01)，但缓解组与对照组之间ICAM3表达率差异无统计学意义(P>0.05)，提示ICAM3的表达率可作为临床疗效判断的指标之一。

　　骨髓外浸润是影响白血病患者预后的重要因素之一。本研究将初发的AL患者分为浸润组与非浸润组，研究发现组织浸润组骨髓AL细胞ICAM3表达率高于无组织浸润组(P<0.01)。推测ICAM3可能改变了白血病细胞的生物学行为,导致其浸润和扩散的发生：① ICAM3/LFA1粘附机制直接介导其浸润,通过这些互为配体/ 受体的粘附分子的播散,加速疾病发生、发展;② 由于ICAM3能与LFA1结合通过分子结构而调节ICAM1/LFA1的相互作用，亦可能间接成为白血病细胞发生浸润和转移的一条途径。

　　总之，AL患者的白血病细胞上存在异常表达的ICAM3，这些异常表达可能是白血病早期形成的相关调控因素，同时提示可将ICAM3表达率作为观察临床疗效及判断预后的指标之一。另外，白血病的组织浸润可能与ICAM3表达增高有关，但其具体机制尚不明确，有待进一步研究观察。