微生态制剂对溃疡性结肠炎的治疗效果及作用机制研究

         微生态制剂在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗中占重要地位，其疗效肯定，但作用机制尚不明确’。金双歧是一种含有长型双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的三联活菌复方制剂。白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)能抑}!l Thl型细胞因子的分泌，金双歧对UC的作用机制是否与IL-10有关，有待进一步研究’。本研究通过比较微生态制剂治疗UC前、后临床症状评分、内镜分级评分及结肠炎性反应评分，并测定治疗前、后患者血清及结肠勃膜中IL-10的表达情况，探讨微生态制剂对UC的治疗效果及作用机制

         资料与方法 
         一、病例资料病例纳人标准:(1)符合UC诊断标准3;(2)均为慢性复发性或活动期患者。病例排除标准:(1)暴发性UC;(2)临床诊断为细菌或其他感染性肠炎、缺血性肠炎或放射性肠炎;(3)UC合并结直肠肿瘤。按上述病例纳人和排除标准，2007年5月至2010年6月间河南新乡医学院附属医院收治的60例UC患者纳人本研究。按照随机数字表法分为金双歧组、畅美组和联合组，每组20例。3组一般资料具有可比性;见表1。同时选取20名健康体检者作为正常对照。本研究经医院伦理委员会批准实施，所有人组病例均签署知情同意书。 
         二、治疗方法金双歧(内蒙古双奇药业股份有限公司，国药准字519980004)2.0 g,2次/d;畅美(奥沙拉凑钠胶囊，天津力生制药，国药准字H20000247)1.0;，3次//d;联合组同时给予金双歧和畅美治疗。同时3组均加用生理盐水100 ml和蔑倍合剂(新乡医学院附属医院)200 ml，每晚灌肠。疗程24个月。三、疗效判定分别于治疗后氏12,24,36个月及48个月行结肠镜检查，观察有无症状复发。1.临床症状评分:分别记录治疗前及治疗24个月后症状积分。计分方法:(1)排粪次数:1}2次/d(0分),3次/d(1分),4}5次/d(2分)，大于或等于6次/d(3分);(2)粪便性状:成形((0分)，软粪(1分)，糊状粪(2分)，稀水样粪(3分);(3)血便:无(0分)，粪中血丝((1分)，粪中血块(2分)，便血(3分);(4)腹痛:无(0分)，轻度(1分)，中度(2分)，重度(3分);(5)里急后重:无(0分)，有(1分);(6)腹胀:无(0分)，有(1分尸2.内镜分级评分:治疗前及治疗24个月后均行结肠镜检查，根据改进的Baron内镜下溃疡性结肠炎活动度分级标准来评分:。级为正常(0分);I级为充血、血管模糊(1分);II级为有接触性出血(2分);IQ级为有自发性出血(3分);W级为可见大小不等的溃疡(4分)5。3.结肠炎性反应评分:于病变明显处取活检，由2位高年资的病理科医师进行双盲读片，取3个高倍镜视野的平均值为后结果。按病理组织学分级标准来评分:0级为固有层无中性粒细胞浸润(。分);I级为固有层有少量中性粒细胞浸润(小于to/HPF),累及少量隐窝((1分);II级为固有层有明显中性粒细胞(1050/HPF)浸润，累及50%以上隐窝(2分);l级为固有层有大量中性粒细胞(大于SO/HPF)浸润，伴隐窝脓肿(3分);W级为固有层明显急性炎性反应伴溃疡形成((4分户〕0四、IL-10检测1.结肠薪膜IL-10的表达:试验组治疗前后均在病变明显处钳取组织，对照组在直肠钳取组织，采用免疫组织化学(免疫组化)方法检测，观察显微镜下随机5个高倍视野，计算平均每高倍视野阳性细胞数(胞质染成棕褐色或棕黄色)。，免疫组化结果判定:阳性细胞数小于或等于10%为阻哇，11%}50%为弱阳性，51%}75%为中度阳性，大于75%为强阳性。本研究将阴性和弱阳性定义为IL-10阴性表达，中度阳性和强阳性定义为IL-10阳性表达。结果判定由不知患者任何病理资料的3位高年资的病理医师分别进行，取至少2位意见相同的结果进行统计学分析。2.血清IL-10的表达:清晨空腹采肘静脉血3 ml,离心取血清，应用酶联免疫双抗体夹心法测定IL一10含量。五、统计学方法采用SPSS 11.5统计软件对数据进行分析，计量资料的组间比较采用两独立样本t检验，治疗前后的比较采用配对t检验;计数资料的比较采用X}检验 
         结果

         一、疗效评价治疗后24个月，联合组临床症状评分、内镜分级评分和炎性反应评分均显著降低，而金双歧组和畅美组各项评分的下降并不显著;见图1、图2和表20所有患者均接受了至少48个月的随访，金双歧组5例(25%、畅美组6例(30%、联合组2例(10%)出现复发。 
         二、IL-10的表达情况正常对照组结肠豁膜中IIr10的阳性表达率为$5.0%(17/20)，血清II:10水平为(18.2士2.6)ng/L金双歧组和畅美组患者治疗前后IL-10在结肠茹膜和血清中的表达并无明显改变，但联合组患者治疗后IL-10表达水平明显升高见表3讨论近年来，微生态制剂对UC的治疗作用及其机制引起多数学者的广泛关注，临床上采用添加微生态制剂辅助治疗UC也日益增多。Seksik等〔7一研究表明，UC患者肠道中存在菌群失调。金双歧是由长型双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌3种细菌组成，是人体重要的益生菌，能够促进肠道内正常菌群的生长繁殖，有利于维持肠道内微生态平衡，阻止致病菌或病毒侵人，减轻和缓解肠道炎性反应。王旭霞等H通过对大鼠LC模型的研究中发现，在应用双歧杆菌治疗后，髓过氧化物酶活性及IL-6,IL-8,TNF-。等炎性因子水平明显下降，从而证实双歧杆菌可以抑制细胞因子分泌，降低肠道通透性，对肠道戮膜起保护作用二IL-l 0作为一种炎性抑制因了，主要由Th2细胞、单核一巨噬细胞及活化的B细胞产生，其主要生物学作用是抑制巨噬单核细胞的活性，控制肠道局部炎性反应，而益生菌及其代谢产物可以促进IL-10表达，使患者血清及结肠载膜中IL-I 0的水平升高，这可能是益生菌治疗UC的机制之一。 
        

         本研究采用免疫组化和酶联免疫双抗体夹心法分别测定结肠瓤膜及血清中的IL-10的含量，发现联合治疗后患者血清及结肠豁膜中IL-10表达水平较治疗前明显升高，而单用金双歧或单用畅美治疗，IL-10升高不明显，提示IL-I 0的表达可反映UC的严重程度，并可作为UC临床疗效的判断依据和药物疗效评估的重要指标。畅美(奥沙拉嗓钠)是2000年后在国内上市的新药，其与柳氮磺毗陡有着相似的减少茹膜损伤、抑制炎性反应、促进溃疡愈合的作用，但无磺胺基引起的不良反应，不受胃排空速度、肠道pH值影响，可更好地发挥治疗作用;但初期应用时可能导致腹泻等并发症。 
         金双歧作为肠道固有活菌的复方制剂，能有效的补充人体肠道中双歧杆菌的数量，竞争性的排斥过度生长的有害细菌，重建肠道菌群的生态平衡，联合畅美应用有助于畅美发挥减轻肠道炎性反应的作用，并减少畅美引起的腹泻等并发症的作用，本组病例中未见严重腹泻等并发症。本研究显示，金双歧联合畅美治疗后临床症状评分、内镜分级评分及结肠炎性反应评分均明显下降，治疗前后的比较差异有统计一学意义(P<0.05，总有效率明显高于单一应用组。 
         表明微生态制剂联合应用畅美其作用是相辅相成的，临床疗效更为显著，与既往研究结果有一致性y-u,综上所述，金双歧对UC有较好的治疗作用，与畅美联合应用使疗效更为显著，其作用机制可能与促进IL一10的分泌有关 
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