miR-21对间充质干细胞衍生的细胞外囊

外泌体和小细胞外囊泡包含在细胞产生的细胞外囊泡（EV）中，它们含有许多生物活性分子，如miRNA和蛋白质。EV正在充当细胞-细胞通信的载体，以调节细胞活动，并影响其目标基因在受体细胞中的表达。近年来，MSC衍生的EV由于其旁分泌功能，正在取代MSC本身，被称为基于MSC的细胞疗法的新无细胞替代品。与细胞疗法相比，这些MSC衍生的EV比自MSC具有优势，包括更大的稳定性、更低的免疫原性以及运输、储存和给药的便利性。由于其治疗潜力，构成了再生医学有前途的研究领域之一。

衰老相关分泌表型（SASP）被视为许多年龄相关疾病进展的标志性提供了新的视角。能够让我们了解从癌症到神经退化等与年龄相关的多种疾病的炎症状态和复杂性。许多miRNA通过调节关键衰老调节蛋白的丰度来影响衰老，通常通过降低编码这些因素的mRNA的稳定性和/或翻译。因此，miRNA影响SASP及其操作将允许针对衰老细胞的诊断和治疗机会。人们对MSC衍生EV在自身免疫性疾病中运输的miRNA的治疗用途有很多期望。

该团队之前进行的调查包括对MSC的EV处理，之前修改为含有miR-21拮抗剂。发现这些EV在减少骨关节炎（OA）等与年龄相关的疾病中比抑制miR-21的MSC本身更有效。此外，他们的MSC-miR-21衍生的EV调制了ERK1/2家族，以在研究的体内OA模型中发挥其抗炎作用。

本次实验采用人类脐带基质的间充质干细胞（MSC）使用透镜病毒转导进行稳定修饰，以抑制miR-21-5p，并在MSC衍生的细胞外囊泡（EV）中进行了猎枪蛋白质组学分析，以检查miR-21抑制对其蛋白质货物的影响。此外，该团队还研究了那些修饰的细胞外囊泡的副分泌效应及其对SASP的影响。

miR-21抑制对MSC的SASP和MSC-miR-21-衍生EV的表征的影响

RT-qPCR对MSC-miR-21−中SASP标记的分析表明，与模拟相比，它们都减少了其表达的统计学意义。通过TaqMan探针通过RT-qPCR检查了转染MSC中miR-21的表达，表明与MSC-mimic相比，miR-21在与mimic相比，来自用miR-21抑制剂转染的MSC的EV中表达不足。NTA透露与MSC-mimic衍生的EV相比，MSC衍生的EV产量在MSC中减少了（25%），其miR-21抑制，这种减少在统计学上；此外，细胞外囊泡的大小为140±20纳米，转染组之间没有差异。

体外MSC-miR-21-衍生EV与MSC-miR-21+衍生EV的旁分泌效应

团队通过培养MSC-miR-21-研究了EV的旁分泌效应，其中添加了MSC-miR-21-衍生的EV（2×107 EV）或MSC-miR-21+衍生的EV（2×107 EV）。使用TaqMan探针的RT-PCR验证了MSC-miR-21+衍生EV中miR-21的增加。RT-PCR研究了这些EV对SASP标记表达的影响。MSC-miR21--衍生的EV被发现对SASP表达产生统计学意义的抑制作用相反，当使用MSC-miR-21+衍生的EV治疗时，这些细胞增加了其SASP表达的统计学意义。进行了西方印迹，并观察到磷酸化蛋白水平，丝氨酸/肌氨酸激酶（磷-ERK1/2和磷-AKT）作为MAP激酶信号转导途径的基本成分，当用MSC-miR-21-进行MSC-miR-21+-衍生EV治疗时，在统计学上增加。

综上所述，本研究表明了miR-21对EV生产密度的重要性及其在通过SDC1激发中的作用。此外，miR-21对ERK1/2依赖性MAPK通路发挥了炎症作用。所有这些结果都表明，SDC1可能是抗炎治疗的新目标。