单克隆抗体在人类巨细胞病毒感染领域的研究与应用进展

人类巨细胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV）是常见的先天性感染病原体之一，属于疱疹病毒科中结构复杂的一种病毒，在大部分人群中存在隐性感染，当机体免疫力下降时将出现活动性HCMV感染，甚至危及患者生命。

HCMV(人类巨细胞病毒)属于疹病毒科乙组疤疹病毒亚科，是大的动物病毒之一，其感染非常普遍。HCMV感染可以导致间质性肺炎、免疫力受抑及器官植入失败，其感染形式多呈隐性感染或潜伏感染。对于大多数人来说，HCMV感染不是一个大问题，但对于高危患者则是危及生命的。当机体免疫力降低时，潜伏状态HCMV再活化而引起发病，如器官移植后接受免疫抑制剂治疗、恶性肿瘤化疗、HIV感染导致免疫缺陷或免疫抑制状态。

HCMV结构蛋白包括衣壳蛋白被膜蛋白以及包膜蛋白，研究广泛的是后两者，其中被膜磷蛋白和包膜糖蛋白抗原性强，具有广泛的临床应用前景。

有5种被膜磷蛋白研究比较清楚PP150、PP65、PP71、PP28和PP67。PP150的DNA序列和氨基酸序列与其他疹病毒无同源性，其抗原性在HCMV结构蛋白中强，由于HCMV中还存在150kDa的衣壳蛋白，二者需双向SDS-PAGE才易分开并且需要免疫学鉴定因而限制了PP150的应用；PP65是被膜蛋白中主要的一种，分子量为65kDa，它占被膜蛋白致密颗粒的95%，占整个病毒蛋白的15%在不同的HCMV毒株中，PP65具有高度保守性，整个感染周期中，PP65在感染细胞中持续表达，它在病毒感染及诱导机体免疫反应中起重要作用，它不仅可诱导高水平的特异性循环抗体，而且能诱导特异性的细胞免疫反应，目前其单克隆抗体在临床上用于PP65血症的诊断；PP28与其他疹病毒具有部分同源性，已有PP28DNA在大肠杆菌中表达获得融合蛋白的报道，该融合蛋白可作为抗原检测患者血清中相应的抗体；PP67的单克隆抗体无中和活性。

包膜糖蛋白是病毒毒粒表面的抗原决定簇，是有包膜病毒表面脂质双层膜的重要成分，它们与病毒识别宿主细胞膜受体、吸附和穿入细胞病毒的致病作用以及诱导宿主的免疫反应密切相关。HCMV包膜上至少有8种以上可以用电泳技术区分的糖蛋白复合物，其中研究广泛的是gB。gB是诱导产生抗HCMV中和抗体的主要抗原，目前受关注的是其中AD-1和AD-2两个抗原决定簇。gB上的第552~635个氨基酸之间的区域即AD-1，被证实是HCMV感染后引发体液免疫的主要抗原决定簇。AD-1是一个复杂的结构域，它包含一系列连续的长度大于70bp的抗体结合位点。中和抗体与非中和抗体可以竞争性地与AD-1结合，有学者用含AD-1所有结构域的蛋白重组体来检测与AD-1相结合的单克隆抗体的特异性及纯化多克隆抗体的亲和力，结果显示所有单克隆抗体都拥有结合到重组蛋白的特有模式，说明在AD-1含有与抗体结合的独特位点，单克隆抗体与AD1的结合模式并不能预测单克隆抗体的中和活性。

抗AD-1的单克隆抗体阻止细胞与病毒融合的能力可达到20%~60%；AD-2的免疫原性很弱但被免疫系统识别后可以加强免疫保护作用。AD-2的单克隆抗体能有效阻止细胞与病毒的融合远远强于抗AD-1的单克隆抗体，但两种单克隆抗体对于硫酸乙酷肝素介导的病毒吸附都没有阻止作用。抗AD-2的单克隆抗体发挥中和病毒感染作用的机制可能是阻止了在病毒与细胞接触初期受体与配体的结合过程，还有研究将抗AD-2的单克隆抗体的单链可变区制备成单体形式和二聚体形式，研究它们的中和作用及与AD-2作用的动力学发现单体形式无中和作用，而二聚体形式尽管会与相结合的gB发生缓慢的解离，但却有中和活性。

鼠源性抗体在临床应用中可能会出现免疫原性，导致患者体内出现抗抗体，还有可能出现过敏反应，因此限制了其应用。利用抗体人源化技术可以轻松解决免疫原性这一难题。

抗体人源化是指通过DNA重组技术和蛋白质工程技术，将鼠源单克隆抗体的大部分氨基酸人源化，以降低其异源性，保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，这种通过基因重组所表达的抗体既有鼠源成分，又有人源成分，所以称为人源化抗体 SHAPE \* MERGEFORMAT

优势：

抗体人源化团队经验丰富，技术专家拥有成功研制上市的治疗性抗体药物项目经验

拥有自主开发的高表达载体及细胞系，以及具有商业开发 license 的细胞系

具有一站式从细胞系开发，到发酵培养条件优化，再到 150L 细胞罐发酵，完成整个治疗性抗体的研发能力

国内许多学者也进行了HCMV单克隆抗体的筛选，但大多数目的是用于抗原血症的早期准确检测。两个或多个特异性强的重组抗原联合使用制备特异性诊断性抗体，将是进一步的研究方向。理论上讲在感染初期使用McAbs可中和病毒颗粒活化能使病毒感染细胞溶解的补体，从而防治HCMV感染但随着感染的发展，HCMV已整合到宿主细胞的细胞核中，并大量复制而诱发各种临床综合征，因此早期诊断、早期用药就至关重要。