基质金属蛋白酶-7、-9及其抑制剂-2与置IUD后慢性子宫内膜炎的关系

作者：薄乃秀　周秀敏　戴琪　　作者单位：河北省唐山市丰南区计划生育技术服务站;河北联合大学2009级硕士研究生;河北省唐山市开滦(集团)有限责任公司医院妇产科
　　【摘要】 目的　探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、MMP-9及其抑制剂-2(TIMPS)与置宫内节育器(IUD)后慢性子宫内膜炎的关系。方法　选取丰南区计划生育服务站因症取环的育龄女性共637例，经病理诊为慢性子宫内膜炎20例为试验组，另取同期放置与未放置IUD的正常子宫内膜各20例为对照组。用免疫组化法检测MMP-7、MMP-9、TIMP-2在3组内膜中的表达。结果　MMP-7、MMP-9在置IUD后慢性子宫内膜炎中表达的平均光密度值高于两个正常子宫内膜组，差异有统计学意义(P=0.000)。TIMP-2在3组中的表达差异无统计学意义(P=0.163)。MMP-7和MMP-9在子宫内膜炎中表达具有相关性(P=0.024);MMP-7与TIMP-2、MMP-9与TIMP-2在子宫内膜炎中的表达无相关性(P=0.693，P=0.743)。结论　MMP-7和MMP-9在置IUD后发生的慢性子宫内膜炎中高表达，可能与其发病有关;TIMP-2在置IUD后发生的慢性子宫内膜炎中无高表达。
　　【关键词】 基质金属蛋白酶;基质金属蛋白酶组织抑制剂;宫内节育器;慢性子宫内膜炎;免疫组化

　　随着宫内节育器(intrauterine devices，IUD)的普遍使用，其并发症也在不断突显，尤其置IUD后并发慢性子宫内膜炎(chronic endometritis，CE)，会引发子宫异常出血、不孕等，给女性造成疾病的同时又影响IUD的推广使用。为此倍受专业人员的关注，研究也在不断深入。近年来，有关基质金属蛋白酶(matrix me[x]talloproteinases，MMPs)、及其组织抑制剂(tissue inhibitors of me[x]talloproteinase，TIMPS)参与组织修复、炎症反应和肿瘤浸润转移的研究，对于探讨其发生机制、寻找有效的治疗药物以及预防显得尤为重要。
　　1　资料与方法
　　1.1　一般资料
　　收集2010年6至12月在丰南区计划生育服务站因症取环的育龄女性共637例，经病理诊断为CE的组织标本20例作为试验组(A组)，记录资料完整，排除其他疾病，就诊前6个月均未进行过抗炎治疗及激素治疗，上述标本均经病理证实为增生期子宫内膜。另选取同期置器与未置器的健康育龄女性的正常子宫内膜组织标本各20例作为2个对照组(B组、C组，因子宫脱垂和卵巢囊肿住院手术前行取环诊刮术)。3组人群均在知情同意的情况下、均经病理确定为增生期子宫内膜。3组放置IUD的时间均是在月经干净3～5 d、无生殖道炎症等合并症、年龄差异也无统计学意义(P>0.05)。
　　1.2　主要实验试剂

　　(1)即用型鼠抗人MMP-7单克隆抗体2M-0334北京中杉生物技术有限公司。(2)即用型兔抗人MMP-9单克隆抗体2A-0336北京中杉生物技术有限公司。(3)即用型兔抗人TIMP-2单克隆抗体HC-5539北京中杉生物技术有限公司。(4)通用型免疫组化SP检测试剂盒PV-9000 北京中杉生物技术有限公司(试剂盒组成：溶液A：蛋白阻断液;溶液B：生物素化二抗;溶液C：辣根过氧化物酶标记的链霉菌抗生物素蛋白)。(5)二氨基联苯胺DAB显色试剂盒FL-6001 北京中杉生物技术有限公司(溶液A：DAB显色剂;溶液B：底物H2O2)。
　　1.3　实验方法

　　采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶(stre Ptavidin-Perosidase)来测定细胞和组织中抗原的方法即SP法。各步骤均严格按试剂盒要求，MMP-7、MMP-9选用已知的乳腺癌细胞作为阳性片对照，TIMP-2用已知的膀胱癌细胞作为阳性对照。阴性对照选用PBS缓冲液代替一抗。
　　1.4　结果判定

　　观察结果采用双盲法，由两位有经验的病理科医师同时进行。MMP-7、MMP-9、TIMP-2均以镜下上皮细胞胞浆、胞膜或间质中出现棕黄色颗粒为阳性判定标准。根据着色强度分为4级：无着色为阴性;浅黄色为弱阳性;棕黄色为阳性：棕褐色为强阳性。图像采集及定量分析采用麦克奥迪数码医学图像分析系统(Motic.Med)，在×200的高倍视野下，每张切片随机选取5个阳性视野，每个视野系统随机测定3个不同部位，提取阳性细胞数，测定光密度值，以反应染色强度。选取空白区定标，后取得3组内膜组织中MMP-7、MMP-9、TIMP-2阳性部位的平均光密度(OD)值。
　　1.5　统计学分析
　　应用SPSS17.0统计软件，计量资料以x-±s表示，两组均数间比较采用LSD检验，多组均数间比较采用One-way ANOVA分析，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2　结果

　　2.1　MMP-7、MMP-9在3组子宫内膜中的表达
　　MMP-7在置IUD后CEA组中表达的平均光密度高于正常内膜对照B、C组，差异有统计学意义(A vs B：P=0.000;A vs C：P=0.000;B vs C：P=0.227)。MMP-9在置IUD后CE A组中表达的平均光密度值高于正常内膜对照B、C组，差异有统计学意义(A vs B：P=0.000;A vs C：P=0.000;B vs C：P=0.699)。见表1。表1　3组子宫内膜中MMP-7、MMP-9的表达
　　2.2　TIMP-2在3组子宫内膜中的表达
　　TIMP-2在3组中表达的平均光密度值差异无统计学意义(AvsB：P=0.062;A vs C：P=0.167;BvsC：P=0.506)。见表2。表2　TIMP-2在3组子宫内膜中的表达
　　2.3　MMP-7、MMP-9、TIMP-2在置IUD后子宫内膜炎中表达的相关性
　　MMP-7和MMP-9在子宫内膜炎中的表达具有相关性(r=0.524，P=0.024);而MMP-7与TIMP-2、MMP-9与TIMP-2在子宫内膜炎中的表达无相关性(r=0.294与0.078，P=0.693与0.743)。
　　3　讨论

　　MMPS在正常成年人组织中维持较低水平，当发生生理和病理状态下的组织重建，如在胚胎发育、组织修复、炎性反应和肿瘤转移过程中，MMPs的表达会显著升高。有研究表明MMPS与CE有关。
　　3.1　IUD与CE

　　IUD是我国育龄女性使用多、广泛的避孕方法，约占采取避孕措施女性的51.0%[1]，占世界IUD避孕总人数的80.0%[2]。放置IUD后CE发病情况WHO的研究表明，放置IUD的前20 d患盆腔炎性疾病(PID)近7倍高于以后时间的发病危险性，20 d后维持低水平[3]。IUD的放置是否会增加PID的发生率，尚有争议。官桂玲等[4]研究表明，使用IUD患输卵管疾病60.80%，其次子宫内膜炎和月经失调。孙强等[5]报道置IUD后子宫异常出血189例中CE 61.9%;未放置IUD的子宫异常出血30例中患CE仅20.0%。本研究中637例使用不同节育器的女性中患CE的20例占3.14%，与正常人群的发生率无差别。IUD导致CE的可能机制是：IUD并发PID常与局部防御机能下降、阴道正常菌群被破坏、放置IUD时无菌技术不严格及性传播疾病等有关。熊炎等[6]研究显示：带器不规则阴道流血利于细菌、支原体、衣原体和病毒的繁殖，造成不孕、慢性盆腔痛，影响生活质量。金碧华等[7]研究认为IUD及其尾丝与盆腔炎之间存在关系，在机体防御机能下降、性生活混乱等特定条件下易引起PID，同时细菌沿着尾丝进入宫腔，粘附子宫内膜，干扰子宫内保护膜，增加子宫内膜炎的发生几率。然而放置IUD后合并CE多见的是细菌感染，厌氧菌尤其放线菌感染占重要位置。
　　3.2　MMP-7、MMP-9、TIMPs与置IUD后CE的关系
　　对于MMPs、TIMPs与置入IUD后CE之间关系的研究，目前国内外相关报道尚少。置入IUD后由于机械性压迫、含铜和激素的化学作用、自身免疫力的下降及置器时技术条件等原因，在不同程度上对CE的发生发展和转归有不同的影响和作用。Sukhikh等[8]发现CE时，子宫内膜的单核细胞、巨噬细胞(CD+14)和大颗粒淋巴细胞(CD+56)的数量增加，置IUD后CE的反应过程中，中性粒细胞被激活可产生多种炎性细胞因子及蛋白酶，可促进子宫内膜合成分泌MMPs。MMPs参与影响ECM胶原的合成(分解)的动态平衡，在细胞外基质降解过程中起主导作用。过度表达的MMPs一方面促进血管基膜的降解导致血管通透性增加和血管完整性丧失;另一方面促进炎症细胞的浸润，子宫内膜表面溃疡、出血等炎性反应，终导致子宫内膜修复不能完成，月经血量多，出血时间延长，继而感染等。本研究发现MMP-7、MMP-9在置IUD后CE中表达的平均光密度值高于正常内膜对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，同时MMP-7和MMP-9的表达具有相关性(P<0.05)。
　　TIMP-2作为一种天然基质金属蛋白酶的抑制剂，除特异性地抑制MMPs活性外，还有促进细胞生长、抗血管生成、诱导细胞凋亡等其他生理功能[9]。TIMP-2 对MMPs家族所有成员都有抑制作用，同时抑制Ⅳ型胶原的水解，Freitas等[10]研究发现，在月经期TIMP-1、TIMP-2强烈表达于子宫内膜坏死区与非坏死区之间的血管壁周围，这种表达模式表明，在这些灶状坏死区周围TIMPs起着限制MMPs对子宫内膜血管壁进一步破坏作用，提示其可能有维持血管完整，允许下一步血管生成及修复的作用。本研究中TIMP-2在置入IUD后CE组织中的表达与2组正常内膜比较差异无统计学意义(P>0.05)。炎症因子、蛋白酶及LPS均可促进或诱导子宫内膜合成MMPs，从而使MMP/TIMP的平衡失调。
　　综上所述，MMP-7、MMP-9及TIMP-2在置IUD后引发CE中具有重要作用，但确切的作用机制还有待进一步研究;各种MMPS在CE中的表达强度和活性均不同，有望从体外细胞实验、动物实验及临床实验中找出MMPS与放置IUD后子宫内膜炎的关系，为其治疗和预防开辟新途径，从根本上降低放置IUD后CE的发病率，改善女性的生殖健康状况。同时在保证IUD避孕有效性的基础上，为改进IUD的性能提供科学的理论依据。
　　【参考文献】
　　1　董琳.全国宫内节育器研究与应用学术研讨会议纪要.中国计划生育学杂志，2009,166：460-461.

　　2　Akgul B， Pfefferle R， Marcuzzi GP，et al. ex[x]pression of matrix me[x]talloproteinase (MMP)-2 ， MMP-9，MMP-13，and MT1-MMP in skin tumors of human papillomavirus type 8 transgenicmice. Exp Dermatol， 2006,15：35.

　　3　胡范芳.宫内节育器放置4年200例临床效果分析.中国基层医药，2010,17：1818.

　　4　官桂玲，梁梅英.宫内节育器取出后继发不孕病因分析及治疗.中国妇幼保健，2006,21：973-974.

　　5　孙强，宋雁.宫内节育器与子宫异常出血的关系.中国妇幼保健，2008,23：1835-1836.

　　6　熊炎，徐智慧.宫内节育器与生殖道感染研究进展.中国计划生育和妇产科，2009,1：17-20.

　　7　金碧华，吴裕浩，潘仙花.IUD尾丝与感染关系的研究.生殖与避孕 1996,16：378-382.

　　8　Sukhikh GT，Shurshalina AV，Veryasov VN.Immunomorphological characteristics of endometrium in women with chronic endometritis.Bull Exp Biol Med， 2006,141：104-106.

　　9　Goldman S，Shalev E.The role of the matrix me[x]talloproteinases in human endometrial and ovarian cycles.Eur J Obstet Gyneeol Reprod Biol,2003,111：109-121.

　　10　Freitas S，Meduri G，Le N，et al. Tissue inhibitors of me[x]talloproteinase evolution，structure and function.Bio Chim Biophys Acta,2000,1477：267-283.