血液和血液成分的细菌污染现状及对策

1　血液和血液成分细菌污染现状
　　1941年美国报导了由于输入细菌污染的血液成分而死亡的病例。之后，此类输血事件不断发生。20世纪80年代，在室温条件下保存的血小板细菌污染的报导也随之增加。尽管改善了无菌采血技术，但污染的血液成分造成的菌血症仍保持在一个固定的水平，并且时有致死的病例发生[1]。
　　输血传播HBV、HCV和HIV的比例分别为1/20万、1/6000～1/10万和1/45万～1/60万，由于检测试剂和技术的提高，输血传播疾病较血液污染的发生率明显下降。因此细菌的血液污染近来越来越引起人们的关注[2]。1995年9月25日FDA和AABB等发起在美国NIH临床中心召开了“血液成分微生物污染现状”研讨会。目的在于回顾血液成分细菌污染的原因，测定和预防[3]。FDA强调所有执业证持有者和注册登记的厂家以及输血机构都须在7d之内向FDA的检查监察部门报告与输血有关的死亡情况。FDA报告每年的死亡数字为30～50例，其中细菌污染为9例[3]。Ramsey等[4]报道了自1993年1月～1996年12月美国血液成分FDA强检报告，在960份血液中，细菌污染占0.2%。Klein等[3]指出向FDA报告的由于输注了细菌污染的血液造成死亡的数字1986年～1991年是1976年～1985年的2倍。1993年全年发病和死亡数字为179例，其中55%的死亡者与红细胞输注有关，18%与血小板输注有关，13%与血浆输注有关。
　　Currie等[5]指出，血小板在室温下保存，有利于细菌的繁殖，其细菌污染较高。Blajchman等[6]报道第1天的血小板中细菌数目不多，不易被检测出来，第3天后细菌数目增加，其污染率为0.67%。Burstain等[7]近来的研究表明血液的污染比例为1∶1000。由于血小板是5～10份混合后输注，所以病人污染机会增加至1∶100，估计每年污染的血小板致死者为150例。
　　在加拿大血小板的细菌污染比例是4.1/万～10.7/万。法国从1994年～1997年5月发生8028例输血事故，144例与细菌污染有关，涉及到红细胞的有97例，涉及到血小板的有53例，其中革兰氏阳性菌占51%，革兰氏阴性杆菌占28%，棒状杆菌占6%[3]。
　　2　血液和血液成分细菌污染的原因

　　Klein等[3]指出造成血液污染的是普通细菌。污染源包括献血者、针穿刺处的皮肤、四周环境、空气、仪器、人群以及采血过程。Schaffner[8]指出在人的表皮上有两类细菌菌落。一类为短暂的菌落，即细菌污染表皮是短时间的，这些细菌不能固定在表皮繁殖。另一类为可残留的细菌菌落，它可以牢固地寄生在细胞上或细胞间、细胞碎片和皮肤脂质之中，在那里繁殖。肘窝部位的菌落主要含有革兰氏阳性球菌，如表皮葡萄球菌菌属。个别人身上可能有棒状杆菌和一些革兰氏阴性细菌。P.charache强调微生物在血液中生长和繁殖的关键因素包括接种的数量、贮存的条件(主要指温度)和特殊生物的品种和株别。例如肺炎链球菌需要一定的接种量，而金黄色葡萄球菌少于10个时，在适宜的环境下也能生存并繁殖[3]。
　　对临床反应来说微生物的数量也是一个重要因素。如葡萄球菌在输血时达到10CFU时，受血者可以耐受，并能被患者清除。耶尔森小肠结肠炎杆菌在4℃时经过10～20d后便可迅速生长，即使细菌本身失去致病力，但是释放的内毒素，使患者受害[3]。
　　关于献血者菌血症是血液污染的原因有不同看法。Benson[9]认为近期有皮肤破损穿刺史的献血者可能存有无症状的菌血症。Goldman等[10]认为献血者患了胃肠和呼吸道感染，即使其血液培养阴性，也应当进一步收集数据，确定细菌的来源。
　　血液的细菌污染率高于临床患者的菌血症，其中原因是采血后的血中白细胞在短时间内仍有吞噬作用。Samz[11]报告22℃16h后在全血中接种的表皮葡萄球菌和埃舍利希大肠杆菌数目减少，但金黄色葡萄球菌除外。Wagner[12]报告，血液在22℃保存，延长至24h，细菌生长情况与8h时相同。
　　3　血液和血液成分细菌污染的预防

　　3.1　皮肤消毒　针穿刺部位的皮肤消毒对防止血液污染很重要。肥皂清洗不能杀 死细菌，乙醇有较强的杀菌作用。皮肤涂抹酒精至少30s后，1min为佳，待全部蒸发后才能起到大的消毒效果。碘酊制剂与洗必泰能与皮肤结合，并且有效地发挥抗菌作用[9]。对碘过敏者可用洗必泰[13]。
　　3.2　输血前的细菌检测　较理想的预防措施是在输血前检测出细菌污染。Yomtoviom通过革兰氏染色法发现5例细菌污染血液，但有1例漏检[3]。Burstain等[7]用试纸条测定浓缩血小板中的葡萄糖和pH来判定细菌污染，其敏感性和特异性分别为>95%(≥107CFU/ml)和≥98%。试纸条能检测金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、仙影拳杆菌、肺炎沙雷伯杆菌、沙雷菌属，方法快速、廉价。Wagner等[2]用肉眼观察浓缩血小板云雾旋涡的消失、细胞外pH的下降及血浆葡萄糖水平的降低。当细菌数目≥107CFU/ml时三个测定结果相似。而对阴沟肠杆菌，pH测定不敏感。近几年多用全自动细菌培养来检测血小板的细菌污染[14，15]。这种方法可在6～8h获得细菌培养结果。阳性终点的确定由血液培养瓶的压力变化、pH值变化、颜色变化、微生物荧光测定、卡路里测定而获得。在培养中加入适量的皂甙可防止假阳性结果，提高准确度[16]。其方法敏感、快捷，应用趋势不断增加，但昂贵。
　　3.3　采血和血保技术的改进　Klein等[3]指出大多数细菌污染的血液出现在采血开始的5～10ml之内。欧洲一些国家已使用美国Baxtre公司生产的特制采血装置，将初采的10ml血流入一个小血袋、弃去。Evspinasa等[18]用外周血做干细胞移植时用导管技术由肘正中静脉采血，每例均做细菌培养，减少细菌污染。Bradley等[17]将保存红细胞的温度由4℃降至0℃，减少了细菌污染。Rivera等[19]配制了一种血小板保存液，将血小板贮存在4℃不振荡，既延长了保存时间，又减少了细菌污染。
　　3.4　血液制品病原体的灭活　Lin等[20]用光化学方法，即8-甲氧基-补骨脂素，加长波紫外线照射，灭活高浓度的广谱病原体，并保持了足够的血小板体外功能。
　　参考文献
　　1，Leiby DA,Kerr KL,Campos JM,et al.A retrospective analysis of microbial contaminants in outdated randomdonor platelets from multiple sites.Transfusion，1997,37：259

　　2，Wagner SJ,Robinette　D.Evaluation of swirling pH and glucose test for the detection of bacterial contamination in platelets concentrates.Transfusion，1996,36：989

　　3，Klein HG,Dodd RY,Ness PM,et al.Curret status of microbial contamination of blood components∶summary of a conference.Transfusion，1997,37:95

　　4，Ramsey G and Sherman LA.Blood component recalls in the United States∶a　four-year analysis.Transfusion，1997,37(Suppl)： S341

　　5，Currie LM,Harpper ;JR, Allan H,et al.Inhibition of cytokine accumulation and bacterial growth during storage of platelet concentrates at 4℃ with retention of in vitro function activity.Transfusion，1997,37：18

　　6，Blajchman MA,Ali A,Lyn P,et al.Bacterial surveillance of platelet concentrates∶quantitation of bacterialload.Transfusion，1997,37(Suppl): S295

　　7，Burstain JM,Brecher ME,Workman K,et al.Repid identification of bacterially contaminated platelets using reagent strips∶glucose and pH analysis as markers of bacterial me[x]tabolism.Transfusion，1997,37:255

　　8，Schaffner W.Skin antisepsis at the donor site∶is there room for improvement?Transfusion，1997,37:249

　　9，Benson K and Leparc G.Bacterial contamination of platelet from a previously injured donor.Transfusion，1997,37∶(Suppl):S182

　　10，Goldman M,Long A,Roy G,et al.Incidence of positive bacterial cultures after donor call-back.Transfusion,1996,36：1035

　　11，Samz C,Pereira A,Vila J,et al.Grouth of bacterial in platelet concentrates obtained from whlole blood stored for 16 hours at 22℃ befor component preparation.Tarasfusion,1997,37：251

　　12，Wagner S,Moroff G,Katz A,et al.Bacterial level(BL)in components preparated from deliberatrly inoculated(DI)whole blood(WB)held for 8～24th at room temperature(RT).Transfusion,1994,34：10S,S36

　　13，Goldman M,Roy G,Frechette N,et al.Evaluation of donor skin disinfection methods.Transfusion,1997,37：309

　　14，Alvarez E,Rogge K and Lichtiger B.Baterial contamination of cellular blood components study.Transfusion,1994,34：10S,S25

　　15，Wagner SJ, Robinette D.Detection of bacterial in platelet concentrates by automated culture.Transfusion,1997,37(Suppl)：S209

　　16，Doorne H van,Adriani WPA,Ven L,et al.Saponin an inhibitory agent of carbon dioxide production by white cells∶its use in the microbiologic examination of blood components in an automated bacterial culture system.Transfusion,1998,38：1090

　　17，Bradley RM,Grander RM,Petel SK,et al.Inhibitory effect of 0℃ storage on the proliferation of yersinia enterocolitica in donated blood.Transfusion,1997,37：691

　　18，Evspinasa MTF,Fox R,Creger RJ,et al.Microbiologic contamination of peripheral blood progenitor cells colls collected for hemotopoiete cell transplantation.Transfusion,1996,36：789

　　19，Rivera J,Lozano ML,Corral J,et al.Quality assessment of platelet concentrales supplemented with second-messeger effectors.Transfusion,1999,39：135

　　20，Lin L,Dikeman R,Corten L,et al.Photochemical inactivation of pathogenic bacteria&n bsp;platelet concentrater using a novel psoralen.Transfusion,1994,34：10S,S170