两种乙肝病毒DNA 实时荧光定量检测试剂的比较

        乙型肝炎在我国是一种流行性很广的传染性疾病，定量测定HBV DNA 是乙型肝炎的诊断，抗病毒治疗药物疗效和用药指导的重要指标[1]。目前，我国有很多厂家都在生产实时荧光PCR 试剂用于定量检测HBV DNA。本院一直使用上海科华和中山达安两个厂家的HBV DNA 荧光定量试剂。本文对这两个厂家的试剂的相关性进行比较研究。

        1　资料与方法

        1.1　一般资料　72 例乙肝病毒DNA 阳性标本均来自2012年1～5月本院收治的乙型肝炎患者，乙肝病毒DNA 含量在1×102～1×109copies/mL。其中男性45人，女性27人，年龄20～52岁。同时收集20例健康体检者的血清标本，HbsAg均为阴性，其中男性10人，女性10人，年龄18～50岁。

        1.2　仪器与试剂　上海宏石医疗科技有限公司生产的SLAN实时荧光定量PCR 分析仪。高速离心机、恒温金属浴。上海科华生物工程股份有限公司生产的HBV DNA 荧光定量PCR试剂盒，批号：20111011;中山大学达安基因股份有限公司生产的HBV DNA 荧光定量PCR 试剂盒，批号：2012011。

        1.3　方法　72份HBVDNA 阳性标本和20份HBVDNA 阴性标本用科华试剂检测一次，再用达安试剂检测一次。所有操作都在经过省临检中心认证的PCR 实验室中进行，都严格按试剂盒说明书操作，两种试剂每批检测都设有空白对照、阴性质控、弱阳性质控和强阳性质控。

        1.4　统计学处理　采用SPSS18.0进行统计学分析，所有数据换算成对数值，进行独立样本狋检验和相关性分析，p<0.05为差异有统计学意义。

        2　结　　果

        2.1　两试剂对72例标本的检测结果相关性良好(r2=0.866， p<0.01。

        2.2　两种试剂对不同病毒载量的分析，科华试剂检测标本中HBV DNA 含量[(4.97±1.68)(对数值)]低于达安试剂检测值[(5.62±1.64)(对数值)]，差异有统计学意义(t=-2.337，p<0.05)。

        3　讨　　论

        实时荧光PCR 均采用荧光共振能量转移原理。也就是说，当一个荧光基团与一个荧光淬灭基团(可以淬灭前者的发射光谱)的距离邻近至一定范围时，就会发生荧光能量转移，淬灭基团会吸收荧光基团在激发光作用下的激发荧光从而使其发不出荧光。目前，国内临床诊断试剂中应用广的是以TaqMan荧光标记探针为基础的实时荧光PCR 技术[2]。由以上结果发现，科华试剂比达安试剂检测结果偏低。PCR 用于HBV DNA 定量检测时，如是使用外部标准进行定量，再加上HBVDNA 定量数值大，通常不同测定次间差异会较通常检验项目大，一般量值变化在0.5个对数数量级内均可视为没有变化[3]。科华试剂检测标本中HBV DNA 含量[(4.97±1.68)(对数值)]，低于达安试剂检测值[(5.62±1.64)(对数值)]，差异有统计学意义(t= -2.337，p<0.05)。原因可能与两试剂的核酸提取液、反应体系和扩增程序不同有关。科华试剂和达安试剂检测结果虽然有一定差异，但相关性良好(r2=0.866， p<0.01)，具有可比性。国内有人对达安试剂和罗氏试剂进行过相关性比较，结果显示两试剂相关性良好(r2 =0.792)。由此可见，科华试剂和达安试剂都能反映患者血清中HBV DNA 水平，对临床治疗有指导意义。

        参考文献

        [1] CiottiM，MarcuccilliF，GuenciT，etal.EvaluationoftheAbbottRealTimeHBVDNAassayandcomparisontotheCobasAmpliPrep/CobasTaqMan48assayin monitoringpatientswithchroniccasesofhepatitisB[J].JClin Microbiol，2008，46(4)：15171519.
 

        [2] 李金明.实时荧光PCR 技术[M].北京：人民军医出版社，2011：1617.
 

        [3] 李金明，乙型肝炎病毒血清标志物测定及结果解释的若干问题[J].中华检验医学杂志，2006，29(5)：385389.
 

        [4] 肖艳群，陈慧英，张锦锋，等实时荧光定量PCR 与PCRELISA 在乙型肝炎病毒DNA 定量检测中的应用比较[J].检验医学，2005，20(4)：319321.
 

        (收稿日期：20131220)