一、产品概述
（一）产品主要组成成分
A盒组分：内标准品、琥珀酰丙酮分析液、干血斑质控品滤纸卡、U型底耐热微孔板、粘性微孔板封套、与批次匹配的质量控制证书、微孔板条码。
B盒组分：流动相溶剂、萃取液（具体内容详见说明书）
（二）产品预期用途
试剂盒用于定量检测新生儿全血干血斑中的氨基酸、琥珀酰丙酮、游离肉碱，酰基肉碱，腺苷和溶血卵磷脂的浓度。通过对这些分析物（表1）及其相互之间的关系进行定量分析，从而有助于评估新生儿遗传代谢性疾病。
1这些分析物结构或分子量相同，无法通过串联质谱法进行区分
该产品已经临床验证的疾病与其相关的分析
（三）产品包装规格
氨基酸、游离肉碱、酰基肉碱、琥珀酰丙酮、2种腺苷以及溶血卵磷脂的测量过程包括使用含有内标准品的溶液对新生儿干血斑进行萃取并使用串联质谱(MSMS)系统进行分析。每种分析物对其相应的内标准品的响应程度与该分析物的浓度成正比。采用多反应监控模式同时对多种分析物进行数据获取，通过第一级四极杆质量分析器根据各自的质荷比对前体离子（即母离子）进行筛选，而后通过碰撞室碰撞裂解为更小的碎片离子，随后进入第二级四极杆质量分析器通过质荷比对产物离子（即子离子）进行筛选，终到达检测器得到信号。 1．主要原材料的选择产品的主要原材料包括：内标准品原料（各种非放射性同位素标记物）及干血斑质控品，均为外购方式获得。申请人选择有资质的供应商提供的原材料，根据不同原料设置相关标准，制定了各主要原材料的技术要求和质量标准并经检验合格。申请人设计了完整的企业参考品，包括线性参考品，准确度参考品、精密性参考品和灵敏度参考品。线性参考品：通过将未标记的氨基酸、酰基肉碱、琥珀酰丙酮、腺苷和溶血卵磷脂按一定量溶于50%-55%的血细胞比容的人全血配制，点斑干燥而成，为共6个浓度的干血片。企业准确度参考品、精密性参考品和灵敏度参考品：通过将未标记的氨基酸、酰基肉碱、琥珀酰丙酮、腺苷和溶血卵磷脂按一定量溶于50%-55%的血细胞比容的人全血配制点斑干燥而成，含低和高两个水平。干血片分为三部分，分别作为准确度参考品、精密性参考品和灵敏度参考品使用。申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，确定了佳生产工艺。试剂盒反应体系的研究中，包含了内标浓度、干粉内标浓度和复溶体积、盐酸肼的浓度、上样体积及转移体积、萃取反应的温度和反应时间、衍生化反应放置时间、萃取液及流动相成分配比、萃取工作液稳定性等。申请人通过一系列研究，终确定了佳的反应体系。该产品分析性能评估内容包括精密度、准确度、线性、灵敏度、干扰、残留、漂移等。申请人提交了有效运行的质量管理体系下生产的三批产品在适用机型QSight210MD三重四极杆质谱系统、SCIEX公司的API3200MD™三重四极杆质谱仪、ABSCIEXTripleQuad™4500MD液相色谱串联质谱检测系统、Waters™ACQUITYI-X超高效液相色谱串联质谱系统、Waters™Acquity超高效液相色谱串联质谱系统上进行的性能评估资料。1.精密度申请人采用三批次试剂盒分别进行了不同因素间的精密度研究。分别使用正常内源水平样本、医学决定水平样本和临床高值水平样本进行测试。结果显示所有分析物的CV≤25%（内源浓度样本除外）。2.正确度（回收试验）申请人采用三批次试剂盒进行测试。采用回收实验方法进行正确度的评价。结果表明：分析物的回收率结果在可接受范围内（80%-120%）。3.线性申请人采用三批次试剂盒进行测试。使用正常人血作为基质，添加分析物以覆盖临床高值浓度的水平，梯度稀释后得到12个水平的线性样本，建立线性范围，所有分析物的线性回归系数R不低于0.9900。使用企业线性参考品进行测试，所有分析物的线性回归系数R不低于0.9900。4.灵敏度申请人采用三批次试剂盒，通过检测系列稀释的内标准品的浓度来模拟进行研究检测限。将内标准品工作液进行17个连续稀释，得到18个浓度的内标准品溶液，对高低质控品进行萃取并进行混合。对连续4个浓度内标准品萃取结果的线性和精密度进行计算。当线性R不低于0.99且CV不高于25%时，血样中低内标的理论浓度即为对应分析物的灵敏度。所有质控品分析物功能灵敏度均不高于各分析物的典型内源浓度水平。5.干扰申请人对潜在的内源性干扰物质以及外源干扰物在不同浓度下，比较干扰物添加前后内源水平DBS和医学决定水平DBS中各分析物浓度的偏差。结果表明：胆红素(0.15g/L)，甘油三酯(10g/L)，血红蛋白(220g/L)，骨化二醇(250nmol/L)，对乙酰氨基酚(55mg/L)，L-谷氨酸(3000μmol/L)，肌氨酸(125μmol/L)，肌酸(6000μmol/L)，L-天冬酰胺(1500μmol/L)，L-赖氨酸(2000μmol/L)，L-蛋氨酸砜(500μmol/L)，白蛋白(30g/L)，利多卡因(38.4μmol/L)，D617(2.23μmol/L)，L-鸟氨酸(375μmol/L)，亚胺甲基谷氨酸(37.1μmol/L)，O-乙酰基-L-丝氨酸(1000μmol/L)，2,5-二羟基苯甲酸(127μmol/L)，普萘洛尔(7.74μmol/L)，4-氨酰安替比林(500μmol/L)，牛磺石胆酸(30.5μmol/L)，DL-羟基丁二酸(3000μmol/L)，6-氨基乙酸(6.07μmol/L)，葡萄糖酸氯己定(0.04%)等在其验证大浓度条件下对试剂盒分析物的检测不产生影响。试剂盒可满足常规检测的要求。6.残留申请人采用企业线性参考品进行研究，考察高浓度样本残留对内源样本检测的影响。结果表明除Val,Asa有残留影响外，其余分析物对应的偏差均在±1SD范围内。Val和Asa的影响程度在临床实际使用中，并不会影响对测试结果的判断。申请人采用连续运行10块测试板考察检测方法结果的稳定性。结果表明：内源浓度样本（除SA和Asa外）、阳性判断值附近浓度样本和高值样本的各个总CV均在25%以内。首、末板之间的漂移不会影响试剂盒的功能性检测。申请人使用本产品对2075例临床样本进行检测，以0.5%-99.5%为基础，建立参考范围。其中部分疾病根据已有资料或文献，对分析物下限或上限进行了调整（如C0,ADO等）。同时，将本试剂盒检测结果与临床诊断结果进行了比较，验证了试剂阳性判断值设定的合理性。在实际的临床应用中，除了分析物本身的浓度值外，不同分析物的比例值在某些情况下也具有一定的参考意义。对这些比例值，按百分位0.5%-99.5%统计了参考范围，可用于辅助判断或分析。申请人对该产品的实时稳定性、运输稳定性、开封稳定性以及样本稳定性进行研究，确定了在各种条件下该产品及样本的有效保存时间。实时稳定性：选取三批试剂盒置于规定的储存环境中，A盒在2-8°C条件下储存，B盒在2-30°C条件下储存，分别于0、3、6、9和13个月时，对试剂盒准确度、重复性、线性、灵敏度进行考察。确定产品在规定的储存条件下，有效期为12个月。此外，申请人对产品的运输稳定性、开封稳定性等分别进行了研究。结果显示，产品的性能均满足产品说明书的声称。申请人在浙江大学医学院附属儿童医院、上海市儿童医院、上海交通大学医学院附属新华医院、济南市妇幼保健院共4家临床试验机构完成了临床试验。临床试验主要包括两部分内容：第一部分，采用试验用体外诊断试剂与临床诊断结果进行比较研究，评价本产品的灵敏度、特异度、阴性预测值等指标。临床试验前瞻性入组的21082例干血斑样本中，检出并经临床确诊阳性的疾病包括有苯丙酮尿症（PKU）、原发性肉碱缺乏症（PCD）、甲基丙二酸血症（MMA）等。临床试验结果显示，对样本的检测结果以疾病的首要指标按照说明书参考范围判读分析，试验用体外诊断试剂针对氨基酸（AA）代谢病的检测灵敏度为100.00%，特异度为95.36%，假阳性率为4.64%，假阴性率为0，阳性似然比为21.54，阴性似然比为0，阳性预测值为0.51%，阴性预测值为100.00%；对脂肪酸氧化（FAO）代谢病的检测灵敏度为100.00%，特异度为97.69%，假阳性率为2.31%，假阴性率为0，阳性似然比为43.35，阴性似然比为0，阳性预测值为1.03%，阴性预测值为100.00%；对有机酸（OA）代谢病的检测灵敏度为100.00%，特异度为96.89%，假阳性率为3.11%，假阴性率为0，阳性似然比为32.17，阴性似然比为0，阳性预测值为1.22%，阴性预测值为100.00%。对样本的检测结果以临床应用结合次要指标判读分析，试验用体外诊断试剂对氨基酸（AA）代谢病的检测灵敏度为100.00%，特异度为98.93%，假阳性率为1.07%，假阴性率为0，阳性似然比为93.08，阴性似然比为0，阳性预测值为2.18%，阴性预测值为100.00%；对脂肪酸氧化（FAO）代谢病的检测灵敏度为100.00%，特异度为99.62%，假阳性率为0.38%，假阴性率为0，阳性似然比为263.94，阴性似然比为0，阳性预测值为5.95%，阴性预测值为100.00%；对有机酸（OA）代谢病的检测灵敏度为100.00%，特异度为99.50%，假阳性率为0.50%，假阴性率为0，阳性似然比为200.46，阴性似然比为0，阳性预测值为7.14%，阴性预测值为100.00%。临床试验回顾性入组的226例干血斑样本中，临床确诊阳性的疾病包括有高苯丙氨酸血症（HPA）、苯丙酮尿症（PKU）、四氢生物蝶呤缺乏症（BH4D）、精氨酰琥珀酸尿症（ASA）、瓜氨酸血症Ⅰ型（CITI）、希特林蛋白缺乏症（新生儿肝内胆汁淤积症/瓜氨酸血症Ⅱ型）（CITRIN（NICCD/CITⅡ））、高甲硫氨酸血症（MET）、枫糖尿病（MSUD）、鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症（OTCD）、酪氨酸血症Ⅰ型（TYRI）、酪氨酸血症II型（TYRII）、酪氨酸血症Ⅲ型（TYRIII）、精氨酸血症（ARG）、同型半胱氨酸血症（HCY）、高脯氨酸血症（PRO）、氨甲酰磷酸合成酶1缺乏症（CPS1）、原发性肉碱缺乏症（PCD）、短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（SCAD）、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（MCAD）、极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（VLCAD）、肉碱棕榈酰转移酶I缺乏症（CPT-I）、多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（GAII）、三功能蛋白缺乏症（TFP）、甲基丙二酸血症（MMA）、甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症（MMA合并HCY）、丙酸血症（PA）、异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症（IBG）、异戊酸血症（IVA）、戊二酸血症I型（GAI）、3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症（MCCD）、β酮基硫解酶缺乏症（βKT）、2-甲基丁酰辅酶A水解酶缺乏症（2MBG）、3-羟基-3-甲基戊二酸血症（HMG）、全羧化酶合成酶缺乏症（MCD）、腺苷脱氨酶缺陷重症联合免疫缺陷（ADA-SCID）、X-连锁肾上腺脑白质营养不良（X-ALD）。回顾性试验结果显示，试验用体外诊断试剂对氨基酸（AA）代谢病、脂肪酸氧化（FAO）代谢病、有机酸（OA）代谢病、嘌呤代谢病ADA-SCID、过氧化物酶体病X-ALD的检测灵敏度均为100.00%。第二部分，采用试验用体外诊断试剂与已上市同类产品进行对比试验，验证本产品的临床准确性。该部分临床试验共入组2143例干血斑样本，临床试验结果显示，对样本的检测结果以疾病的首要指标按申报产品与对比试剂各自参考范围判读分析，试验用体外诊断试剂与对比试剂针对氨基酸（AA）代谢病检测的阳性符合率为78.87%，阴性符合率为95.46%，总符合率为94.91%；对脂肪酸氧化（FAO）代谢病检测的阳性符合率为95.56%，阴性符合率为97.28%，总符合率为97.25%；对有机酸（OA）代谢病检测的阳性符合率为96.43%，阴性符合率为97.13%，总符合率为97.11%。进一步分析试验用体外诊断试剂与对比试剂针对氨基酸（AA）代谢病检测的阳性符合率较低的原因，主要是由于两者使用不同的参考范围各自产生不同的假阳性结果，从而导致比较差异。继续对样本的检测结果以临床应用结合次要指标判读分析，试验用体外诊断试剂与对比试剂针对氨基酸（AA）代谢病检测的阳性符合率为95.00%，阴性符合率为99.00%，总符合率为98.93%；对脂肪酸氧化（FAO）代谢病检测的阳性符合率为94.29%，阴性符合率为99.67%，总符合率为99.58%；对有机酸（OA）代谢病检测的阳性符合率为91.30%，阴性符合率为99.62%，总符合率为99.44%。对两种方法检测结果进行线性回归分析，结果显示，对于疾病判读应用的主要分析物如Phe、C3、C0等分析物，相关系数R均＞0.95，表明两种试剂盒相关性较好。除对不同疾病类型进行分析外，还对每一种疾病和每一种分析物（分析物比值）分别进行了统计分析，结果显示，试验用体外诊断试剂各待测分析物（分析物比值）指标异常情况都通过相应的遗传代谢病得到验证，各分析物（分析物比值）统计得到的阴性预测值均为100.00%。同时，其余相关性能指标也都符合临床应用要求。综上所述，该产品临床试验资料对产品的临床性能进行了全面研究，临床试验结果基本符合临床应用要求。 该试剂盒用于定量检测新生儿全血干血斑中的氨基酸、琥珀酰丙酮、游离肉碱，酰基肉碱，腺苷和溶血卵磷脂的浓度。可同时对几十种疾病进行分析，包括氨基酸(AA)代谢病、脂肪酸氧化(FAO)代谢病、有机酸(OA)代谢病、嘌呤代谢病和过氧化物酶体病，其中嘌呤代谢病和过氧化物酶体病这两类疾病通过干血斑质谱法检测在国内尚无同类产品。该产品临床应用的主要受益在于：在新生儿早期提示风险，使患者能及时诊断和治疗，从而受益。经临床评价分析，本产品的临床灵敏度和特异度可满足临床检验要求。参照“YY/T 0316-2016医疗器械风险管理对医疗器械的应用”标准，对该产品进行风险分析。该产品主要的风险来自于检测存在的假阳性和假阴性情况。假阳性风险会导致被检测者需要进行复查复测，并可能需要通过基因检测进一步确认或排除。这会对被检测者产生一定的经济和时间影响。假阴性风险会导致患者未及时治疗，可能会导致患者生长发育受影响。从已有结果分析，鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症因其X-连锁的特性，该产品在女性患者中无法检出指标物异常，有较大的漏检风险。除上述外，产品已知的检测局限性包括：对于Asa极高浓度的样本，可能会对下一个测试产生残留；Asa和Sa的回收率较低，测试值不能代表其精确浓度。此外，检测结果会受到如下条件的影响，包括：样品点并未被血均匀浸透，打冲样本时采样点太靠近血斑的边缘，样本收集或晾干过程中处置不当，样本受热受潮或降解，血斑滤纸受排泄物污染。使用者必须了解检测过程中可能存在的潜在风险及检测的局限性。根据申请人提供的申报资料，经综合评价，在目前认知水平上，认为该产品能够较大程度地满足医疗需求，预期为适用人群带来的受益大于风险。为确保使用安全，基于对主要剩余风险的防控，在产品说明书中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。本申报项目为境内第三类医疗器械产品注册，属于优先审批项目（编号：20190009）。申请人的注册申报资料符合现行要求，依据《医疗器械监督管理条例》（国务院令第680号）、《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令2014年第5号）等相关医疗器械法规与配套规章，经系统评价后，建议准予注册。延续注册时补充提交至少十家临床机构、至少十万例新生儿新鲜干血斑样本的前瞻性临床试验资料，可不设对照组，但应由临床机构对诊断结果进行确认。对于本次新增的两种疾病（X-连锁肾上腺脑白质营养不良和腺苷脱氨酶缺陷重症联合免疫缺陷），应前瞻性的检出真阳性病例。在延续注册时，注册人应依据上市后的临床使用数据进一步修订说明书临床性能相关内容。
