1年生黄芪中黄芪多糖对小鼠免疫器官指数的影响

【摘要】  探讨一年生黄芪中黄芪多糖对小鼠免疫器官指数的影响. ［方法］ 取1年生黄芪经水提取后，用质量浓度为500，600，800mL/L乙醇分别进行沉淀，获得相应乙醇沉淀提取的黄芪多糖.采用硫酸-苯酚法分别测定各质量浓度乙醇提取的黄芪多糖中多糖含量，每日分别腹腔注射给予小鼠200mg/kg不同质量浓度乙醇提取的黄芪多糖10d，实验第7日开始每日分别腹腔注射给予各组小鼠环磷酰胺80mg/kg，连续4d，处死小鼠，测定脾脏及胸腺指数. ［结果］ 500，600，800mL/L乙醇提取的黄芪多糖中多糖含量分别为530.7，407.6，463.8g/kg.500，600，800mL/L乙醇提取的黄芪多糖组小鼠脾脏指数均显著高于环磷酰胺组;500mL/L乙醇提取黄芪多糖组小鼠胸腺指数显著高于环磷酰胺组. ［结论］ 1年生黄芪中的黄芪多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下有拮抗作用.

【关键词】  免疫系统;植物，药用;小鼠

　　研究表明，多糖的活性与相对分子质量有一定关系，不同的多糖所产生的生物活性均有佳相对分子质量范围 ［1］ ，不同年生黄芪中黄芪多糖分子质量的范围亦有差别 ［2］ ，而相同黄芪不同质量浓度乙醇沉淀物中的多糖分子质量范围亦不相同 ［3］ .本研究检测了1年生栽植黄芪经乙醇提取的黄芪多糖中多糖的含量，并探讨了对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的影响，为进一步评估1年生黄芪的药用价值和合理提取黄芪多糖提供实验依据.
    
　　1 材料与方法
   
　　1.1 材料  实验动物取昆明种小鼠，雌性，体重为（22±2）g，由延边大学医学部实验动物科提供.1年生栽植黄芪于2003年10月末采集于吉林省和龙市，由延边大学药学院生药学教研部吕惠子副教授鉴定为膜荚黄芪（Astragalus membraneaceus Fisch.）;环磷酰胺为江苏恒瑞医药股份有限公司产品;其他试剂均为分析纯.
    
　　1.2 方法
   
　　1.2.1 黄芪多糖的提取  取1年生栽植黄芪500g，分别加入10，8，6倍量的水，80℃温水浸泡2h，共3次，过滤，将提取液浓缩至约500mL，加入乙醇调整乙醇质量浓度，使其分别达到500，600，800mL/L，进行分级沉淀，吸弃上清液，滤过取沉淀物，分别用无水乙醇及丙酮洗涤，60℃干燥，称取质量，分别得到500（APS-500），600（APS-600），800mL/L乙醇沉淀提取的黄芪多糖（APS-800）各15.30，25.30，6.12g.
    
　　1.2.2 黄芪多糖含量的测定  采用硫酸-苯酚法 ［4］ 测定各乙醇沉淀提取的黄芪多糖中多糖的含量，并计算干燥药材中的多糖含量（mg/g）.
    
　　1.2.3 黄芪多糖对小鼠免疫器官指数的影响  取50只小鼠随机分为5个组，即APS-500组、APS-600组、APS-800组、环磷酰胺组及生理盐水组，每组各为10只，每日分别腹腔注射给予前3组小鼠相应的 黄芪多糖200mg/kg，后2组小鼠等量生理盐水，连续10d.实验第7日开始每日分别腹腔注射给予除生理盐水组外其他各组小鼠环磷酰胺80mg/kg，连续4d，称取体重，脱颈椎处死，分离脾脏和胸腺并称取质量，按每克体重（gBW）换算成质量指数.实验数据以均数±标准偏差（x±SD）表示，两样本均数比较采用t检验进行统计学处理.
    
　　2 结果
   
　　2.1 乙醇提取多糖及药材中多糖含量  1年生黄芪经500，600，800mL/L乙醇沉淀提取的黄芪多糖中多糖含量分别为530.7，407.6，463.8g/kg，其中APS-500乙醇提取组的多糖含量为高.APS-500组、APS-600组及APS-800组干燥药材中多糖含量分别为16.31，20.62，5.68mg/g.
    
　　2.2 对小鼠免疫器官指数的影响  1年生黄芪经500，600，800mL/L乙醇分别提取的黄芪多糖对经环磷酰胺处理后小鼠免疫器官质量指数的影响见表1.由表1可见，APS-500组、APS-600组及APS-800组小鼠的脾脏指数明显高于环磷酰胺组，相比较均具有显著性差异（P<0.01，P<0.05）;APS-500组小鼠的胸腺指数明显高于环磷酰胺组，相比较亦具有显著性差异（P<0.05）.
    
　　表1 黄芪多糖对经环磷酰胺处理后小鼠免疫器官质量指数的影响 （略）
        
　　3 讨论
    
　　1年生栽植黄芪经不同质量浓度乙醇沉淀可提取一定含量的黄芪多糖，其中APS-500组中的含量为高.曾采用葡聚糖凝胶柱初步测定了3种不同质量浓度乙醇沉淀物中多糖的分子质量，结果见乙醇质量浓度越低多糖分子质量越高，即多糖分子质量范围由大到小依次为APS-500组、APS-600组、APS-800组.脾脏指数和胸腺指数是反映机体免疫功能的指标.环磷酰胺是免疫抑制剂，主要用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病及器官移植反应等，疗效明确，但副作用较大，主要不良反应为抑制机体免疫功能和造血系统 ［5］ .本实验结果表明，给予小鼠1年生黄芪中的黄芪多糖，可明显提高经环磷酰胺处理后小鼠的脾脏及胸腺指数，并提示不同质量浓度乙醇提取的黄芪多糖均对环磷酰胺所致机体免疫功能低下有拮抗作用，且分子质量较大的ASP-500组的作 用明显.

【参考文献】
  ［1］ 高小荣，刘培勋.多糖构效关系研究进展［J］. 中草药 ，2004，35（3）:229.

　　［2］ 张善玉，朴惠顺，宋成岩.不同生长年限黄芪中总皂苷、黄芪甲苷、总黄酮及多糖含量比较［J］. 延边大学医学学报， 2005，28（2）:87.

　　［3］ 张善玉，康东周，朴惠善.不同生长年限栽植黄芪多糖的含量、分子量及人外周血T细胞增殖的影响［J］. 中草药 ，2006，37（8）:1144.

　　［4］ 马立，马琼，何永利，等.灵芝、香菇、黄芪、枸杞提取物中多糖的含量测定［J］. 中草药 ，2004，35（2）:167.

　　［5］ 张艳，梁华平.黄芪多糖对烧伤小鼠细胞免疫功能的作用及机理探讨［J］. 中国实验临床免疫学杂志 ，1995，7（2）:41.

作者：安松兰

作者单位：延边大学药学院:吉林延吉133000