P16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

李小钢　付静　赵克熹　史春祥
　　【摘要】　目的　探讨P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及临床意义。方法　采用SP免疫组化方法测定P16蛋白在64例NSCLC及癌旁1～2cm组织中的表达。结果　P16蛋白的阳性表达主要位于细胞胞浆，部分同时出现于胞核。P16蛋白在NSCLC中的表达率为40.6%，在癌旁组织中的表达率为74.4%，与NSCLC的分化程度及患者术后生存期有关(P＜0.05)，而与组织学类型及有无局部淋巴结转移无明显关系(P＞0.05)。结论　P16蛋白表达缺失可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标。 　　

【关键词】　非小细胞肺癌　　P16蛋白　　免疫组化

The ex[x]pression of P16 protein in non-small cell lung cancer and its clinical significance

Li Xiaogang　Fu Jing　Zhao kexi
（Department of Thoracic Surgery,Haidian Hospital,Beijing 100080）
【Abstract】　ob[x]jective　To elucidate the ex[x]pression of P16 in non-small cell lung cancer (NSCLC) and the tissue adjacent to carcinoma and its clinical significance.Methods　Streotavidin perxidase immunohistochemical staining method was used to examine the ex[x]pression of P16 in 64 NSCLC and the tissue adjacent tocarcinoma.Results　The ex[x]pression of P16 protein was mainly located in cytoplasmin.The positive rate of P16 protein in NSCLC was 40.6%,much lower than 74.4% in the tissue adjacent carcinoma.The positive rate of P16 protein was related to the degree of differentiation and prognosis (P＜0.05),but it not correlate with lymph node me[x]tastasis and histologic type (P＞0.05).Conclusions　The absence of P16 protein ex[x]pression may be con-sidered as a parameter for judging the degree of differentiation of NSCLC and clinical prognosis.
　　【Key words】　NSCLC　　P16 protein　　Immunohistochemistry

　　P16基因是近年来发现的一种新的肿瘤抑制基因，其与肿瘤发生的关系在已有的多种肿瘤的研究中已得到证实。我们用SP免疫组化方法，探讨P16基因编码的P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及其临床意义。
材料与方法
　　1.收集本院及中日友好医院病理科1992年7月至1998年8月手术切除之肺癌标本，经病理证实为原发性非小细胞肺癌，其中鳞癌41例，腺癌17例，腺鳞癌6例。 　　

　　2.方法：免疫组化采用SP方法，P16单克隆抗体和SP试剂盒均为北京中山生物技术公司提供的ZYMED公司产品。P16抗体稀释度为1∶100，切片经0.4%胃酶消化及枸橼酸盐缓冲液抗原修复后，按SP法染色。 　　

　　3.结果判断：以细胞出现明显棕色为阳性，阳性细胞＜25%为(-)，阳性细胞＞25%为(+)。 　　

　　4.统计学处理：采用χ2检验。
结　　果
　　1.P16蛋白的表达：阳性物质主要定位于胞浆，部分出现于胞核。 　　2.P16蛋白在NSCLC中的表达，见表1。
表1　P16蛋白在NSCLC中的表达(例)

 

组织学类型 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
腺　癌 17 　8 　9 47.1
鳞　癌 41 15 26 36.7
腺鳞癌 　6 　3 　3 50.0
合　计 64 26 38 40.6

　　　　P＞0.05
　　64例NSCLC中，P16蛋白的阳性表达率为40.6%，各组织学类型间无显著性差异(P＞0.05)。 　　3.癌旁1～2cm处支气管腺体及粘膜上皮细胞P16蛋白表达率为74.4%(32/43)，明显高于P16蛋白在NSCLC中的表达。 　　4.P16蛋白的表达与NSCLC分化程度的关系，见表2。 表2　P16蛋白的表达与NSCLC组织学 分级的关系(例)

 

组织学分级 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
高分化 16 10 　6 62.5
中分化 24 11 13 45.8
低分化 24 　5 19 20.8
合　计 64 26 38 40.6

　　　　P＜0.05
　　P16蛋白的表达随NSCLC分化程度的降低而降低，有显著性差异(P＜0.05)。 　　5.P16蛋白的表达与NSCLC患者术后生存期的关系，见表3。 　　64例NSCLC中有3年以上随访资料的有33例，如表3显示，P16蛋白的表达与肺癌患者术后生存期呈正相关，术后生存期长的患者中，P16蛋白阳性表达高(P＜0.05)。 　　6.P16蛋白的表达与NSCLC淋巴结转移的关系，见表4。 表3　P16蛋白表达与NSCLC患者术后 生存期的关系(例)

 

术后生存期 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
＜1年 　5 　0 　5 0
1～3年 16 　5 11 32.2
＞3年 12 　9 　3 75.4
合　计 33 14 19 42.4

　　　　P＜0.05
表4　P16蛋白的表达与NSCLC局部淋巴结
转移情况的关系(例)

 

淋巴结情况 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
有淋巴结转移 25 11 14 44.0
无淋巴经转移 26 　9 17 34.6
合　计 51 20 31 39.2

　　　　P＞0.05
　　64例NSCLC中，资料提示了淋巴结情况的有51例，表4提示肺癌组织P16蛋白的表达与局部淋巴结转移间无显著相关性(P＞0.05)。
讨　　论
　　P16基因于1993年由Serrano等［1］发现并被克隆成功，它编码的P16蛋白可以与CDK4/Cyclin D复合物竞争性结合，从而抑制CDK4/Cyclin D复合物的活性，阻止细胞周期从G1期向S期过渡，在正常细胞周期中起负反馈调节作用。当P16基因突变或丢失时，P16蛋白的合成发生障碍，能引起细胞生长失控，导致癌变［2，3］。 　　肺癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率都很高。NSCLC占全部肺癌的75%～90%。以往的研究表明，P16基因的突变和丢失在NSCLC的形成及进展中起着较重要的作用，但不是早发事件［4］。我们应用免疫组化SP方法研究了P16蛋白在人原发性NSCLC及癌旁1～2cm肺组织的表达，并分析其与临床病理相关性，结果表明：P16蛋白表达率在NSCLC中明显低于癌旁组织，且与NSCLC的分化程度呈正相关，此结论与国内同类报道相符(P＜0.05)［5～7］；NSCLC各组织学类型间P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P＞0.05)；伴或不伴局部淋巴结转移的NSCLC P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P＞0.05)；在NSCLC预后方面，我们的研究显示：P16蛋白的表达率与NSCLC患者的术后生存期显著相关，术后生存3年以上的患者组肺癌组织中P16蛋白的阳性表达率明显高于1～3年和1年以下患者组，三组间有显著性差异(P＜0.05)。 　　综上所述，本研究提示：①P16蛋白主要定位于细胞的胞浆，部分同时出现于胞核；②P16蛋白表达缺失与NSCLC的发生及细胞分化不良有关；与NSCLC患者术后生存期有关，可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标；③P16蛋白的表达缺失与NSCLC的组织学类型及有无局部淋巴结转移关系不明显。
李小钢（北京市海淀医院胸外科　邮政编码 100080） 付静（北京市海淀医院病理科　邮政编码 100080） 赵克熹（北京市海淀医院胸外科　邮政编码 100080） 史春祥（北京市海淀医院病理科　邮政编码 100080）
参　考　文　献
1，Serrano M,Hunnon GJ,Beach DA.A how regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of Cyclin D/CDK4.Nature,1993,366:704.
2，赵温利，郭卫星，田志刚.肿瘤抑制基因P16的研究进展.国外医学肿瘤学分册，1997，24：199.
3，温桂兰，范希光，饶纬华.肿瘤抑制基因CDKN2与肺癌.中华结核与呼吸杂志，1998，21：198.
4，李伟峰，赵　彤.P16基因与肺癌.国外医学呼吸系统分册，1997，17：5.
5，战雪梅，孙崇伟，王国新，等.肺癌P16蛋白表达及临床意义.诊断病理学杂志，1998，5：89.
6，张尚福，张　声，李　羽，等.肺癌中P16蛋白表达的意义.中华肿瘤杂志，1997，19：259.
7，姜彦多，夏书月，戴晓淳，等.肺癌CDKN2基因产物表达的研究.中华结核和呼吸杂志，1996，19：81.