EDTA-K2抗凝剂引起血小板减少的结果探讨

　　作者：蔡早育,戴伟良　 作者单位： 广东省佛山市人民医院检验科,广东佛山,528000

　　【摘要】目的　探讨 EDTA 盐作为抗凝剂的抗凝血在全自动血液分析仪检测时发生血小板假性减少的原因。方法 使用 EDTA 盐和肝素锂作为抗凝剂的抗凝血和手工采指血 20μL，同时制作血涂片一张，通过人工镜检对照。结果 通过对3种方法对血小板测定结果对比分析。结论 EDTA抗凝剂引起血小板聚集，造成血小板计数假性减少。
　　【关键词】乙二胺四乙酸二钾,血小板假性减少
　　在血细胞计数仪问世以后,检测各种血细胞参数快速、准确，给临床疾病的诊断及治疗提供了有诊断价值的数据。乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)作为国际血液学标准化委员会认定的对血细胞影响较小的血液抗凝剂,在临床检验工作中被广泛应用。但乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)作为抗凝剂的抗凝血全自动血液分析仪上检测时引起血小板假性减少的现象[1-2]，在临床上少见，如果不能及时诊断和鉴别血小板减少是否乙二胺四乙酸二钾有关，会导致临床医师为诊断明确疾病而给患者增加其他检查，甚至导致患者的误诊误治。因此，探讨EDTA-K2抗凝剂对假性血小板减少的影响并探讨其解决方法，有着极其重要的意义，为此，笔者对2008年1月～2011年9月在我科遇见的30例乙二胺四乙酸二钾引起血小板假性减少的病例进行分析，先将结果总结如下。
　　1 材料与方法
　　1.1 血液来源
　　所有血液标本均来自于我院住院及门诊病人，其中5份血液样本来自糖尿病患者，6份血液样本来自高血压患者，6份血液样本来自脑梗死患者，4份血液样本来自高脂血症患者，4份血液样本来自慢性肾炎患者，5血液样本来自肝炎患者。共30例，其中男性21例，女性9例，所有患者均无紫癜和出血倾向。
　　1.2 仪器和试剂
　　检测仪器采用Sysmex公司出产的型号为XE2100全自动血细胞分析仪及原厂配套试剂;德国ZEISS显微镜;EDTA-K2抗凝管,肝素锂抗凝管均由美国BD公司提供。
　　1.3 仪器法
　　分别将抽取的静脉血2ML置于EDTA-K2和肝素锂抗凝管，用SysmexXE2100血细胞分析仪测定血小板3次，结果取均值。
　　1.4 手工法
　　采集患者新鲜指血20μL，稀释后按《全国临床检验操作规程》第3版由我科3位检验人员进行计数，结果取血小板均值。
　　1.5 瑞氏染色

　　分别将新鲜指血、EDTA-K2和肝素锂抗凝血制作成血涂片，每种血液均制作血涂片1张，做瑞氏染色，在显微镜下镜检观察。
　　2 结果

　　2.1 EDTA盐和肝素锂抗凝血和手工采指血血小板结果比较 见表1、2。
　　制作的血涂片经瑞氏染色后镜检观察发现，EDTA盐血涂片中可见大量血小板聚集，肝素锂作为抗凝剂的血涂片和手工采指血的血涂片中血小板散在分布。
　　3 讨论

　　以上30例患者中，使用SysmexXE2100血细胞分析仪测定EDTA盐作为抗凝剂的抗凝血显示血小板显著减少，再用该血液样本制作血涂片在显微镜下观察见血小板聚集现象非常严重，而使用SysmexXE2100血细胞分析仪测定用肝素锂作为抗凝剂的抗凝血显示血小板数正常，同时手工采指血计数血小板数也正常，所有患者均无紫癜和出血倾向，血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)均在参考值范围之内，这提示：EDTA盐作为抗凝剂的抗凝血可出现假性血小板减少。
　　EDTA-K2常被作为静脉血液样本进行血常规测定的适宜抗凝剂, EDTA盐作为抗凝剂其原理是EDTA盐与血液中的凝血因子IV(钙离子)结合成螯合物，而使得其失去凝血作用，阻止静脉血液凝固，故对血细胞形态影响很小，适用于全血细胞分析，但它偶尔会导致血小板聚集，从而引起血小板假性减少[3]。到目前为止,EDTA盐作为抗凝剂引起血小板计数假性减少的发病机制并不是很清楚，可能与患者的基因或者染色体异常遗传有关，也可能由于患者血浆中存在血小板抗体或者自身抗体有关，此现象并没有病理和生理意义。但是也有可能与EDTA导致患者血液中的血小板活化，因而改变血小板膜表面某种隐匿性抗原构象，与血浆中的自身抗体结合，从而激活PLA、AA、PLC、ADP及5-HT等活性物质，而这些被激活的活性物质又能活化血小板纤维蛋白原受体，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团，出现血小板大量聚集现象。这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同时，这种与血小板结合的自身抗体的Fc端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象。另外，血小板聚集呈卫星现象也与血液样本所在环境的室内温度有关，环境的室内温度越低，卫星现象越严重[4-5]。
　　综上所述，对于血液样本检测结果中血小板<50×109/L红细胞和白细胞数量基本正常，血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)均在参考值范围之内，对于这类患者，我们应及时和临床医师进行沟通，了解患者的全身情况，在患者均无紫癜和出血倾向的情况下，及时制作血涂片进行染色，观察患者血液中血小板是否有聚集现象，同时进行手工计数，避免因使用EDTA盐作为抗凝剂造成血小板假性减少，从而采取过多的检查和治疗针对血小板减少，浪费大量的人力、物力，导致误诊误治，甚至延误患者的治疗。
　　血小板计数变化在血栓与出血性疾病的诊断与治疗中有着重要的作用,在临床检验工作中，我们发现 SysmexXE2100血细胞分析仪大多数情况下会提示抗凝剂所致血小板假性减少病例,但也有极少数情况下SysmexXE2100血细胞分析仪不提示血小板聚集现象。因此，在临床检验科工作中，对于检测血小板减低的血液样本均应认真分析其血小板直方图,看有无拟合曲线、翘尾现象或血小板聚集警告提示,并制作血涂片染色进行显微镜下观察, 看有无血小板聚集成堆现象或血小板卫星现象,并再次采集患者血液样本对检测项目进行复查, 以免导致临床误诊误治,给患者及家属带来巨大的精神压力和痛苦。
　　【参考文献】
　　[1] 刘春生,柳发虎,浦春,杨淳,张桂花.不同抗凝剂对血小板检测结果的影响.检验医学与临床,2011,8(8):899-890.

　　[2] 刘振玲.6例EDTA-K2致假性血小板减少实验分析.医学理论与实践,2011, 24(9):1062-1063.

　　[3] 卢晓燕,赵利鹏,徐萍. EDTA抗凝剂引起血小板计数假性减少的原因探讨.中国医药指南,2010,8(34):272-273.

　　[4] 肖传宇,侯文华. EDTA-K2抗凝剂引起血小板假性减少分析.实用医学杂志,25(21): 3690-3691.

　　[5] 王平,周金,岳秀玲,王苏平,吴静. EDTA 抗凝剂导致的血小板减少分析.中国误诊学杂志,2010,10(31):7665.