动物源性食品中β-受体激动剂残留检测分析方法

         一、背景 
         β-受体激动剂(β-肾上腺素兴奋剂),主要用于治疗人、畜支气管哮喘和支气管痉挛。 在用于畜牧饲 喂时意外发现有促进动物生长,减少脂肪沉积,提高瘦肉率的作用。但由于β-受体激动剂会在动物组织中残 留,长期食用含β-受体激动剂残留的食物可能会引起中毒,并对健康造成极大的伤害。目前,我国禁止在食 品动物的饲养中饲喂克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺和特布他林等β-受体激动剂。 
         目前,动物源性食品中β-受体激动剂的检测方法主要有酶联免疫分析法、HPLC法及GC/MS联用分析 法。酶联免疫分析法虽灵敏度比较高,但存在较大的假阳性风险,仅作为粗筛方法。HPLC法灵敏度较低且易 受样品中其他组分的干扰,而GC/MS法灵敏度相对较低,一般先进行浓缩净化处理,然后衍生化,操作不够 快速简便。 液相色谱串联四极杆质谱法目前已成为兽药残留分析的主要检测手段。我国从2007年相继发布了两个国 家标准,《GB/T 21313-2007》和《GB/T 22286-2008》。这两个标准中都为动物源性食品中多种β-受体 激动剂残留量的测定规定了液相色谱串联质谱法。
          二、前处理方法(GB/T 22286-2008) 
         1. 酶解
         称取2g样品于50mL离心管中,加入8mL 0.2mol/L乙酸钠缓冲溶液,充分混均。加入50μL β-葡萄糖醛 甙酶 / 芳基硫酸酯酶,充分混均。37°C水浴水解12小时。 
         2. 提取
         加盖置于水平振荡器振荡15 min,以5000 r/min离心10 min。分取4 mL上清液加入0.1 mol/L高氯酸溶 液5 mL,混合均匀。以高氯酸调节pH值至1±0.3。以5000 r/min离心10 min,全部上清液转移至50 mL离 心管中。加入10 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至11。加入10 mL饱和氯化钠溶液和10 mL异丙醇-乙酸乙酯 (6+4)混合溶液,充分提取。以5000 r/min离心10 min。转移全部有机相,在40°C水浴下用氮气吹干。加 入5 mL 0.2 mol/L乙酸钠缓冲溶液,超声溶剂残渣,等待固相萃取柱净化。 
         3. 净化 
         将上述残渣溶液加入阳离子交换小柱。依次用2mL 水、2mL 2%甲酸水溶液和2mL甲醇洗涤阳离子交 换小柱,将阳离子交换小柱抽干。用2mL 5%氨水甲醇溶液洗脱阳离子交换小柱(流速控制在0.5mL/ min),收集洗脱液。 将洗脱液在40°C水浴下用氮气吹干。加入200μL 0.1%甲酸水-甲醇溶液(95+5)复溶并超声确保完全溶 解。溶液转移至1.5 mL离心管中,以15000 r/min离心10 min。上清液转移至进样小瓶,供分析。 
         三、实验方法 
         1. 液相方法

         色谱柱:Agela Venusil MP-C18 2.0 X 100mm 5 μm;
柱温:35°C;
流速:250 μL/min;
进样体积:10 μL; 流动相:A,含0.1%甲酸的5%乙腈水(V/V)溶液;B,含0.1%甲酸的95%乙腈/水(V/V)溶液; 流动相梯度洗脱条件:见下表

2.质谱方法
AB SCIEX QTRAP® 5500 离子源:Turbo VTM离子源; 扫描模式:负离子 采集模式:多反应监测MRM

         四、示例数据 
         1. 色谱图 

         2. IDA(信息相关采集)定性数据 

         猪肉基质加标0.01 ng/mL

         五、结论 
         5.1 AB SCIEX QTRAP® 5500系统完全可以满足食品中β-受体激动剂日常定量检测需求。 
         5.2 AB SCIEX QTRAP® 5500特有的IDA触发增强子离子(EPI)扫描功能,能够在极低的浓度下,一 次分析同时获得目标物的MRM数据和二级质谱全扫描图。在此基础上实现定量检测和定性确证同 时完成。