国产试剂化学发光法检测梅毒螺旋体抗体的临床评价

　　梅毒是由梅毒螺旋体(苍白螺旋体)感染引起的性传播疾病，易导致全身性损害及病变，具有高度传染性，2006年中国梅毒发病率为13.35/10万，2009年为64.41/10万，年均增长49.2%。尽管梅毒及先天性梅毒在不断增加，但至今仍不能将其在试管中培养f3]。因此梅毒在实验室诊断主要靠血清学实验和在损伤部位直接采取标本检查梅毒螺旋体。梅毒的血清学检测，根据检测抗体类型不同，主要分为两类，一类是非螺旋体的血清学检测:性病研究实验室玻片试验(VDRL)、不加热血清反应素试验(USR)、甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST)、快速血浆反应素试验(RPR)等;另一类是检测梅毒螺旋体的试验:荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、梅毒螺旋体血细胞凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体快速诊断试验(TP-RT)等。我国国内实验室目前多以ELISA作为梅毒筛查试验,TPPA作为确证实验用于临床检测。但ELISA法操作步骤繁琐，全手工影响因素多;TPPA试剂价格昂贵，结果依赖肉眼判断不易保存，在临床应用受到一定的局限。 　　

　　化学发光方法(chemicalluminescentimmunoassay,CLIA)检测因其具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、稳定性高、无放射性及毒性危害等特点，被认为是有前途的超微量免疫学检测方法，因此也越来越受到检验界的关注。但目前国内尚无用化学发光法来检测梅毒螺旋体产品。 　　

　　北京科美东雅生物技术有限公司开发生产的化学发光法检测梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒，弥补了国内的空白。 　　

本实验所有标本均经临床确认，并与市场上常见的酶联免疫分析法进行了比较，不符合的标本，以雅培梅毒诊断试剂作为第3方试剂进行验证，从而探讨该国产化学发光试剂盒是否适用于临床常规检测。 　　

　　对象与方法 　　

　　1.1对象收集卫生部北京医院门诊及住院患者送检的血清样品共1200例，其中经临床确诊的有梅毒临床症状、TPPA阳性的梅毒患者血清300例;无基础疾病、无特异性疾病的临床症状、TPPA阴性的正常人血清900例。 　　

　　1.2标本收集所有标本均在被采血者空腹、静息1Qmin以上采集。真空采血管抽取静脉血5ml，于抽血当日3300r/min离心10min，分离出血清，-20℃冷冻保存。检测当日，将所有标本取出放于室温，全部融化后颠倒混匀，备用。 　　

　　1.3仪器与试剂①国产CLIA试剂:梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(化学发光法)，北京科美东雅生物技术有限公司生产，批号:110411，有效期:12个月。②ELISA试剂:梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)，上海科华生物技术有限公司生产，批号:110129，有效期:12个月。③雅培梅毒诊断试剂:梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(化学发光法)，雅培公司生产，批号:111207，有效期:12个月。④仪器:北京科美东雅生物技术有限公司生产的CDM-I型化学发光仪。 　　

　　1.4检测方法对1200份血清样品分别用CLIA试剂盒和ELISA试剂盒测定梅毒螺旋体抗体，分别计算两种测定方法的特异性、灵敏度和符合率。 　　

　　1.5统计学方法所有数据采用北京科美东雅生物技术有限公司生产的CDM-I型化学发光仪软件系统及MicrosoftExcel软件处理。 　　

　　2结果
　　2.1准确性应用评价方法和对照方法分别检测2份梅毒螺旋体抗体阳性参考品，结果均为阳性。 　　

　　2.2敏感度、特异度分别用评价方法和对照方法测定300例梅毒螺旋体抗体阳性样本，评价方法阳性结果299例，900例正常人血清样本检测结果为，评价方法阴性899例(表1)，对不符合标本用雅培梅毒诊断试剂进行检测，结果为梅毒患者为阳性，正常人为阴性，评价方法出现1例假阳性及2例假阴J吐。由表1计算评价方法的性能特点为:敏感度为99.3%，特异度为99.9%，阳性结果预测值为99.7%，阴性结果预测值99.8%。 　　

　　2.3与ELISA方法比较应用对照方法与评价方法同时对300例梅毒螺旋体抗体阳性和900例正常人血清样品进行梅毒螺旋体抗体测定，比对两种实验方法的结果，见表2。评价方法与对照方法对比，阳性符合率98.7%，阴性符合率99.8%。总符合(有效)率为99.5%.
　　2.4评价方法的重复性选取阳性标本2例，用稀释法确定评价方法的“临界值”(样本测定结果阴性、阳性各占50%的稀释浓度)。分别配制“临界值”120%浓度的样本，用评价试剂分别检测20次，结果临界值+20%浓度的样本测定结果阳性率为，临界值一20%浓度的样本测定结果阴性率为，说明评价试剂有良好的重复性。 　　

　　3讨论
　　化学发光法是近年来发展迅速的一种新型检验方法，具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、稳定性高、无放射性及毒性危害等特点，有报道CLIA检测各期梅毒患者梅毒抗体的敏感性均较高，为98.7%一100.0%，特异性为99.9%}6}。但由于目前市场上多为进口试剂，成本、收费均较高，影响了其推广应用。该国产CLIA试剂盒采用一步法双抗原夹心免疫分析模式，属于梅毒螺旋体抗原结合试验。使用多种TP特异性蛋白抗原制备固相抗原，辣根过氧化物酶(IIRP)标记的相同蛋白作为标记抗原，与样品中的梅毒螺旋体抗体形成双抗原夹心。经洗涤后，加人化学发光底物液，于5一30min内钡」定其发光强度(RLU)，根据临界值判断样品中是否含有梅毒螺旋体(TP)特异性抗体。本实验中应用的化学发光法检测梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒为国产试剂盒，经过与ELISA方法比对，结果基本上一致，其阳性符合率98.7%，阴性符合率99.8%。 　　

　　总符合(有效)率为99.5%，达到临床检测应用的要求。由于其为国产试剂，克服了进口试剂价格昂贵的缺点，降低了临床应用的成本。本实验CLIA方法出现了1例假阳性及2例假阴性，假阳性标本S/CO值较低，这可能与CLIA敏感度较高有关，假阴性标本进行稀释后，再次用评价方法检测，结果为阳性，这可能是与存在钩状效应有关。化学发光免疫分析技术是EL<S技术的新发展，通过化学发光底物取代传统的显色底物。其特点是酶促增强发光信号，并稳定和延长发光信号时间，既保持了发光免疫分析的高灵敏度，又克服了传统发光酶免疫分析所发信号时间短的缺点。 　　

综上所述，我们认为试验中应用的国产化学发光法检测梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒因其速度快、自动化程度高，结果准确、成本低廉、便于标准化、自动化、网络化质量管理等优势，而且化学发光检测方法较为先进，是临床检测发展的方向，可作为ELISA检测方法的替代方法。 　　

　　4参考文献 　　

　　中国疾病预防控制中心公共卫生监测和信息服务中心. 2007年12月中国甲乙丙类传染病疫情动态简介[J].{H}疾病监测,2008,(1):4.doi:10.3784/j.issn.1003-9961.2008.01.002.
　　中华人民共和国卫生部. 中国预防与控制梅毒规划(2010 ～2020年)[M].北京:卫生部,2010.
　　刘建侠. 梅毒的实验室诊断[J].{H}哈尔滨医药,2005,(1):51-52.doi:10.3969/j.issn.1001-8131.2005.01.055.
　　程艳杰,王广杰,王旭. 梅毒螺旋体特异性抗体检测方法的实验室评价[J].{H}中华检验医学杂志,2006,(3):272.doi:10.3760/j:issn:1009-9158.2006.03.029.
　　周渭衍,裘新明,洪为松. 梅毒胶体金法和TPPA诊断梅毒的比较研究[J].{H}浙江临床医学,2004.324-325.
　　冯烨. 梅毒血清学三种检测方法的比较[J].{H}实用临床医学,2004,(2):106.doi:10.3969/j.issn.1009-8194.2004.02.071.