尿道及其他显色培养基快速分离鉴定常见泌尿道感染致病菌的临床应用

           〖JP2〗尿路感染是仅次于呼吸系统感染的第二大感染性疾病,国内外研究均表明，尿路感染的病原菌主要是以革兰阴性杆菌为主[1-3]。尿路感染是革兰阴性杆菌侵入血流的主要途径之一，尿路感染的并发症革兰阴性杆菌败血症[4]。革兰阴性杆菌(GNB) 败血症是机体的严重感染,病死率高达22.7%～40%。为防止尿路感染的并发症——革兰阴性杆菌败血症发生，对尿路感染的关键在于早诊断、早治疗[5]。现〖JP〗将3 606 例利用尿道显色培养基分离鉴定常见泌尿道致病菌[6],现报告如下。
 

           1资料与方法

           1.1菌株来源：分离培养自2012年6月~2013年6年我院按临床标本采集要求送检的住院及门诊尿液培养标本，去除同一患者所获重复菌株。共收集标本3 606份尿液培养标本，患者年龄1~103岁，其中男2 036份，女1 570份。

           1.2仪器与试剂：①仪器采用法国生物梅里埃公司ATBE xpression自动细菌鉴定仪及配套的鉴定药敏相关试条、试剂。 ②血平板、麦康凯平板、尿道显色平板、酵母样真菌显色平板、氧化酶、凝固酶、触酶试剂等均购自法国梅里埃公司。 ③标准参考菌株购自广东省临床检验中心，分别为大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌A TCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212。

           1.3方法：按照《全国临床检验操作规程》第3版尿培养的方法[7]，用一次性尿液定量接种环接种尿液标本于血平板、麦康凯平板、尿道显色平板、酵母样真菌显色平板后，在35℃放置24 h，观察菌落形态、颜色、计数和 /或涂片、革兰染色，革兰阴性杆菌菌落计数>105 CFU/ml、革兰阳性球菌计数>104 CFU/ml 者为泌尿道感染,菌落计数未达到以上标准需结合尿常规和临床症状综合分析[8]，按显色平板说明判断常见泌尿道致病菌[9]，用ATBex[x]pression自动细菌鉴定仪进行验证。
 

           2结果
           2.1菌株分布：2012年6月~2013年6月尿培养分离的病原菌分布：大肠埃希菌461株(49.1%);肺炎克雷伯菌83株(8.9%);粪肠球菌83株(8.9%) ;奇异变形杆菌53株(5.6%);普通变形杆菌49株(5.2%);阴沟肠杆菌26株(2.8%);产气肠杆菌21株(2.2%);屎肠球菌15株(1.6%);鹑鸡肠球菌11株(1.2%);铜绿假单胞菌10株( 1.1%);洋葱假单胞菌9株(1.0%);恶臭假单胞菌8株(0.9%);金黄色葡萄球菌8株(0.86% );表皮葡萄球菌7株(0.8%);腐生葡萄球菌6株(0.7%);白色念珠菌6株(0.6%);热带念珠菌5株(0.5%);光滑念珠菌2株(0.2%);阿萨丝胞酵母1株(0.1%);其他病原菌21株(2. 14%)。

           2.2直接在显色培养基鉴定的致病菌与经ATB鉴定仪验证结果. 2.3比较两种鉴定方法的一致性：采用Kappa一致性检验分析两种方法对常见泌尿道感染致病菌鉴定的一致性(K=0.779)，认为两种方法对常见泌尿道感染致病菌鉴定结果一致性好。 
           3讨论

           显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。这些相应的显色底物是由产色基因和微生物部分可代谢物质组成，在特异性酶作用下，游离出产色基因显示一定颜色，直接观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定[10-11]。尿道及其他显色培养基，能快速鉴定常见泌尿道感染的致病菌，且与ATB仪鉴定总的相符率为96%，采用Kappa一致性检验，K=0.779，两种方法对常见泌尿道感染致病菌鉴定结果一致性好。虽然《抗菌药物临床应用管理办法》(卫生部令第84号)已于2012年2月13日经卫生部会议通过，自2012年8月1日施行。根据抗菌药物的安全性、疗效、细菌耐药性、价格等因素，将抗菌药物分三级：非限制性使用级、限制性使用级与特殊使用级。二级以上医院应当根据实际需要，建立符合实验室生物安全要求的临床微生物室。使用限制性使用级抗菌药物治疗的住院患者抗菌药物使用前微生物检验样本送检率不低于50%，使用特殊使用级抗菌药物治疗的住院患者抗菌药物使用前微生物检验样本送检率不低于80%。由于微生物检验收费低、试剂成本贵、操作繁琐、鉴定时间长，造成微生物检验报告时间(TAT)长，影响临床抗菌药物实际应用，很多基层医院都不想开展微生物检验，如基层医院能灵活应用显色培养基，即节省部分鉴定试剂成本，又缩短鉴定时间，保证了微生物检验报告的时效性。因15%的泌尿道感染致病菌是混合感染，为大肠埃希菌和粪肠球菌，如不用显示培养基，只用单一的血平板，因杆菌大且生长得快，会将粪肠球菌掩盖，认为只有一种杆菌生长，即鉴定不好且又药敏试验错误，误导临床用药及以后的经验性用药。要把精力放在微生物培养上，不能在一个血平板上接种2份标本，且要增加接种培养基的种类，避免漏检。如忽视培养而将重点放在鉴定上，再好的仪器都没用，因培养不到或是混合培养，导致错误的鉴定。错误的鉴定导致错误的药敏试验，形成抗生素耐药假象，造成抗生素的浪费。细菌的鉴定要结合显示培养基、血平板、药敏试验等综合判断，才能为临床用药及以后的经验性用药提供科学的理论依据。所有的检验方法都有他的局限性，尿道及其他显色培养基只对常见的泌尿道感染的致病菌，其他的如洋葱假单胞菌、摩根摩根菌、产气肠杆菌等需要细菌鉴定仪进行鉴定。由于微生物不只存在于人体特定的感染部位，外界环境及人体的正常菌群等均会影响微生物检验结果。标本质量是保证检验结果准确的根本，其中分析前质量控制是发生检验结果错误概率高，由于存在标本质量不良的隐匿性、难控制性，凸显了标本的正确留取的重要性，日常工作密切联系临床，医、技、护和谐沟通，进行全程质量控制。
 

           4参考文献

           [1]李贵玲，韩崇旭，曹艳，等.南京地区206-2009年中段尿培养病原菌分布及耐药性变迁[J].中华医院感染学杂志，2011，21(3)：592.
 

           [2]朱德妹，汪复，胡付品，等.2010年中国CHINET尿液标本中细菌的分布和耐药监测[J].中国感染与化疗杂志，2012,12(4):241.  

           [3]史俊艳，赵锐，马小军，等.社区获得性急性尿路感染病原菌药物试验结果分析[J].中国感染与化疗杂志，2010,10(3):188.
 

           [4]60例大肠埃希菌尿路感染合并革兰氏阴性杆菌败血症[J].中华医院感染学杂志，2012，22(3)：1048.
 

           [5]郑文华.UF-1000i分析仪在尿路感染诊断中的应用[J].临床合理用药，2012,5 (31):130.

           [6]谢国艳，高志生.快速鉴定大肠埃希菌方法的临床适用性的评估[J].现代检验医学杂志，2011,26(4);96.

           [7]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东面大学出版社，2006：23-44. 

           [8]张秀珍，朱德妹.临床微生物检验问与答[M].北京：人民卫生出版社，2008：62 -66.

           [9]法国生物梅里埃公司显色培养基应用说明书.

           [10]陈东科，孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱[M].北京：人民卫生出版社，2 011:135-137.

           [11]李仁惠.679株念珠菌属的鉴定及药物敏感性分析[J].临床肺科杂志，2010,15 (8):1192.

           [收稿日期：2014-01-10编校：徐强]