髓样分化因子88酵母双杂交诱饵质粒构建及鉴定

髓样分化因子88( MyD88)是Toll样受体信号通路中的一个关键接头分子[1]。我们构建MyD88蛋白酵母双杂交诱饵质粒，用于筛查与其相互作用的蛋白。
一、材料与方法

1．分子克隆：通过反转录·聚合酶链反应( RT-PCR)获得MyD88片段，PCR产物及pCBKT7质粒分别采用Nde I和EcoR I进行双酶切并纯化后，16℃连接过夜后转化大肠杆菌， 进行双酶切和测序鉴定。
2．酵母菌株AH109表型鉴定：AH109分别接种在SD/-His，SD/-leu，SD/-Trp3种营养缺陷平板上，30℃培养4—6d。
3．诱饵质粒毒性和自激活活性检测：采用醋酸锂方法将pGBKT7-MyD88重组质粒转化酵母，分别采用酵母形态表观检测和生长速度动态观测来检验诱饵质粒pGBKT7-MyD88毒性。 采用SD/-His/-leu/-Trp和SD/-Trp/X-a-Gal平板检测自激活活性。
二、结果
1．分子克隆结果：双酶切和测序鉴定结果均表明pGBKr17_MyD88重组质粒构建成功。
2．酵母表型鉴定：3种培养基上的AH109均未生长，表明基因型未发生改变。
3．毒性和自激活检测：重组质粒表达的蛋白对酵母AH109没有毒性，也无自激活活性。
三、讨论
本研究成功构建了酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-MyD88．并确定该质粒可以适用于酵母双杂交系统后续实验，为进一步研究提供了实验依据。